无菌灌装过程验证剖析

验证方案会签单

验证委员会审批

目录1 引言

1.1 验证项目小组成员及责任

1.2 验证工作中部门责任

2 概述

3 验证的目的

4 依据

4.1 生产相关文件

4.2 主要设备

5 验证项目

6 污染率计算

7 验证周期

8 附件

1 引言

1.1 验证项目小组成员及责任

1.1.2 责任

验证项目小组组长：组织进行验证方案的设计、起草；验证过程的组织、协调、保证验证按预期的计划完成，提出验证报告。

验证项目小组成员：分别负责落实方案实施中各部分验证的具体工作。

1.2 验证工作中部门责任：

验证小组：组织编写验证方案，领导协调验证项目的实施，协调验证委员会及专家组的工作，对验证过程的技术、质量负责，参加验证方案的会签、终审和批准，参加验证报告的批准。

生产部：负责组织协调并保证每批产品的生产全过程，严格按照本方案实施。

质量管理部：负责验证计划的组织落实、验证过程监控、结果评价及设备、设施的微生物限度、培养基取样及药液准备、成品取样；负责验证过程的检验、测试及结果报告。

设备动力部：负责在公用系统、生产设备、设备维修及校正等各项工作中提供及时可靠的支持和服务。

物料管理部：负责为验证过程提供物资支持。

制剂九车间：负责全面协调各项验证试验，并负责报告试验结果。

2 概述

厂房、设施、设备均已经过全面验证。在生产线投入生产前，用胰酶酪胨大豆肉汤培养基无菌溶液代替无菌药液模拟生产并于冻干箱内模拟冻干，然后进行微生物培养，污染率＜0.1%为合格。

3 验证目的

无菌灌装过程验证目的是通过无菌培养基溶液模拟灌装、冻干的试验的方法，证明无菌灌装过程的可靠性。

4依据

5 验证项目

5.1 胰酶胳胨大豆肉汤培养基无菌干粉的性能试验

5.1.1 胰酶胳胨大豆肉汤培养基无菌干粉的溶解性试验：取胰酶胳胨大豆肉汤无菌干粉0.3g加入15ml试管中，注入10ml无菌注射用水（室温），盖好胶塞，振摇，应能完全溶解。

5.1.2 胰酶胳胨大豆肉汤无菌干粉微生物生长性能试验：胰酶胳胨大豆肉汤无菌干粉按处方溶解后，灌装于大试管中，经115℃热压灭菌30分钟（严格按无菌操作也可不灭菌）。取10支接种 1.0ml枯草杆菌菌液50~100cfu；另取10支接种1.0ml白色念球菌菌液50~100cfu；分别在30 ～35℃和23～28℃培养14天，14天内各管均应出现明显的所接种微生物的生长。

5.1.3 胰酶胳胨大豆肉汤无菌干粉无菌性试验：胰酶胳胨大豆肉汤无菌干粉在层流罩下用无菌注射用水（室温）溶解，灌装于无菌大试管中，不需灭菌。取10支于30 ~ 35℃，另10支于23 ～28℃培养14天，各试管均应无任何微生物生长。

5.2 按清洁标准操作规程对洁净区设备和空间进行清洁卫生，按洁净区臭氧消毒标准操作规程对洁净区消毒（若属于正常生产过程则可不消毒）。清洁消毒后，检查洁净区沉降菌数和空气洁净度。

5.3 验证过程

5.3.1 无菌环境的控制与监测（每批灌装同时进行）

5.3.1.1 微生物的控制与监测

5.3.1.1.1 在模拟灌装过程，分别对灌装室操作人员的胸前、手臂下和

手套三点进行取样，手套全部检出菌数＜2个，一个操作者的三个取样点检出菌数之和＜10个。

5.3.1.1.2 灌装前、后对接触药液的各容器具做无菌程度检查。应均不得有细菌和霉菌生长。

5.3.1.1.3 模拟灌装过程，分别对墙壁、门、设备表面进行无菌程度检验。

a 取样面积：25cm2/点

b 取样点：无菌理瓶转盘2个灌装门2个灌装墙2个灌装机4个冻干机（1）2个冻干机（2）2个储液罐表面2个

c 其中无菌理瓶转盘和灌装机、冻干机按无菌检查法操作，其它按菌落检查操作。做细菌、霉菌检查分别在两个邻近取样点取样。

d 合格标准：无菌理瓶转盘、灌装机及其零部件、冻干机均不得有细菌和霉菌生长。墙壁、门、储液罐表面细菌数＜3个，霉菌数＜1个。

5.3.1.2 空气中微生物数量监测（模拟灌装过程同时进行）

按洁净区菌落检查操作规程对各房间空气中的沉降菌进行监测，另外，在灌装机上放4个培养基平皿，其中两个作细菌数检查，另两个作霉菌数检查；在每台冻干机上分别放4个培养基平皿，其中两个作细菌数检查，另两个作霉菌数检查。灌装机、冻干机及百级区域上细菌数、霉菌数均应＜1；10000级区域菌落数应＜3个。

5.3.2 胶塞、西林瓶的无菌性检验：每30分钟分别取胶塞、西林瓶共取三次，做细菌和霉菌检查，均应不长菌。

5.3.3 模拟灌装

5.3.3.1 操作人员经过GMP、无菌操作、无菌更衣技术培训。

5.3.3.2 室内操作人数与正常生产相同。

5.3.3.3 灌装速度与正常灌装速度相同或略高。

5.3.3.4 西林瓶、胶塞、铝盖、无菌衣按正常生产洗涤灭菌。

5.3.3.5 生产完毕按清场标准操作规程和清洁标准操作规程清场和清洁卫生。

5.3.3.6 每天生产3000支以上，连续生产3天。

5.3.3.7 灌装过程：按《HGS液体灌装加塞机标准操作规程》操作，每瓶灌装10ml培养基无菌溶液。装量稳定后，即连续灌装3000支以上，盖好胶塞，每支标记顺序号。编号后送至冻干箱内，冷冻至5度，保温24小时，压塞，轧盖。

5.3.4 结果检验

5.3.4.1 阴性对照模拟灌装过程：模拟灌装过程，取20个无菌西林瓶，按无菌操作法，每瓶加入10ml培养基溶液，其中10支在30~35℃培养14天，另10支在23~28℃培养14天，作为阴性对照。

5.3.4.2 阳性对照：模拟灌装过程，随机取出20瓶已灌装培养基的西林瓶，其中10支各接种1.0ml的枯草芽胞杆菌菌液50~100 cfu，另10支各接种1.0ml的白色念珠菌菌液50~100 cfu。分别在30~35℃和23~28℃下培养14天，至少50％的接种西林瓶的培养基中有明显的接种微生物生长，并以此作为阳性对照。

5.3.4.3 试验样品培养：将样品在23～28℃下培养7天，再于30～35℃下培养至14天。第14天时检查培养的全部样品的微生物生长情况。若发现有微生物生长，明确记录瓶号、瓶数，同时检查铝盖、胶塞的密封情况。若有破损应记录破损数，并检查其破损原因，对于有微生物生长的样品，应鉴别其菌落、细胞学形态学及革兰氏染色特性等。

6 污染率计算

微生物生长的瓶数

微生物污染水平（阳性生长率）％= ×100%

总灌装瓶数—破损瓶数

7 验证同期：每年进行一次验证，工艺条件改变时需重新验证。