美国药典usp51翻译

药品中防腐剂的抗菌效力测定与评价

为了保证药品的安全性和有效性,药品必须符合相应的卫生学要求。但有些药品的有效组分没有

足够的抗菌防腐能力,在这些成品制剂中则往往需要加入适当的防腐剂以有效控制微生物的生长。然而,防腐剂的抑菌效果往往会受到多个因素的干扰,如防腐剂的化学结构及其浓度、药品有效组分的物理和化学特性、制剂形式、包装材料(容器及其密封件)以及存贮条件等;并且所有的防腐剂都是有毒物质,因此就临床用药的安全性而言,在药品制剂的质量标准中制订防腐剂的含量测定和效力

测定是非常重要的。[1～3]

本文结合美国和欧洲药典最新版,详细介绍了药品抗菌防腐效力试验的试验方法,包括检测对象的细致分类和试验用菌悬液的制备,并分析了两部药典中对防腐剂抗菌防腐效力的合格标准的异同点。1 进行抗菌防腐效力测试的药品分类

药品的微生物学质量控制要求主要是依据给药

途径而确定的。同样,药品的防腐效力要求也取决于其给药途径。表1综合了美国药典和欧洲药典对

抗菌防腐效力试验的药品分类。

表1 抗菌防腐效力测试的药品分类[4,5]

药品类别

品种概述

Ⅰ注射剂,其它以水溶液为介质或载体的肠外用药品

(乳化剂、耳科用药、无菌鼻科用药和眼科用药等)

Ⅱ局部用水性制剂、非无菌鼻科药品、非无菌乳剂类产品,还包括黏膜用药品。Ⅲ水性口服制剂(抗酸剂除外)Ⅳ

水性抗酸剂

注:欧洲药典将III类和IV类合并为III类。

2 试验用菌株的种类、保存及制备方法

用于防腐效力测试的菌株应涵盖微生物的各个类别,如细菌、酵母菌和霉菌等,所选用的菌株应是常见致病菌的代表。表2列举了美国药典和欧洲药典推荐用于药品防腐剂抗菌防腐效力测试的菌株及其主要制备条件。

表2 抗菌防腐效力测试用菌株及其制备条件[4,5]

菌株名称/编号

培养基

培养温度

制备培养时间

检测培养时间

大肠埃希氏杆菌1 Escherichiacoli ATCC8739

TSA/TSB23215±215℃18～24小时3～5天铜绿假单胞菌 Pseudomonasaeruginosa ATCC9027TSA/TSB23215±215℃18～24小时3～5天金黄色葡萄球菌 Staphylococcusaureus ATCC6538TSA/TSB2

3215±215℃18～24小时3～5天白色假丝酵

母 Candidaalbicans A TCC10231SDA/SDB3

2215±215℃44～52小时3～5天黑曲霉 Aspergillusniger ATCC16404 SDA/SDB

3

2215±215℃

6～10天

3～7天

注:11欧洲药典未将大肠埃希氏杆菌(Escherichiacoli)列为防腐剂效力测定的常规试验用菌种,但建议对口服产品的防腐效力检测增加该

菌种;并建议增加Zygosaccharomycesrouxii(IP2021192)对含糖量高的口服产品的检测。

21TSA/TSB分别指大豆胰蛋白胨琼脂(Soybean-CaseinDigestAgar)和大豆胰蛋白胨肉汤(Soybean-CaseinDigestBroth)。基准配方,

一升培养基内含消化性胰酪蛋白1710克、消化性大豆酪蛋白310克、氯化钠510克、磷酸氢二钾215克、葡萄糖(C6H12O61H2O)215克、纯水加至1000毫升,用1N的氢氧化钠调节pH值,使灭菌后培养基pH=713±012。向TSB配方中再加入1510克琼脂后,即成TSA。

31SDA/SDB分别指萨布罗氏葡萄糖琼脂(SabouraudDextroseAgar)和萨布罗氏葡萄糖肉汤(SabouraudDextroseBroth)。基准配方,一

升培养基内含葡萄糖4010克、动物组织消化水解液和胰蛋白胨等比混合物1010克、加纯化水至1000毫升,用1N的盐酸调节pH值,使灭菌后培养基pH=516±012。向SDB配方中再加入1510克琼脂后,即

成SDA。

菌株的生理条件是影响试验结果的关键因素。

所有试验用菌株自菌种中心购买后的转种次数不得超过五代;菌种应于低温冷冻(宜在-30℃以下的冰箱或液氮内)保存。如果该菌种是用液体培养基培养的,保存前应将菌种的新鲜培养物(18～24

小时培养物)进行离心(离心速度通常约为4000转/分钟),然后用约二十分之一体积的无菌肉汤(TSB)将沉降的细胞悬浮于其中,最后向其中加入等体积的无菌甘油(浓度为20%),混匀后即予冷冻保藏。如果该菌株是用固体培养基培养,则将

・295・中国药事2005年第19卷第10期

生长在琼脂表面的菌落(或菌苔)刮下来并收集于含10%甘油的无菌肉汤培养基(TSB)内,然后分装至若干支无菌小试管(115～210毫升,带螺旋盖帽)内,于低温下冷冻保存备用。使用时,取出一支小试管,并接种于相应的固体或液体培养基内培养并制备实验菌悬液。

表2列出了制备实验菌悬液时各菌种的要求。如该菌种系采用固体培养法培养,制备菌液时应用少量无菌生理盐水(3～5毫升)将琼脂培养

基表面的细菌细胞和白色念珠球菌细胞洗下来并收集于适当的容器中,再用无菌生理盐水将收集到的微生物细胞稀释至适当浓度(通常为1×108CFU・ml-1);但黑曲霉菌则需延长培养时间直至产生孢子,用少量含0105%聚山梨酯(吐温)80的生理盐水溶液(3～5毫升)将孢子淋洗下来并收集于一无菌容器内,再用无菌生理盐水将收集的孢子液稀释至适当浓度(通常为1×108CFU・ml-1)。用液体培养基培养的菌种于培养结束后(黑曲霉菌只能采用固体培养基培养),先用离心法将细胞沉降后,再用适量的无菌生理盐水溶液将细胞稀释至1×108

CFU・ml-1。细菌、酵母细胞和霉菌孢子的浓度通常都可采用比浊法来进行估测,但同时还采用平皿菌落计数法进行对照检查以确认比浊法的可靠性。制备

好的细菌和酵母细胞悬液宜在低温(2～8℃)下保存并于24小时内使用,但霉菌孢子悬液可于一周内使用。超过保存时间,则需重新制备。

[4]

3 测定方法[4,5]

测定时,可直接将制备好的新鲜(24小时之内)实验菌悬液无菌操作加入样品,如:采用无菌注射器刺入弹性胶塞内;如果直接接种不方便或是原容器内的样品量不足,也可无菌操作将足够量的样品加入一适当的无菌带帽小试管内,然后再向小试管中接入菌种。每个样品容器内只接一种试验菌悬液,并且菌悬液的加入量不得超过样品体积的110%,即如果容器内的样品量为100毫升,则加入的菌悬液体积不得超过110毫升。菌悬液与样品溶液经充分混匀后,实验菌株的细胞或孢