滤膜法测定水中粪大肠菌群_张正兴

样 （如 水 样 含 菌 数 较 多 ，可 减 少 过 滤 水 样 量 ，或 将 水 样 稀 释 ）
注入滤器中，打开滤器阀门，在负 "0# 大气压下抽滤。
;0D08 培 养 水 样 滤 完 后 ，再 抽 气 约 #N，关 上 滤 器 阀 门 ，取
下 滤 器 ，用 灭 菌 镊 子 夹 取 滤 膜 边 缘 部 分 ，移 放 在 *<= 培 养
塑料袋内，浸 到 880#9恒 温 水 浴 里 ，培 养 !!H!8.。 粪 大 肠 菌
群在此培养基上菌落为蓝色，非粪大肠菌群菌落为灰色至
奶油色。
;0D0# 菌 落 计 数 对 可 疑 菌 落 转 种 J= 培 养 基 ，880#9培 养
!!H!8.，如 产 气 则 证 实 为 粪 大 肠 菌 群 。 计 数 被 证 实 的 粪 大 肠
实用医药杂志 !""# 年 "$ 月第 !! 卷第 "$ 期 %&’( ) *+, - %.’&/0123 !!4!""#5"$ 620"$
输血杂志，!"""4 ;D（;）：#" 8 曹 凤4季 阳4黄如欣4等0 四川和福建两省部分地区献血者和危
险人群中 BX@15# ? $感染状况调查0 中国输血杂志4 ;II$4 ;;Y!Z[
基 上 ，滤 膜 截 留 细 菌 面 向 上 ，滤 膜 应 与 培 养 基 完 全 贴 紧 ，两
者 间 不 得 留 有 气 泡 ，然 后 将 平 皿 倒 置 ，放 入 880#9隔 水 式 培
养箱内培养 !!H!8.。如使用恒温水浴，则需用 塑 料 平 皿 ，将
平 皿 盖 紧 ，或 用 防 水 胶 带 贴 封 每 个 平 皿 ，将 培 养 皿 成 叠 封 入
;"" T收稿日期：!""#5"#5;$U
· FDD · T本文编辑：韩仲琪U
滤膜法测定水中粪大肠菌群
张正兴 付 勇 杜玉明 （济南军区疾病预防控制中心，山东济南 !#"";8）
·预防医学·卫生学·
T关键词U 滤膜法 测定 T中图分类号U V;$80;
粪大肠菌群 T文献标识码U W
粪大肠菌群系指一群需氧或兼性厌氧的 75无芽胞杆 菌 ，在 880#9培 养 （!8:!）. 能 发 酵 乳 糖 ，并 产 酸 产 气 的 一 组 微生物。!""; 年颁布实行的《生活 饮 用 水 水 质 卫 生 规 范 》将 粪 大 肠 菌 群 的 检 测 列 入 了 常 规 必 检 项 目 。 部 队 平 战 时 ，饮 用 水 水 源 一 旦 受 到 人 、畜 粪 便 的 污 染 ，将 导 致 腹 泻 等 肠 道 传 染 病 的 暴 发 流 行 。 为 此 ，我 们 试 用 滤 膜 法 对 我 区 部 分 水 源 水 中 粪大肠菌群进行了检测。 ; 材料与方法 ;0; 原理 将水样通过孔径为 "08#!/ 的滤膜过滤，细 菌 被 阻留在膜上，将滤膜贴在 *<= 培养基上，880#9培养后，计数 典型菌落。 ;0! 试剂与仪器 ;0!0; *<= 培 养 基 在 ; """/3 蒸 馏 水 中 先 加 入 玫 红 酸 （;"> ? @）的 氢 氧 化 钠 溶 液 〔( （6’AB）C"0!/23 ? @〕;"/3，混 匀 后 ，取 #""/3 加 入 琼 脂 ;#> 煮 沸 溶 解 ；于 另 外 #""/3 蒸 馏 水 中 ，加 入 胰 胨 ;">，多 胨 #>，酵 母 浸 膏 D>，氯 化 钠 #>，乳 糖 ;!0#>，胆 盐 D 号 或 混 合 胆 盐 ;0#>，加 热 溶 解 ，倒 入 已 溶 解 的 琼 脂 ，混 匀 调 EB 为 F08，加 入 苯 胺 蓝 "0!> 煮 沸 ，迅 速 离 开 热 源，待冷却至 G"9左右，制成平板，不可高压灭菌。制好的培 养基应存放于 !H;"9环境，不超过 IG.。本培养基也可不加 琼脂，制成液体培养基，使用时加 !/3 于灭菌吸收垫上，再将 滤膜置于培养垫上培养。 ;0!0! J= 培养基 将胰蛋白胨 !">，乳糖 #>，D 号胆盐或混 合胆盐 ;0#>，磷酸氢二钾 8>，磷 酸 二 氢 钾 ;0#>，氯 化 钠 #>，溶 解于 ; """/3 蒸馏水中，分装到带有倒管的试管中，;;#9高 压灭菌 !"/KL，最终 EB 为 G0I:"0!。 ;0!0D 仪 器 滤 器 、滤 膜 ，孔 径 "08#H"0G#!/、抽 滤 设 备 、无 齿镊子、恒温水浴箱（880#:"0!）9、塑料培养皿 #"//M;!//。 ;0D 分析步骤 ;0D0; 滤 膜 灭 菌 将 滤 膜 放 入 烧 杯 中 ，加 入 蒸 馏 水 ，置 于 沸 水浴中煮沸灭菌 D 次，;#/KL ? 次。前 ! 次煮沸后需更换水洗 涤 !HD 次，以除去残留溶剂。 ;0D0! 滤器灭菌 用点燃的酒精棉球，火焰灭菌。 ;0D0D 过滤水样 用无菌镊子夹取灭菌滤膜边缘部分，将粗 糙面向上，贴放在已灭菌的滤床上，固定好滤器，将 ;""/3 水
菌落数，计算每 ;""/3 水中的粪大肠菌密度。粪大肠菌菌落
数 （=<O ? ;""/3）C所计得的粪大肠菌菌 落 数M;"" ? 过 滤 的 水
样体积（/3）。标准要求粪大肠菌群在每 ;""/3 水样中不得检
出。
!结果
我 们 对 部 队 送 检 的 自 备 水 源 水 D! 份 、 城 镇 自 来 水 ;I
份，共计 #; 份水样分别进行了检测，共有 F 份水样中检测出
了粪大肠菌群，检出的最高值为 !G(PQ ? ;""/3 水样，#; 份水
样粪大肠菌群合格率为 $G0!FR。自备水源检出 G 份，合格率
为 $;0!#R；城镇自来水检出 ; 份，合格率为 I80F8R。统计学
处理结果自备水源水与城镇自来水间合格率不存在显著性
败。
在实验培养过程中，放进培养皿后对恒温水浴箱应密
闭 ，否 则 ，将 造 成 水 浴 箱 内 空 气 和 水 温 的 不 一 致 ，对 检 测 结 果
造成影响。
T 收 稿 日 期 ：!""#5"!5"!U
T 本 文 编 辑 ：韩 仲 琪U
差 异 （"!C;0$D;!，!S"0;）。
D讨论
滤 膜 法 测 定 水 中 粪 大 肠 菌 群 的 培 养 过 程 中 ，如 果 使 用 恒
温 水 浴 箱 ，一 定 要 注 意 塑 料 培 养 皿 的 密 封 ，切 勿 使 培 养 皿 进
水 ，因 为 培 养 皿 一 旦 进 水 ，将 无 法 显 示 培 养 结 果 ，导 致 测 定 失