菌株筛选方法

第二章餐厨垃圾堆肥产酶菌株筛选

2 材料与方法

2.1 材料

2.1.1 实验材料

1）筛选材料：HM菌剂（河南恒隆态生物工程股份有限公司）；EM菌剂（江西天意集团）；金宝贝菌剂（北京华夏康源科技有限公司）；群林发酵剂（广西北海群林生物工程有限公司）。

2）发酵材料：餐厨垃圾（购自贵州大学南校区学生食堂）；稻草（购自铜仁市，晒干后粉碎至5mm左右）。

2.1.2 主要药品及试剂

2.1.3 实验仪器

电子分析天平（EL-2005）西特传感技术有限公司

高速台式离心机（TGL-161）Thermo公司

冷冻离心机（2-16k）德国eppendorf公司

标准型净化工作台上海锦星科学仪器有限公司

低温冰箱〔BCD-108E）风华电器厂

超低温冰箱(Forma-6C ULT) Thermo公司

调温调湿箱（WS/08-01）重庆试验设备厂

干燥箱（101-2）上海实验仪器总厂

自动三重水蒸馏器（SZ-97）上海亚荣生化仪器厂

高压灭菌锅（GMSX-280）英国阿斯太欧（Astell）公司

循环水浴锅（RET7）Thermo公司

电热恒温培养箱（DH3600) 天津泰斯特仪器有限公司

恒温摇床（SKY-2102C) 上海苏坤实业有限公司

高速组织捣碎机（DS-1) 上海标本模型厂

磁力双向搅拌器（90-1）上海亚荣生化仪器厂

pH计

ACS交直流两用电子计价秤昆明金瑞克电子衡器有限公司

双金属温度计（WSS-411）天津市新华热工仪表有限公司

河北铁狮磨浆机械有限公司

秸秆揉丝饲料粉碎多用机

（9R-30)

紫外分光光度计

2.1.6 培养基

1）初筛培养基

（1）细菌培养基（%）：牛肉膏0.3；蛋白胨1.0；氯化钠0.5；琼脂粉2.0；pH7.2 （2）霉菌培养基（%）：磷酸二氢钾0.1；七水硫酸镁0.05；蛋白胨0.5；葡萄糖1.0；琼脂粉2.0；孟加拉红0.03；pH自然；链霉素30μg/m L

（3）乳酸菌培养基（%）：蛋白胨1；牛肉膏1；酵母膏0.5；柠檬酸二铵0.2；葡萄糖2.0；吐温80 0.1；乙酸钠0.5；三水磷酸氢二钾0.2；七水硫酸镁0.058；七水硫酸锰0.025；琼脂粉2.0；pH6.2

（4）放线菌培养基（%）：可溶性淀粉2；氯化钠0.05；硝酸钾0.1；磷酸氢二钾0.05；七水硫酸镁0.05；七水硫酸亚铁0.001；重铬酸钾0.015；琼脂粉2.0；pH7.4；青霉素3μg/ml

2）复筛培养基

（1）产淀粉酶筛选培养基（%）：可溶性淀粉0.2；蛋白胨1.0；酵母膏0.5；磷酸氢二钾0.3；七水硫酸亚铁微量；七水硫酸镁微量；琼脂粉2.0；pH7.0

【陈秋红,孙梅,施大林,等.益生菌酪酸菌CB-7发酵培养基及培养条件的研究.科学试验与研究[J].2009,4:7-10,21】

（2）产脂肪酶筛选培养基（%）：硫酸铵0.1；磷酸氢二钾0.1；氯化钾0.05；七水硫酸镁0.01；橄榄油1.0；聚乙烯醇0.1；琼脂粉2.0；pH8.5

【刘敏,曹志军,焦艳芬,等. UHT 乳中产耐高温脂肪酶嗜冷菌的研究[J]. 内蒙古农业大学学报.2008,29(1):230-233】

（3）产纤维素酶筛选培养基（%）：七水硫酸镁0.01；羧甲基纤维素钠1.5；氯

化钙0.01；磷酸二氢钾0.05；硫酸铵0.2；磷酸氢二钾0.2；pH自然

【刘胜贵,严明,邹娟,等.纤维素降解真菌的筛选及其产酶条件[J]. 中国农学通报,2011,27(7):102-106】

3）产酶发酵液

（1）产淀粉酶发酵液（%）[1]：可溶性淀粉0.5；蛋白胨0.5；酵母膏0.5；氯化钠0.1；七水硫酸亚铁微量；七水硫酸镁微量；pH7.0（48h培养）

【陈秋红,孙梅,施大林,等.益生菌酪酸菌CB-7发酵培养基及培养条件的研究.科学试验与研究[J].2009,4:7-10,21】

（2）产脂肪酶发酵液（%）：蛋白胨2.0；葡萄糖0.58；橄榄油乳化液4；硫酸铵0.1；七水硫酸镁0.05；磷酸氢二钾0.1；pH自然（72h培养）

【胡朝阳,韦晗宁,李春苑,等.产脂肪酶菌株的筛选及酶学特性研究[J]. 广西农业生物科学,2006,25(3):261-268】

（3）产纤维素酶发酵液：A液：葡萄糖0.4g；七水硫酸镁0.25g；CMC-Na 0.5g；水89mL; B液：磷酸氢二钠6.0g；氯化钠0.5g；磷酸二氢钾3.0g；氯化铵1.0g；水100mL; C液：氯化钙0.11g；水100mL

灭菌后10mLB液+1mLC液+89mLA液即为发酵液

【雷正玉,何力,王朝元,等.草鱼体内产纤维素酶菌株的筛选及产酶条件的研究[J]. 微生物学杂志,2007,27(4):54-57】

4）基础培养基（%）：

蛋白胨1.0；酵母膏0.5；氯化钠1.0；琼脂粉2.0；pH7.0

2.1.7 溶液配制

0.5%淀粉溶液配制：

0.5g可溶性淀粉加入10mL水混合成糊状，加入95mL沸水，微沸几分钟。静置、冷却，取上清即得。

0.1mol/L H2SO4溶液配制：

取10.9mL浓硫酸定容至100mL，即为1mol/LH2SO4溶液。取10mL，1mol/LH2SO4溶液定容至100mL，即为0.1mol/L的H2SO4溶液。

碘液的配制：

称取2.0g碘化钾溶于10mL蒸馏水中，加入1.0g碘，迅速搅拌使其溶解后加水定容至300mL。即0.1mol/L的卢卡氏碘液；取0.4mL 0.1mol/L碘液定容至100mL即得0.4mmol/L碘液。