琼脂糖凝胶6FF使用说明
GST琼脂糖凝胶FF
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北京卓冠科技有限公司 北京市西城区德外大街 2 号 512 室
邮政编码：100011
TEL：62364123
FAX：62360884
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货号
产品名称
CS-A03-00 GST 琼脂糖凝胶 FF
CS-A03-01 CS-A03-02 CS-A03-03 CS-A03-04
GST 琼脂糖凝胶 FF GST 琼脂糖凝胶 FF GST 琼脂糖凝胶 FF GST 琼脂糖凝胶 FF
联系人：韦新桂
E-mail: weixingui@
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１、除去因离子交换作用吸附的蛋白，用 2-3 倍柱床体积 2M 的 NaCl 溶液淋洗柱子， 再反向淋洗。 ２、除去蛋白沉淀、疏水性蛋白，用 1M 的 NaOH 以 100cm/h 的速度淋洗柱子 1-2h， 再 反向淋洗。 ３、所有操作中，都要用至少 3 倍柱床体积的初始缓冲液洗柱子。 ４、除去强的疏水性蛋白和脂质等，用 4 倍柱床体积的 70%的乙醇或者 30%的异丙醇洗 柱子，再反向淋洗。 八、保存 在 20%乙醇，4℃下长期保存。
包装 1ml (预装 柱) 25ml
100ml
500ml
大包装
载量 mg/ml
≤10mg/ml
≤10mg/ml ≤10mg/ml ≤10mg/ml ≤10mg/ml
特性 及应用
平均粒 径(μm)
GST 及 GST 融 合蛋白
90
GST 及 GST 融 合蛋白
90
GST 及 GST 融 合蛋白
90
6%琼脂糖凝胶电泳
6%琼脂糖凝胶电泳
6%琼脂糖凝胶电泳是一种常用于分离和分析DNA和RNA分子的实验方法。
琼脂糖是一种生物学大分子，具有凝胶形态，通过制备不同浓度的琼脂糖凝胶，可以实现对不同大小的核酸分子的分离。
在6%琼脂糖凝胶电泳中，琼脂糖的浓度为6%，这意味着凝胶的孔道尺寸较大，适用于分离较大的核酸分子。
通过在凝胶中施加电场，DNA或RNA分子会根据其大小和电荷迁移至凝胶中不同位置。
较小的分子会迁移得更快，而较大的分子则迁移得更慢。
在电泳过程中，核酸分子会被染料着色以可视化分离结果。
常用的染料有溴化乙锭（ethidium bromide）和SYBR Green等。
分离完成后，可以使用紫外线或荧光显微镜观察凝胶上的核酸带。
6%琼脂糖凝胶电泳在生物学研究中广泛应用，可以用于检测DNA或RNA的大小、纯度和浓度，分离和鉴定DNA或RNA 片段，如PCR产物、限制性内切酶切割产物等。
Ni-琼脂糖凝胶6FF(His标签纯化树脂)说明书
Ni-琼脂糖凝胶6FF(His标签纯化树脂）说明书货号：P2010规格：5mL/10mL（凝胶体积）保存：4°C保存，有效期至少一年产品说明：Ni-NTA琼脂糖凝胶6FF是用于纯化6×His标签重组蛋白的一种纯化介质，它是由6%交联的Sepharose 耦连了一种四齿螯合剂NTA而得.它可用于在非变性或变性条件下纯化任何表达系统表达的6×His标签重组蛋白。
NTA，含有四个螯合区，较一般的三齿螯合剂能更好的结合Ni2+。
6×His可与Ni2+螯合，从而使His 标签蛋白结合在Ni-NTA纯化介质上，未结合的蛋白被洗涤下去，结合在介质上的蛋白经过一定浓度的咪唑或低pH缓冲液的温和洗脱下来，从而得到高纯度的目的蛋白。
该纯化介质与His标签蛋白具有极高的亲和力，可达5-20mg/mL。
可在非变性和变性条件下纯化任何表达系统所得的His标签蛋白。
纯化程序简单，所得的蛋白纯度可高达95%。
Ni-NTA可再生4-6次，重复使用。
本产品悬浮液为20%乙醇，已螯合Ni2+。
操作方法：A.非变性条件下抽提His标签蛋白1)准备细胞，接种，诱导表达。
收集细胞，置于-70°C或立即进行步骤2操作。
2)加入1/20细胞生长体积的NTA-0Buffer和PMSF。
PMSF使用的工作浓度为1mM现用现加。
3)将细胞悬浮起来，加入溶菌酶，混匀，冰上放置30分钟，超声或匀浆破碎细胞。
该步骤冰上操作。
4)加入10%Triton X-100,使终浓度为0.05%，充分混匀，冰上放置15分钟。
5)12000rpm/min(20,000×g以上)，4°C离心15分钟以上。
取上清，置于冰上备用或-20°C保存。
6)将NTA树脂装入合适的层析柱，层析用10倍NTA体积的NTA-0Buffer洗。
7)将样品加至NTA层析柱中，流速在15mL/h左右，收集穿透部分，用SDS/PAGE分析蛋白的结合情况。
链霉亲和素琼脂糖凝胶6FF使用说明
链霉亲和素琼脂糖凝胶6FF使用说明货号：S5810产品说明：链霉亲和素琼脂糖凝胶6FF利用生物素与链霉亲和素配体之间的相互作用纯化生物素或生物素化的蛋白、抗体等物质。
链霉亲和素与生物之间的亲和力很强，需要在变性条件下洗脱，链霉亲和素对亚氨基生物素的亲和力相对较弱，可以在pH9.5-11.0结合，pH4.0时洗脱，不需要使用变性剂所以能更好的保持亲和素偶联物的活性。
具体性能见表1。
性能指标基质4%琼脂糖微球配体链霉亲和素载量>120nmol/ml介质；生物素化白蛋白6mg/ml介质粒径（μm）45-165最大流速0.1MPa，1barPH稳定范围2-10储存缓冲液含20%乙醇的1×PBS储存温度2°C-8°C纯化流程：1.Buffer的准备所用水和Buffer在使用之前建议用0.22μm或0.45μm滤膜过滤。
生物素或生物素化物质的纯化：结合/洗杂Buffer：20mM NaH2PO4，0.15M NaCl，pH7.4洗脱Buffer：8M盐酸胍，pH1.5亚氨基生物素标签物质的纯化：结合/洗杂Buffer：50mM碳酸铵，0.5M NaCl，pH10.0洗脱Buffer：50mM碳酸铵，0.5M NaCl，pH4.02.样品准备上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和pH值，可以用结合/洗涤缓冲液对血清样品、腹水或细胞培养液稀释，或者样品用结合/洗涤缓冲液透析。
样品在上样前建议离心或用0.22μm或0.45μm滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。
3.样品纯化（1）将链霉亲和素琼脂糖凝胶6FF装入合适的层析柱，层析用5倍柱体积的结合Buffer 进行平衡，使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。
（2）将样品加到平衡好的链霉亲和素琼脂糖凝胶6FF中（保证目的蛋白与链霉亲和素琼脂糖凝胶6FF充分接触，提高目的蛋白的回收率），收集流出液。
ProteinG琼脂糖凝胶说明书
Version 11302010ProteinG-Sepharose Protein G 琼脂糖凝胶Cat. No. CW0012保存：2-8 ℃组分说明CW0012 CW0012A Cat.No.Volume 1 ml 5 mlose 本产品具有广谱IgG 结合、高Fc 段结合活性、高抗体吸附量和性，可重复多次使用。
左右），以利于维持抗体的生物活性，避免抗脱5-10个柱床体积，可洗脱脂类和疏水性较强的蛋白质，避免使亲和介质的载量下降、干扰亲和介质的应用效果。
产品简介本产品为Protein G 与Sephar 偶联后产物，可从血清，腹水，细胞培养上清和细胞抽提物中分离和纯化多种哺乳动物不同亚型的抗体或包含抗体Fc 片段的基因工程重组蛋白。
Protein G 是链球菌(group C 和G)细胞表面蛋白。
它与Protein A 类似，通过与免疫球蛋白的Fc 区相互作用，可结合大多数哺乳动物的IgG。
但两者结合特异性有所不同。
Protein G 对人IgG3，小鼠IgG1，大鼠IgG2a 等具有高亲和力。
天然Protein G 具有白蛋白和细胞表面结合域。
重组Protein G 去除了白蛋白和细胞表面结合域，以减少非特异性结合。
能稳定等特点注意事项1. 凝胶从冷室或冰箱中取出后在室温下缓慢振摇恢复到室温， 装柱， 避免产生气泡影响柱效。
2. 装柱时尽可能维持凝胶长径比为5：3-2：1，长径比过大将导致洗脱峰拖尾，洗脱体积增大；长径比过小将导致样品与填料接触时间短，吸附不充分，填料吸附蛋白量小。
3. 若上样液中抗体浓度过高，应使用平衡缓冲液稀释至1-2mg/ml，以免上样浓度过高影响柱效。
4. 可以采用降低上样时的流速来增加样品与填料接触时间从而提高纯化抗体量。
5. 凝胶用低 pH 缓冲液洗脱时间应尽可能短，洗脱后用中性缓冲液尽快中和至 pH 中性，以延长亲和介质的使用寿命。
6. 洗脱后，应立刻用如中和缓冲液将收集到的抗体溶液中和到中性（pH7.4体失活。
苯甲脒琼脂糖凝胶 FF使用说明
苯甲脒琼脂糖凝胶FF使用说明货号：S9390规格：25ml/100ml一、简介苯甲脒类物质是丝氨酸蛋白酶的广谱抑制剂，所以将这类物质偶联到琼脂糖凝胶6B上，可以从各种来源的样品中一步纯化胰蛋白酶、凝血酶、尿激酶、激肽释放酶、前激肽释放酶等丝氨酸蛋白酶。
苯甲脒琼脂糖凝胶由于应用新的活化方法所以流速高，非特异吸附少，而且填料粒度均匀，所以分离效果好，是纯化丝氨酸蛋白酶类最适合的填料。
二、亲和填料特性特点载量大，分辨率好，流速高，使用方便。
基质6%的交联琼脂糖凝胶配基苯甲脒配基密度7μmol/ml吸附载量13mg胰蛋白酶/ml填料的颗粒大小45-165μm最大流速300cm/hpH范围3-10，在位清洗时pH范围可到2-11保存温度+4~8℃保存液体20%乙醇三、适用范围本一步从各种样品中纯化丝氨酸蛋白酶类物质。
四、应用实例实验名称：苯甲脒琼脂糖凝胶FF分离尿激酶。
实验步骤：（1）苯甲脒琼脂糖凝胶FF装柱，1.6×20m，柱床体积为10ml（2）用缓冲液1平衡2-5个床体积，流速为2ml/min（3）取尿激酶粗品200mg溶解在20ml的缓冲液1中，用0.45μm的滤膜过滤，上样，流速为1ml/min（4）用缓冲液1再洗2-5个床体积，流速为2ml/min（5）最后缓冲液2进行洗脱，流速为2ml/min，收集洗脱峰，用SDS-PAGE纯化后的效果。
（6）用纯水洗5个柱床体积，然后分别用100mM，pH8.0Tris-HCl缓冲液含1M NaCl 和100mM,pH4.0的醋酸缓冲液含1M NaCl交替洗涤3次，再用纯水洗3个柱床体积，然后再用20%的乙醇流洗3个柱床体积，流速为2ml/min，柱子置于+4~8℃环境中保存。
（7）色谱图见图1，SDS-PAGE结果见图2。
缓冲液组成：缓冲液1：100mM pH7.4的PBS缓冲液；缓冲液2：100mM醋酸缓冲液，pH4.0。
也可以用这个填料特异去除各种融合蛋白酶切后的丝氨酸蛋白酶，例如凝血酶以及胰蛋白酶类蛋白酶。
CM-SepharoseFF使用说明
CM Sepharose Fast Flow 使用说明CM Sepharose Fast Flow是一种以琼脂糖凝胶为基质的弱阳离子交换剂，具有流速快、载量高等特征，适用于各种等电点的蛋白质分离。
该离子交换剂以羧甲基作为带电基团，在pH 6 ~ 13的范围内均处于带电状态，并在整个层析过程始终保持高容量。
A 理化性质：离子交换剂类型：弱阳离子离子载量：0.09 ~ 0.13 m mol / ml 填料颗粒结构：6%高度交联琼脂糖粒度（直径）范围：45 - 165 μm平均粒度：90 μm最大线性流速：750 cm / h ( 25℃，100 kPa，K50/30 FF柱，14-16 cm柱床高，流动相0.1 M NaCl )耐压上限：0.3 Mpa（3 bar，42 psi）工作pH范围： 6 - 13pH稳定性：长期：4 - 13在柱清洗：2 - 14对化学试剂的稳定性：对所有常用的水相缓冲液、1.0 M醋酸、1.0 M NaOH、8 M 尿素、8 M盐酸胍、乙醇、甲醇等稳定物理稳定性：因pH或离子强度的改变而引起的体积变化可忽略耐压热性：在0.1 M醋酸钠中，可承受121℃、30 min 的高压灭菌B 填料预处理：购买的CM Sepharose Fast Flow是预先溶胀好的，保存于20%乙醇中；使用前倾出20%乙醇溶液→加入初始buffer（buffer：沉淀填料= 1：3体积比）→得填料悬液。
注：初始buffer中不能含有使粘度显著增加的试剂。
C 装柱：将所有需要使用的仪器和试剂平衡至实验进行的环境温度；对填料悬液抽气；以buffer冲洗柱子两端的部件，排除气泡死角，尤其要确保滤网上无气泡；安装下端柱部件，关闭出水阀，使柱中存留几厘米的buffer；以连续的液流沿玻璃棒倾加填料悬液至柱中，玻璃棒下端抵靠柱内壁，尽量避免气泡的引入；立即以buffer充满剩余的柱体积，安装上端柱部件，并将其连接到泵；打开下端的出水阀，调节泵使流速合适，即装柱流速：建议≥6.7 cm/min（15 cm柱床高，25℃，低粘度buffer）；注：如果无法达到建议的装柱流速，可将泵调至最大流速；但在随后的层析洗柱的过程中，流速不能超过装柱流速的75%.保持装柱流速一段时间，至柱床高度恒定（大约需要流过3倍柱床体积的buffer）。
硼酸琼脂糖凝胶 FF使用说明
硼酸琼脂糖凝胶FF使用说明货号：CS-A08-01简介硼酸琼脂糖凝胶FF将硼酸类化合物偶联到交联及活化的琼脂糖凝胶上，该填料具有很高的化学稳定性。
硼酸能和1，2顺式二醇结合，所以硼酸琼脂糖凝胶可以用于糖类、核苷、核苷酸、核酸、肽及酶类的分离纯化，特别适合糖蛋白的分离纯化。
硼酸琼脂糖凝胶FF稳定性好，基团脱落少，使用寿命长，使用方便，应用广泛。
亲和填料特性：特点基团脱落少，结合特异性强基质4%的交联琼脂糖凝胶配基硼酸盐配基密度20μmol/ml吸附载量10mg亲和填料的颗粒大小45-165μm最大流速300cm/hpH范围3-10，在位清洗时pH范围可到2-13使用温度4℃~常温保存温度+4~8℃保存液体20%乙醇适用范围硼酸琼脂糖凝胶用于各种糖类、核苷、核苷酸、核酸、肽及酶类的分离纯化，特别适合糖蛋白的分离纯化。
亲和填料应用的注意事项：1、该凝胶从冷室或冰箱中取出后最好在室温下缓慢振摇恢复到室温，然后再装柱，以免产生气泡影响柱效。
2、吸附：pH8.5-10为避免离子交换的干扰，盐浓度10mM-500mM,缓冲液或者样品中不能有Tris及三乙醇胺类的物质，一些二价阳离子可以增加目标物质的吸附力。
一些非离子表面活性剂也可以加目标物质和填料的作用力。
3、洗脱：可以用pH4-6的缓冲液洗脱，也可以用1-100mM糖类竞争线性或阶段洗脱，例如用山梨醇、甘露醇等，其中Tris最有效4、上样样品必须与平衡柱子的缓冲液的pH、电导相同。
5、硼酸琼脂糖凝胶FF亲和填料的再生处理方法：先用0.1M Tris-HClpH5.0缓冲液洗3个柱床体积，然后用0.5M NaOH含2M NaCl流洗3个床体积,最后用20%乙醇洗3个床体积即可。
6、该亲和填料保存条件为20%乙醇，+4~8℃。
DEAE-琼脂糖凝胶FF
DEAE-琼脂糖凝胶FF货号：S8801规格：100mL 产品简介：DEAE-琼脂糖凝胶FF 是将二乙胺基乙基键合在快流速琼脂糖凝胶上形成的一种弱阴离子交换介质，具有优异的流动性能，广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的离子交换制备。
1理化指标项目指标离子交换基团-O-CH 2CH 2-N +(C 2H 5)2H离子交换类型弱阴离子，可交换离子Cl -基质6%交联琼脂糖蛋白质吸附容量95mgHSA/ml 介质总离子交换容量0.09~0.13mmol/ml 介质粒径45~165μm 最大流速*300cm/h 工作温度4~40℃耐压0.3MPapH 稳定性1~14(短时间)；3~12(长时间)pH 工作范围2~9化学稳定性所有常用的水相缓冲液；0.1mol/L 氢氧化钠；*检测条件：层析柱16mm×100mm *柱床高5cm，25℃，流动相为0.1mol/LNaCl。
2贮存产品应密封贮存在4℃~25℃（保存溶液为20%乙醇），通风、干燥、清洁的地方。
不能冷冻。
用过的柱子贮存在4℃（20%乙醇）。
3应用本产品具有高化学稳定性、高流速、高载量、好的机械性能、可在位清洗、多次重复使用等特点，非特异性吸附低，回收率高，适用于工业规模生产，适用于在pH工作范围内可形成负离子的生物大分子的分离纯化，广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的离子交换制备。
4使用方法4.1装柱1）将所有实验材料均需平衡至进行色谱层析操作的温度；2）实验所需要用到的缓冲液以及洗脱液进行脱气处理；3）DEAE-琼脂糖凝胶FF的储存液为20%乙醇，需要用去离子水彻底清洗掉保存液。
4）在柱子下端加入纯水装柱子，以排除气泡，将填料连续倒入柱子时，要用玻璃棒紧靠柱子内壁引流，以减少气泡的产生，让填料先自然沉降到填料体积不再变化，用上样的平衡液平衡柱后即可上样。
4.2平衡让平衡缓冲液以一定流速流过柱子，到流出液电导和pH不变。
Ni-琼脂糖凝胶6FF(His标签纯化树脂)预装重力柱说明书
Ni-琼脂糖凝胶6FF(His标签纯化树脂）预装重力柱说明书货号：YA2410规格：5mL/10mL/25mL（凝胶体积）保存：4°C保存，有效期至少一年。
产品说明：Ni NTA Beads6FF是以高度交联的6%琼脂糖凝胶为基质，配体与Ni NTA Beads相同，蛋白的载量可以大于40mg6×His-taggedprotein/ml介质；微球粒径为45–165μm。
Ni NTA Beads6FF除了可以耐受苛刻的试剂条件（多种还原剂、去污剂、高浓度变性剂等）外，因其耐压的基质，可以耐受最高0.3MPa的压力，更稳定，因此该产品更适合用于工业大规模蛋白的纯化，可以在相对较高的流速下，实现对目的蛋白的纯化。
本产品悬浮液为含20%乙醇的1×PBS，已螯合Ni2+。
操作方法：1、样品制备（1）细菌或酵母表达的蛋白1）挑取单菌落到LB培养基中，根据载体使用说明加入相应浓度的诱导剂诱导相应的时间。
2）表达结束后，将培养液转移到离心杯中，7,000rpm，离心15min收集菌体，然后加入1/10体积的Lysis Buffer和PMSF，PMSF在破碎前加入，最终浓度为1mM。
加入溶菌酶（工作浓度为0.2-0.4mg/ml，如果表达的宿主细胞内含pLysS或pLysE，可以不加溶菌酶），（同时也可加入其他蛋白酶抑制剂，但不能影响目的蛋白与树脂的结合）。
3）将菌体沉淀悬浮起来，（如果菌液浓度高，也可考虑加入10μg/ml RNase A和5μg/ml DNase I），混匀，放置于冰上，然后冰上超声破碎细胞，至菌液基本保持澄清。
4）将澄清的破碎液转移至离心管中，10,000rpm下，4度离心20-30分钟。
取上清，置于冰上备用或-20℃保存。
（2）酵母、昆虫和哺乳细胞分泌表达可溶性蛋白1）将细胞培养液转移至离心杯，5000rpm下，离心10min，收集菌体得上清，如上清中不含EDTA、组氨酸和还原剂等物质，即可直接加入柱子使用；如含有EDTA、组氨酸和还原剂等物质，需用1×PBS4℃下透析才能加入柱子。
蓝色琼脂糖凝胶6FF使用说明
蓝色琼脂糖凝胶6FF使用说明1.简介：蓝色琼脂糖凝胶6FF是一种高亲和力树脂，可用于从复杂混合物中富集蓝色亲和结合的蛋白质。
它基于琼脂糖凝胶的基础上改性而来，通过染色剂与蛋白质之间的非共价相互作用实现蛋白质的富集。
蓝色琼脂糖凝胶6FF的独特之处在于其特定的电荷和碱基结构，可以与蛋白质中的亚甲蓝酸、负荷硫酸氨基糖苷酸或负荷正聚乳酸等带负电的结构相结合。
2.成分和特性：-孔隙率：低孔隙率（通道直径为30到40纳米）-细胞尺寸：45微米至165微米（平均值为90微米）- 动态吸附容量：2-5mg蛋白质/mL凝胶-pH稳定范围：从2至14（长时间操作适宜pH范围为3至13）-化学稳定性：抗生素、有机溶剂和洗涤剂不会影响其性能3.使用前的处理：-悬浮剂混匀：使用前需充分摇匀瓶中的蓝色琼脂糖凝胶6FF悬浮剂，确保悬浮剂均匀分布。
-预处理：将凝胶悬浮剂转移到离心管中，离心5分钟以除去胶粒。
然后将上清转移到新离心管中，以准备使用。
-储存条件：凝胶悬浮剂应存放在4°C下，并避免光照。
4.工作条件：-缓冲液：通常使用PBS（磷酸盐缓冲液）或TRIS缓冲液。
缓冲液pH应调整到蓝色琼脂糖凝胶6FF最佳工作范围内。
-调节离心速度：在操作过程中，应根据蓝色琼脂糖凝胶6FF的体积来调整离心机的转速。
通常，在使用小尺寸离心管时以1000×g离心，使用大尺寸离心管时以500×g离心。
-使用管柱：建议使用适量的硅胶管柱来提高分离纯度和减少非特异性结合。
5.操作步骤：-第一步：根据需要的操作规模，将合适的量的蓝色琼脂糖凝胶6FF悬浮剂移入离心管中。
-第二步：离心，以去除胶粒。
将上清转移到新离心管中。
-第三步：将上清与样品混合，允许接触20至30分钟。
在混匀期间，染色剂和蛋白质发生非共价相互作用。
-第四步：离心混合物并收集上清液。
收集到的上清液中富集有蓝色亲和力的蛋白质。
-第五步：如需要，再次重复步骤三和步骤四，以提高纯度。
deaesephroseff说明及使用
D E A E s e p h r o s e F F说明及使用-CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1DEAE琼脂糖凝胶FF的详细资料：英文名称：DEAE Sepharose FFCAS号：57407-08-6级别：BR凝胶类型：离子交换填料，弱碱型结构成分：6%交联琼脂糖粒径： 45-165μm配基基团：diethylaminoethyl （二乙氨乙基）蛋白质吸附量：110mgHSA/ml凝胶总离子交换量：凝胶交换载量： Thyroglobulin/ml drained medium；110 mg HSA/ml drained medium；100mg α-lactalbumin/ml drained medium流速：300~600 cm/h;最大流速750 cm/h工作PH值：2-9工作温度：4-40℃PH稳定性：1~14 (短时间,在位清洗);2~12 (长时间）耐压：性状：白色微球,凝胶状、含20%乙醇，底部为乳白色胶体用途：生化研究、适用于各种带负性电荷生物大分子的浓缩纯化等、利用离子交换作用，应用于蛋白等生物分子的快流速高产量纯化等保存：2～8℃包装：100毫升/瓶，500毫升/瓶、1升/瓶等离子交换层析分离蛋白质??【实验目的】通过分离蚓激酶的实验，学习和掌握离子交换层析法的工作原理和离子交换介质的选择；了解离子交换树脂的处理及转型；学习该实验方法的筛选和基本操作技术。
【实验原理】离子交换层析是一种吸附层析，利用不同蛋白质表面电荷的差异而达到分离、纯化蛋白质的目的。
阴离子交换剂的电荷基团带正电，反离子带负电,因此这种交换剂可以与溶液中的负电荷化合物或阴离子进行交换反应；阳离子交换剂则反之。
【实验材料】Tris-HCl、1MNaClTris-HCl、蚓激酶粗提物、20%乙醇、1MNaOH、DEAE-SepharoseFastFlow柱、AKTApurifier液谱纯化系统、高速离心机、电子天平、试管、一次性滤器、2ml注射器、2mlEppendorf管、冲洗瓶、玻璃滤器【实验方法】1离子交换介质：选用HitrapDEAE-SepharoseFF阴离子交换层析柱。
琼脂糖凝胶6FF
琼脂糖凝胶6FF琼脂糖凝胶6FF是在琼脂糖凝胶6B的基础上经过两次交联形成的高交联基质，微球的化学稳定性及物理性能显著增强，刚性增加，流速更快，使产品处理时间大大缩短。
可用于生物大分子的凝胶层析。
1.外观本品为白色球状凝胶,无嗅、无味、无肉眼可见杂质。
2.理化指标项目指标基质6%交联琼脂糖排阻极限10000~4×106(球蛋白)形状球形粒径45~165μm最高流速300cm/h*耐压0.20MPapH适用范围2~14(短时间，在位清洗)，2~12(长时间)化学稳定性以下溶液中40℃下稳定：2mol/L NaOH；70%EtOH；30%异丙醇；30%乙腈；1%SDS；6mol/L盐酸胍；8mol/L尿素*检测条件：层析柱10mm×300mm*柱床高15cm,25℃,流动相为0.1mol/LNaCl3包装产品以聚胺酯瓶密封包装，外贴标签，注明“品名、体积、颗粒大小”等内容。
4贮存产品应密封贮存在4℃~25℃（保存溶液为20%乙醇），通风、干燥、清洁的地方。
不能冷冻。
用过的柱子贮存在4℃（20%乙醇）。
5注意事项本品应避免与氧化剂接触，避免长时间暴露在空气中。
6.运输运输中应避免日晒、雨淋、重压，严禁与有毒、有害物品混运。
7保质期5年。
8应用本产品具有很高的化学稳定性、高流速、较好的机械性能、可多次重复使用等特点，非特异性吸附低，回收率高，可用有机溶剂及1~2mol/L的NaOH在位清洗，适用于工业规模生产，广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的凝胶色谱纯化。
8.1装柱凝胶过滤介质的使用对装柱的要求较高，为了保证分离效果，一般通过柱子上加一个装柱器来使分离柱装满凝胶，或采用带有轴向加压装置的柱子。
凝胶柱床一般高于60cm。
装柱效果可用染料或丙酮-水溶液进行检验。
以下过程为通用介质装填过程。
若为带有轴向加压装置的柱子，可在柱床稳定后将柱床压紧，接好管路。
（1）让所有的材料和试剂达到室温。
琼脂糖凝胶电泳用 6
琼脂糖凝胶电泳用6×Quadricolor-loading Buffer使 用 说 明 书TaKaRa Code：D608包 装 量 ： 1 ml ×5支6×Quadricolor-loading Buffer组成EDTA 30 mMGlycerol 40%Xylene Cyanol FF 0.05%Cresol red 0.1%Bromophenol Blue 0.05%Orange G 0.1%保 存 ：室温制品说明6×Quadricolor-loading Buffer是在琼脂糖/聚丙烯酰胺凝胶电泳中示踪核酸样品的6倍浓度的四色Loading Buffer。
向电泳样品溶液中加入1/5量即可进行凝胶电泳，并可通过Loading Buffer中的四种色素带判断电泳样品的迁移情况。
本Buffer中含有色素染料Xylene Cyanol FF，Cresol red，Bromophenol Blue及Orange G，在琼脂糖凝胶电泳时，四种染料对应的色素带分布均匀，示踪范围广，如：在0.8%琼脂糖凝胶中（在0.5×TAE中），Xylene Cyanol FF约与8000 bp的双链线型DNA的迁移率相同，而Orange G则与100 bp的双链线型DNA的迁移率相同。
另外，各色素带的迁移率依据电泳所使用的琼脂糖的浓度不同而存在差异,不同的电泳缓冲液对迁移率也有影响。
本缓冲液配制组成合理，四条色素在可见光下清晰可见，可以相对指示出大致的核酸迁移情况，且无核酸酶污染，相对于普通的loading buffer具有一定优势，是实验室常用的琼脂糖凝胶电泳的上样用缓冲液。
质量标准◆ 核酸外切酶活性检测5 μl 6×QuadriColor-loading Buffer与1 μg λ-Hin d III digest (dye-)在37℃水浴中保温12小时，未检出核酸外切酶活性。
Ni-琼脂糖凝胶6FF使用说明
Ni-琼脂糖凝胶6FF使用说明货号：P2010规格：5mL/10mL（凝胶体积）保存：4°C保存，有效期至少一年。
产品说明：Ni NTA Beads6FF是以高度交联的6%琼脂糖凝胶为基质，配体与Ni NTA Beads相同，蛋白的载量可以大于40mg6×His-taggedprotein/ml介质；微球粒径为45–165μm。
Ni NTA Beads6FF除了可以耐受苛刻的试剂条件（多种还原剂、去污剂、高浓度变性剂等）外，因其耐压的基质，可以耐受最高0.3MPa的压力，更稳定，因此该产品更适合用于工业大规模蛋白的纯化，可以在相对较高的流速下，实现对目的蛋白的纯化。
Ni-琼脂糖凝胶6FF悬浮液为含20%乙醇的1×PBS，已螯合Ni2+。
操作方法：1、样品制备（1）细菌或酵母表达的蛋白1）挑取单菌落到LB培养基中，根据载体使用说明加入相应浓度的诱导剂诱导相应的时间。
2）表达结束后，将培养液转移到离心杯中，7,000rpm，离心15min收集菌体，然后加入1/10体积的Lysis Buffer和PMSF，PMSF在破碎前加入，最终浓度为1mM。
加入溶菌酶（工作浓度为0.2-0.4mg/ml，如果表达的宿主细胞内含pLysS或pLysE，可以不加溶菌酶），（同时也可加入其他蛋白酶抑制剂，但不能影响目的蛋白与树脂的结合）。
3）将菌体沉淀悬浮起来，（如果菌液浓度高，也可考虑加入10μg/ml RNase A和5μg/ml DNase I），混匀，放置于冰上，然后冰上超声破碎细胞，至菌液基本保持澄清。
4）将澄清的破碎液转移至离心管中，10,000rpm下，4度离心20-30分钟。
取上清，置于冰上备用或-20℃保存。
（2）酵母、昆虫和哺乳细胞分泌表达可溶性蛋白1）将细胞培养液转移至离心杯，5000rpm下，离心10min，收集菌体得上清，如上清中不含EDTA、组氨酸和还原剂等物质，即可直接加入柱子使用；如含有EDTA、组氨酸和还原剂等物质，需用1×PBS4℃下透析才能加入柱子。
Butyl-S Seplife FF 说明书 产品介绍
Butyl-S Seplife FF说明书1.产品介绍Butyl-S Seplife FF层析介质是蓝晓科技自主研发的一种新型疏水层析介质，它是将硫丁基键合在6%琼脂糖凝胶上，利用疏水相互作用实现目标产物的纯化分离，非特异性吸附低，可以在较低的盐浓度结合和洗脱相对较强的疏水分子，常用于重组乙肝疫苗的纯化。
2.性能介绍产品牌号Butyl-S Seplife FF外观白色球状凝胶基质Seplife6FF配基硫丁基形状球形耐压流速（cm/h）＊250-400cm/h（在0.1Mpa）粒径（μm）45～165蛋白吸附量﹥26mg（HSA）/ml工作温度4～40℃pH稳定性3~13（长期），2~14（短期在位清洗[CIP]）在以下液体中稳定：所有常用的水相缓冲液，1mol/L氢氧化钠；化学稳定性70%乙醇；50%乙二醇；8M尿素；6mol/L盐酸胍；1mM HCl 耐热性121℃，0.1M NaCl溶液30min应用乙肝疫苗纯化分离＊检测条件：层析柱16mm×300mm；＊柱床高15cm；温度25℃；流动相为0.1mol/L NaCl。
3.使用方法3.1装柱装柱按照标准操作规程操作。
必须保证每种材料都处于工作温度，凝胶装柱前需要脱气。
3.2平衡使用2~5倍柱床体积的平衡缓冲溶液平衡柱子，直至流出液的电导和pH同上样缓冲液的电导和pH完全一致。
平衡缓冲液一般是高盐浓度的缓冲液，如0.02~0.05mol/L的PBS中加1~2.5mol/L（NH4）2SO4等。
3.3上样（1）样品用平衡液配制，浑浊的样品要离心和过滤以后上样。
（2）一般情况是让目标产品结合在柱子上，用平衡液洗去杂质，再选择一种洗脱液洗下目标产物。
（3）介质对样品组分吸附的程度取决于样品的疏水性质、流动相的离子强度和温度。
盐浓度大、温度高或样品组分疏水性强，介质对组分吸附牢。
3.4洗脱采用降低盐浓度使吸附的生物分子被洗脱下来。
添加表面活性剂或者有机溶剂可加强洗脱，最常用的是低盐浓度缓冲液，如0.02~0.05mol/L的PBS。
DEAE-产品说明
Bestarose DEAE-琼脂糖凝胶FF产品说明书DEAE-琼脂糖凝胶FF是将二乙胺基乙基键合在快流速琼脂糖凝胶上形成的一种弱阴离子交换介质。
广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的离子交换制备。
1. 外观本品呈白色，球状、无嗅、无味、无肉眼可见杂质。
2. 理化指标*3．包装产品以聚胺酯瓶密封包装，外贴标签，注明“品名、体积、颗粒大小”等内容。
4．运输运输中应避免日晒、雨淋、重压，严禁与有毒、有害物品混运。
5．贮存产品应密封贮存在4℃~25℃(保存溶液为20% 乙醇)，通风、干燥、清洁的地方。
不能冷冻。
用过的柱子贮存在4℃(20% 乙醇)。
6.注意事项本产品避免与氧化剂接触；避免在pH值< 4时长时间暴露(一周,20℃)。
7.保质期：5年。
8.应用本产品具有高化学稳定性、高流速、高载量、好的机械性能、可在位清洗、多次重复使用等特点，非特异性吸附低，回收率高，适用于工业规模生产，适用于在pH工作范围内可形成负离子的生物大分子的分离纯化，广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的离子交换制备。
下面简要介绍介质的使用过程。
8.1 装柱⑴让所有的材料和试剂达到室温。
配制初始缓冲液(平衡液)和洗脱缓冲液。
⑵根据柱子大小取所需量的凝胶，清洗掉20%乙醇，抽干，用初始缓冲液(按凝胶：缓冲液=3：1的比例)配成匀浆。
匀浆作脱气处理。
⑶将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位(液面略高于滤膜)，务必使底端无气泡。
⑷用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。
打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。
⑸打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过，使柱床稳定。
用2~3倍柱体积的缓冲液平衡柱子。
8.2平衡让平衡缓冲液以一定流速流过柱子，到流出液电导和pH不变。
平衡液是低浓度的缓冲溶液，如Tris 、PBS等。
8.3上样⑴样品用平衡液配制，浑浊的样品要离心和过滤后上样。
蓝晓生物科技Ni Seplife FF（TED）说明书
Ni Seplife FF（TED）说明书1.产品介绍Ni Seplife FF（TED）是蓝晓科技自主研发的一种新型亲和层析介质，其利用样品组分中的组氨酸与金属离子的亲和吸附进行分离纯化。
镍螯合高流速琼脂糖层析介质（TED）特异性好，流速快，螯合金属离子更稳定不易脱落，可以在含有EDTA及DTT的情况下进行目的蛋白高效的纯化，批次重复性好，颗粒粒度均匀。
可用于分离纯化能被金属离子吸附的多肽、蛋白、核苷酸、磷酸化蛋白及带His 标签的重组蛋白。
2.性能介绍产品牌号Ni Seplife FF（TED）外观球状凝胶，无臭无味基质Seplife 6FF形状球形最高流速（cm/h）≧370耐压（MPa）0.3粒径（μm）45～165离子结合量（Ni2+ umol/ml）：~25pH稳定性3~13（长期）；2~14（短期，在位清洗[CIP]）在常用水相溶液中稳定：0.01M NaOH；0.01M HCl；6M盐酸胍(24h)，化学稳定性1M NaOH(24h)，10mm EDTA(24h)，100mmEDTA(2h),5mm 应用适用His 标签的重组蛋白纯化3.使用方法3.1 装柱装柱按照标准操作规程操作。
必须保证每种材料都处于工作温度，凝胶装柱前需要脱气。
3.2平衡用2~5个柱床体积的初始缓冲溶液进行平衡，直至电导率、pH值等参数不变。
3.3上样（1）样品一般溶解于pH6～8的初始缓冲液中，提高上样缓冲液的pH值可以增大载量。
（2）常用缓冲液有10～100mmol/L磷酸钠缓冲液、20～200mmol/LTris-HCl缓冲液等。
（3）缓冲液中一般要加入0.15～0.5mol/L的NaCl以消除离子交换作用。
（4）初次使用镍螯合琼脂糖凝胶时，推荐使用50mmol/L PBS（50 mmol/L NaH2PO4，0.5 mol/L NaCl，pH 7.4）作为初始缓冲液。
3.4洗脱洗脱一般分为以下几种方法：（1）降低pH洗脱：大多数蛋白在pH 6～4会被洗脱下来（也可以在pH 3～4），缓冲液可以是醋酸钠、柠檬酸和磷酸盐缓冲体系。
igg琼脂糖凝胶6ff实验室用途
igg琼脂糖凝胶6ff实验室用途下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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igg琼脂糖凝胶6ff是一种常用于实验室的琼脂糖凝胶，其具有多种实验室用途。
Epoxy活化琼脂糖凝胶FF
Epoxy 活化琼脂糖凝胶FFEpoxy-Activated Agarose产品编号：C500078包装规格：5 g/10 g产品简介Epoxy 琼脂糖凝胶FF 是活化好的填料，它采用平均粒径为90 μm 的4%高度交联琼脂糖凝胶，表面用大分子糖链接枝，使它有更高的比表面积和更好的生物兼容性，用它合成的亲和填料，可避免蛋白之间位阻以及蛋白和填料的位阻干扰，使其同等配基下有更高载量及更高的分辨率。
由于比表面积大，平衡和洗脱的时间也更短。
它经过接枝即使是纯化病毒，抗体等大分子的物质，载量基本保持不变。
可以在水相或者有机相中偶联，提供的该产品为半干粉填料。
产品特点1.偶联条件温和（pH 8~10，温度4~45°C ，时间1~16 h ），偶联效率高。
2.填料不需要处理，直接计算合适的量用于偶联，缩短时间。
3.保存时间长，-20°C 可以保存2年，不能受潮。
4.刚性强，耐压性好，流速快（最高流速300 cm/h ，可耐受3 bar 压强）。
5.可偶联含有氨基、巯基、羟基的多糖，蛋白，核酸，抗体等配基，应用范围广。
6. 偶联后制备的亲和填料寿命长，流速快，特异性高。
运输和保存条件室温运输，收到后-20°C 保存，保质期两年。
操作步骤用Epoxy 琼脂糖凝胶FF 偶联牛血清白蛋白（BSA ）为例 1.取100 mg 的BSA 溶解于10 mL 的0.25M 的碳酸钠缓冲液（pH 9.0）中。
2.称取4 g 的Epoxy 琼脂糖粉末（4 g 干的活化的填料经完全溶胀为5~6 mL 凝胶树脂），然后用50 mL 水抽滤清洗三次。
3.将4 g 的溶胀后的Epoxy 琼脂糖加入溶解后的BSA 溶液中混合，在摇床上振荡，25°C 偶联6 h 。
4.然后加50 mg 甘氨酸，再反应6 h 已封闭剩余的基团。
5. 偶联了BSA 的填料可以装在柱子中，然后用1 M 的NaCl 溶液洗10个柱床体积，收集装柱子的液体以及清洗柱子的溶液测定BSA 的总量，再用纯水冲10个柱床体积，最后将填料在20%乙醇溶液中保存。
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琼脂糖凝胶6FF使用说明
琼脂糖凝胶6FF是在琼脂糖凝胶6B的基础上经过两次交联形成的高交联基质，微球的化学稳定性及物理性能显著增强，刚性增加，流速更快，使产品处理时间大大缩短。
可用于生物大分子的凝胶层析。
1.外观
本品为白色球状凝胶,无嗅、无味、无肉眼可见杂质。
2.理化指标
项目指标
基质6%交联琼脂糖
排阻极限10000~4×106(球蛋白)
形状球形
粒径45~165μm
最高流速300cm/h*
耐压0.20MPa
pH适用范围2~14(短时间，在位清洗)，2~12(长时间)
化学稳定性以下溶液中40℃下稳定：
2mol/L NaOH；70%EtOH；30%异丙醇；30%乙腈；1%SDS；6mol/L盐酸胍；8mol/L尿素
*检测条件：层析柱10mm×300mm*柱床高15cm,25℃,流动相为0.1mol/LNaCl
3包装
产品以聚胺酯瓶密封包装，外贴标签，注明“品名、体积、颗粒大小”等内容。
4贮存
产品应密封贮存在4℃~25℃（保存溶液为20%乙醇），通风、干燥、清洁的地方。
不能冷冻。
用过的柱子贮存在4℃（20%乙醇）。
5注意事项
本品应避免与氧化剂接触，避免长时间暴露在空气中。
6.运输
运输中应避免日晒、雨淋、重压，严禁与有毒、有害物品混运。
7保质期
5年。
8应用
本产品具有很高的化学稳定性、高流速、较好的机械性能、可多次重复使用等特点，非特异性吸附低，回收率高，可用有机溶剂及1~2mol/L的NaOH在位清洗，适用于工业规模生产，广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的凝胶色谱纯化。
8.1装柱
凝胶过滤介质的使用对装柱的要求较高，为了保证分离效果，一般通过柱子上加一个装柱器来使分离柱装满凝胶，或采用带有轴向加压装置的柱子。
凝胶柱床一般高于60cm。
装柱效果可用染料或丙酮-水溶液进行检验。
以下过程为通用介质装填过程。
若为带有轴向加压装置的柱子，可在柱床稳定后将柱床压紧，接好管路。
（1）让所有的材料和试剂达到室温。
配制缓冲液。
凝胶层析上样、平衡和洗脱只用一种低盐浓度的缓冲液。
（2）选择一根一定直径的柱子，长约30~60cm,根据柱子大小取所需量的凝胶（约为柱床体积的1.15倍），清洗掉20%乙醇，抽干，用缓冲液（按凝胶：缓冲液=3：1的比例）配成匀浆。
（3）将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位（液面略高于滤膜），务必使底端无气泡。
（4）用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。
打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。
（5）打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过，使柱床稳定。
用缓冲液平衡柱子，到柱床稳定。
（6）最好用一个装柱器辅助装柱。
装完后柱床上端轻轻刮平，上好柱头。
8.2平衡
让缓冲液以一定流速流过柱子，到流出液电导和pH不变。
8.3上样
（1）样品用缓冲液配制，浑浊的样品要离心和过滤后上样。
含盐量过大、浓度过小的样品要先做处理，再上样。
（2）介质对样品组分的分离是按组分分子量大小进行的，分子量大的先流出来。
（3）上样体积约为柱体积的1~2%，越小分离越好。
8.4洗脱
用缓冲液洗脱，洗脱中保持流速、缓冲液组成不变。
8.5再生
一般用缓冲液洗到平衡，可再次使用。
8.6注意
在装柱、使用和保存柱子的时候，始终要避免柱子流干气泡进入。
若有失活蛋白质或脂类物质在再生时洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。
8.7在位清洗
（1）对于以离子键结合上去的蛋白，可以用2M NaCl去除。
（2）对沉淀蛋白、对以疏水性结合的蛋白或脂类，可用1M NaOH去除。
（3）对强疏水性结合的蛋白、脂类等，用4~10倍柱体积的70%乙醇或30%异丙醇清洗，但要注意有机溶剂的浓度以梯度的方式逐渐增加，否则容易产生气泡。
清洗完毕后，用至少3倍缓冲液平衡柱子。
8.8注意
在装柱、使用和保存柱子的时候，要避免柱子流干气泡进入。
8.9去热源
用0.5M的氢氧化钠清洗柱子5~6小时或用0.1M的氢氧化钠24小时。
或用以下方法步骤去除：
（1）2倍柱体积的70%乙醇；
（2）2倍柱体积50mM Tris-HCl pH7.5；。