益生菌检测方法

（规范性附录）

测定用培养基A.1 生化试验培养基

蛋白胨 10g；

牛肉膏 10g；

酵母膏 3g；

葡萄糖 10g；

KH

2PO

4

2g；

NaCl 1g；

琼脂 20g；

蒸馏水 1000ml；

PH值 6.6-6.8。

A.2 麦芽汁琼脂培养基

12°Be麦芽汁 1000ml；

KH

2PO

4

2g；

琼脂 15g。

A.3 MRS琼脂培养基：

酪蛋白胨 10.0g；

牛肉浸膏 10.0g；

酵母浸膏 5.0g；

葡萄糖 5.0g；

乙酸钠 5.0g；

柠檬酸二胺 2.0g；

Tween80 1.0g；

K 2HPO

4

2.0g；

MgSO

4·7H

2

O 0.2g；

MnSO

4·H

2

O 0.05g；

CaCO

3

20.0g；

琼脂 15.0g；

蒸馏水 1000ml；

PH 6.8。A.4 LB培养基：

胰蛋白胨 10g；

葡萄糖 5g；

酵母浸出物 5g；

氯化钠 10g；

琼脂 20g；

蒸馏水 1000ml；

pH 7.0。

（规范性附录）

嗜酸乳酸菌活菌检测方法

B.1 材料

B.1.1 仪器

恒温培养箱、厌氧罐、超净工作台、分析天平、恒温水浴锅、匀浆器、可调式移液器、便携式高压灭菌锅、pH 电极、酒精灯及常规玻璃仪器 B.1.2培养基：MRS 琼脂培养基（A.3） B.2 方法：采用活菌平板计数法

B.2.1样品处理：称取1ml 样品溶于99ml 灭菌生理盐水中，充分震荡摇匀，摇匀后依次稀释至一定浓度

B2.2平板制备与培养：将附录A 的培养基于三角瓶中灭菌（15磅、15分钟）,培养基冷却至50℃左右，取0.1ml 稀释好的样品于灭菌平皿中，倾注培养基，摇匀，凝固后置于厌氧罐。每个样品应不少于3个平板，于恒温培养箱中37℃培养72小时。

B2.4计数：用计数器计算菌落数，有效计数范围30-300个菌落。每ml 样品中含乳酸菌数量=每个平板平均菌落数×稀释倍数×10(cfu)

B2.5菌落形态：菌落圆形、白色、周围有透明圈。 B2.6 不符合上述形态特征的为杂菌并计数。

B2.7判定标准：每个稀释样至少3个平板，每个平板中菌落均匀，有效计数范围为30-300个。

B2.8 杂菌计数

杂菌率按公式（1）计算：

M 1 =

10011⨯+n

n n (1)

式中：

M 1——样品杂菌率，%； 1n ——杂菌数，亿/g ；

n ——功能微生物的有效活菌数，亿/g 。

附录C

（规范性附录）

产朊假丝酵母菌检测方法

C.1 材料：

C1.1仪器

恒温培养箱、超净工作台、分析天平、恒温水浴锅、匀浆器、可调式移液器、便携式高压灭菌锅、pH 电极、接种针、涂布棒、酒精灯及常规玻璃仪器 C1.2培养基：麦芽汁琼脂（A.2） C.2 方法：采用活菌平板计数法

C2.1平板制备：将上述培养基于三角瓶中灭菌（10磅、20分钟）,倒于灭菌平皿中，凝固后备用

C2.2样品处理：称取1ml 样品溶于99ml 灭菌生理盐水中，充分震荡摇匀，摇匀后依次稀释至一定浓度。

C2.3涂布平板：取0.1ml 稀释好的样品均匀涂布于平板中，每个样品应不少于3个平板，于恒温培养箱中30℃培养24-48小时。

C2.4计数：用计数器计算菌落数，有效计数范围30-300个菌落。每克样品中含芽孢杆菌数量=每个平板平均菌落数×稀释倍数×10(cfu)

C2.5菌落形态：菌落圆形、白色或灰白色、表面湿润

C2.6不符合上述形态特征的为杂菌并计数。

C2.7判定标准：每个稀释样至少3个平板，每个平板中菌落均匀，有效计数范围为30-300个。

C2.8杂菌计数

杂菌率按公式（2）计算：

M 2 =

10022

22⨯+n n n (2)

式中：

M 2——样品杂菌率，%； n 2——杂菌数，亿/g ；

n 22——功能微生物的有效活菌数，亿/g 。