氧化应激与NSC-741909诱导的肿瘤细胞凋亡

具有 良好 的逆 转 Ｐ一糖 蛋 白介 导 ＭＤ Ｒ作用 ，不 仅能 干扰 Ｐ一糖 蛋 白的转运 功能 ，而且 抑制 Ｐ一蛋
白表 达水 平 ，但对 ＭＤ １ 录水 平无 影响 。此外 ，Ｈ１ Ｒ 转 显著 抑制 Ｍ Ｋ Ｅ Ｋ信 号通路 ，提 示 Ｈｌ有 Ｅ —Ｒ
可能作 用 于 Ｐ一糖 蛋 白降解过 程 ，有待 于百度文库 一步研 究 。
在药物 处 理后 ３ ０分 钟 即可检 测到 ，处理 后 ６小时 可高 出基 础 水平 ６— ８倍 。此外 ，Ｎ Ｃ一 ４ ９ ９ Ｓ ７ １０
诱导 的 Ｒ Ｓ产生 可被 抗 氧化 剂 如 去 甲二氢 愈 创 木 酸 （ Ｄ Ａ） ，７一二 羟 基香 豆 素 （ｅｃｌ Ｏ Ｎ Ｇ 、６ ａｓｕｅ —
平 变化 。结果 ：Ｍ Ｆ结果 显示 ２一ＩＩ Ｈ１ Ｔ Ｏｘ Ｍ 具有 一定 的细胞 毒作 用 ，而 ０５Ａ 对 所有 细胞 的 ． Ｉ Ｈ１ Ｍ 生长 无影 响 ，因 此 选 择 （．２ ，０２ ，０ ５ｘ ０ １５ ．５ ． ｌ Ｍ） Ｈ １为 无 毒 浓 度 评 价 其 逆 转 ＭＤ Ｒ活 性 。逆 转 ＭＤ Ｒ实验表 明 ，Ｈ１ 够 有 效 逆 转 Ｐ一糖 蛋 白介 导 肿瘤 多药 耐 药 并 具 有 良好 的 剂 量 依 赖 关 系 。 能 ０５ 能 够完全 逆 转 Ｋ ｖ０ ． Ｍ Ｈ１ Ｂ２０细 胞对 Ｖ Ｒ，Ａ Ｒ，Ｔ Ｘ 的耐药 作 用 ，逆转 倍 数 分 别 为 ５ ． ， Ｃ Ｄ Ａ ４ ０
活性 与 Ｊ Ｋ去 磷酸 化 受 抑 制 引起 的 Ｊ Ｋ 持 续 激 活 相 关 ，然 而 其 确 切 机 制 尚不 完 全 清 楚 。 由于 Ｎ Ｎ Ｊ Ｋ通 常被 细胞 内氧 化应 激而 激 活 ， 因此 我 们 假设 活 性 氧 （ Ｏ ） 可 能参 与 了对 Ｊ Ｋ去磷 酸 化 Ｎ Ｒ Ｓ Ｎ 的抑 制 以及 Ｎ Ｃ一 ４ ９ ９的细胞 毒性 作 用 。方法 ：Ｒ Ｓ测 定 采 用 了可透 过 细胞 膜 的非 荧 光化 合 Ｓ ７ １０ Ｏ
物 Ｈ Ｄ ＦＤ ２ Ｃ —Ａ并 进 行 流 式 细 胞 分 析 。细 胞 活 力 实 验 采 用 磺 酰 基 罗 丹 明 Ｂ （ Ｒ Ｓ Ｂ） 法 。Ｎ Ｃ一 Ｓ ７ １０ 导 的细胞 凋亡 与信 号分 子改 变分别 采 用流式 细胞 术 、免疫 荧光 以及 Ｗｅｔｒ ｌｔ ４９ ９诱 ｓ ｎｂｏ 方法 进 ｅ 行分 析 。结果 ：用 Ｎ Ｃ～７ １０ Ｓ ４９９处理 可诱 导敏感 细胞 产生 大 量 的 Ｒ Ｓ以及 明显 的 ＭＡ Ｋ磷酸 酯 Ｏ Ｐ 酶 一１和 一 ７聚 集 ，此作 用具有 时 间和剂 量依 赖 性 ，然 而在 抗性 细 胞株 则 未见 该作 用 。Ｒ Ｓ产 生 Ｏ
主垦 塑逼迅
生箜三土土鲞筮三翅
底 物阿 霉素 、罗丹 明 １３的蓄积作 用 及 它对 Ｐ一糖 蛋 白外 排功 能 的影 响 。Ｗｅｔ ｎｂｏ 方 法 检 测 ２ ｓ ｒ ｌｔ ｅ
Ｋ Ｂ，Ｋ ｖ０ Ｂ ２ ０，ＭＣ ７ Ｆ一 ，ＭＣ Ｆ一７ ａｒ细胞 Ｐ一糖 蛋 白表 达 水 平 ，同 时 检 测 Ｈｌ对 Ｋ ｖ０ ／ｄ Ｂ ２ ０细 胞 Ｐ一 蛋 白表达及 对 ＭＥ 糖 Ｋ—Ｅ Ｋ信 号通 路 的影 响 。Ｒ Ｒ Ｔ—Ｐ Ｒ方 法 检测 Ｐ一糖蛋 白 ｍＲ Ａ表 达水 Ｃ Ｎ
２． ８４，５ ． 。 同时 ，０ ５ ｍ Ｈ ０１ ． １ １完全 逆转 Ｍ Ｆ一 ／ ｄ 细 胞对 Ｄ Ｘ 的耐药作 用 ，部分 逆转 ＭＣ Ａ Ｃ ７ ａｒ Ｏ Ｆ一 ７ ａ ｒ 胞对 Ｖ Ｒ，Ｔ Ｘ 的耐 药 作 用 ，逆 转倍 数分 别 为 １ ６ ８ ４ ８ ０ １ ／ｄ细 Ｃ Ａ ２ ． ，２ ． ，１ ． 。蓄 积 实 验表 明 Ｈｌ 可 以显著 增加 阿 霉 素 、罗 丹 明 １ ３在 耐 药 细胞 内 的蓄 积 ，并 具 有 良好 的 剂 量 依 赖 关 系 。此 外 ， ２ Ｈ１ 够 剂 量 依 赖 性 的 抑 制 Ｐ一糖 蛋 白介 导 Ｋ ｖ ０ 能 Ｂ ２ ０细 胞 对 罗 丹 明 １ ３的外 排 作 用 。 Ｈ１处 理 ２ Ｋ ｖ０ Ｂ ２ ０细胞 ４ ８小 时后 ，能 显著 降低 Ｐ一糖 蛋 白表 达 ，但 并 不 影 响 Ｐ一糖蛋 白 ｍ Ｎ Ｒ Ａ表 达水 平 。 同时 ，Ｈ １能够 明显抑 制 活化状 态 的 ＰＭＥ — Ｋ，ＰＥ Ｋ表 达 ，下调 ＭＥ — Ｒ —Ｒ Ｋ Ｅ Ｋ信 号 通路 。结 论 ：Ｈ１
中国药理通讯 ２ １ ００年第 二十七卷第二期
ｔ） ｉ 、黄芩 素 （ ａ ａ ｉ） 和二 羟基 桂 皮 酸 （ａｅ ｃ ） 预 处 理 而 阻 断 ，且 这 些抗 氧化 剂 也 可 ｎ ｂｉ ｌｎ ｃｅ ｃｆ ｉ ａｉ ｃ ｄ
显著 抑制 Ｎ Ｃ一７ １０ Ｓ ４ ９ ９诱 导 的 Ｊ Ｋ激 活 和肿 瘤 细 胞 凋亡 。结论 ：我们 的结 果 证 明 ，氧 化应 激 与 Ｎ Ｎ Ｃ一 ４ ９ ９的抗 肿 瘤活性 密 切相 关 ，Ｎ Ｃ一 ４ ９ ９诱 导 的 Ｒ Ｓ产 生 及 随后 的 Ｊ Ｋ持 续激 活 是 Ｓ ７ １０ Ｓ ７ １０ ’ Ｏ Ｎ Ｎ Ｃ一 ４ ９ ９介 导 的抗肿 瘤作 用 的主要 机 制之一 。 Ｓ ７ １０
氧化应激 与 Ｎ Ｃ一 ４ ９ ９ 导 的肿瘤细胞凋亡 Ｓ ７ １０ 诱
魏 晓莉 。 郭薇 吴 淑红 王丽 黄鹏 刘 劲松 方炳 良
军事 医学科 学 院毒物 药物研 究所 美 国德州 ＭＤ安 德逊癌 症研 究 中心
北京 休 斯顿
１０５ ０ ８０ Ｔ ７３ Ｘ７００
目的 ：Ｎ Ｃ一７ １０ Ｓ ４９９是一 种新 型抗 肿 瘤 制 剂 ，可 有效 抑 制包 括 肺 癌 、结 肠 癌 、乳 腺 癌 、卵 巢癌 以及 肾癌 等在 内的多种 肿瘤 细 胞 株 的生 长 增殖 。我们 前 期研 究 显 示 Ｎ Ｃ一 ４９９的抗 肿 瘤 Ｓ ７ １０