燕麦及其制品_葡聚糖含量测定方法比较

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［ 1］ 中国合格评定 国 家 认 可 委 员 会 化 学分析中 不 确 定 度的 M］ 北京: 中国计量出版社， 2002 : 4 评估指南［ ［ 2 ］GB / T 500935－ 2003 食品中 合 成 着 色 剂 的 测定 ［ M］ 北 2004 京: 中国标准出版社， ［ 3］ 中国合格评定 国 家 认 可 委 员 会 化 学分析中 不 确 定 度的 M］ 北京: 中国计量出版社， 2002 : 27－28 评估指南［ ［ 4］ 中国合格评定 国 家 认 可 委 员 会 化 学分析中 不 确 定 度的 M］ 北京: 中国计量出版社， 2002 : 8 评估指南［ ［ 5］ 中国合格评定 国 家 认 可 委 员 会 化 学分析中 不 确 定 度的 M］ 北京: 中国计量出版社， 2002 : 111－112 评估指南［
收稿日期: 2010－05－06 * 通讯联系人
作者简介: 林伟静( 1985－ ) ， 女， 硕士研究生， 研究方向: 功能食品。 基金 项 目: 国 家“ 十 一 五 ”科 技 支 撑 计 划 项 目 ( 2006BAD27B09 ， 2006BAD01 ) ; 中 央 级 公 益 性 科 研 院 所 基 本 科 研 业 务 费 专项。
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样品前处理
前 处 理工 艺 燕 麦 籽 粒 → 粉 碎 → 用 不同 pH 的 缓 冲溶液 分 散 → 搅拌 提 取 ( → 等 电 点除 蛋白 ) → 离 心 分 离 → 收 集上清液 122 单因素水平 设 置 本实 验 主要 研究 影响 前 处 理提 取 的 pH、 温度 以及 时间 三个 因 素， 设 置 水 平分 60 、 70 、 80 、 90 ; 时间 05 、 1、 2、 4、 6h ; 提 别为: pH50 、 30 、 40 、 50℃ 。 取温度 20 、
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β－ 葡聚糖测定方法
35 μg / mL Calcofluor 溶液 2mL， 以不加 β － 葡聚糖的 Calcofluor 溶液 为 空 白， 用 pH90 的 Tris－ HCl 缓冲溶 液定容至 10mL。 使 用 荧 光光 度 计测 定 荧 光 强 度并 荧 光 激 发 波长 为 365nm， 发射 制作标准 曲线 ( 图 2 ) ， 波长为 435nm。标准曲线如图 2 所示。取一定量 β － 葡聚糖提取液， 根据 标准 曲线 的 测 定方法， 在相同条 件下显色并 测 定 荧 光 强 度， 对 照 标准 曲线 计 算 出样 品中 β － 葡聚糖的含量。
［ 11 ］ 荧光法 定量取 β － 葡聚糖溶液于 10mL 具 塞试 管 中 ( 用 锡 箔 纸 包 好 置 于 黑 盒 中 ) ， 依次加入
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材料与方法
材料与仪器
燕麦 市售; 三羟 甲 基 氨 基 甲 烷、 盐 酸 北京 化 ， ; 工厂 分析纯 刚 果 红 北京 化 学 试剂 有 限 公司， 指 示剂; 燕 麦 β － 葡 聚 糖标准 样 品、 β － 葡 聚 糖 测 定 试剂 Calcofluor 荧光增白剂 爱尔兰 Megazyme 公司。 盒、 PB－20 标准 型 pH 计 德国 万分之一分析天平、 Sartorius 公司; SHA － B 水 浴恒 温 振荡器 金坛市 荣 华仪器制造有限公司; LXJ－ IIB 低速 大 容 量多 管 离心 机 上 海 安 亭 科 学 仪器 厂; WH－ 2 微 型 旋 涡 混 合 仪 天津 市 泰 斯 特 仪器 有 限 公司; U－3010 紫外可见分 F － 2500 荧 光 分 光 光 度 计 日 本 Hitachi 光光 度 计、 公司。
［ 10 ］ 刚果红法 取标准燕麦 β － 葡聚糖 01000g ， 溶于少 量 去 离 子 水， 加 热 助 溶 并 定 容 100mL， 配成 1mg / mL 标准溶液， 使 用 前 稀 释 10 倍。 称 取 00500g 刚果红溶于 01mol / L pH80 的磷酸盐缓冲液中， 定容 500mL。取 01mg / mL 标 准 溶 液 0 、 02 、 04 、 06 、 08 、 1mL 于试管中， 补充 蒸馏 水 至 2mL， 加 入 刚 果 红 溶液 4mL， 25℃ 下 显色 30min 。 于 545nm 下 测 定吸 光 值， 以 2mL 蒸馏 水 作 为 空 白， 以 吸 光 值 为 纵 坐 标、 燕麦 β － 葡聚糖含量为横坐标作标准 曲线 ( 图 1 ) 。 将 产品 样液稀 释 一 定 倍 数， 取 05mL 样 液， 以蒸馏水补至 20mL， 其他步骤按上 述 操 作进行， 测 定吸 光 值， 对照 － 标准曲线方程计算出产品样液的 β 葡聚糖含量。
Comparison of content determination of β－ glucan from oat and its products
2 * LIN Wei－ jing1 ， ， WU Guang－ feng2 ， WANG Qiang1 ， ZHOU Su－ mei1 ，
( 1Chinese Academy of Agricultural Sciences， Institute of Agro－food Science and Technology， Beijing 100083 ， China; 2China Agricultural University， College of Food Science ＆ Nutritional Engineering， Beijing 100193 ， China) Abstract: In order to determine the β－ glucan in oat and its products accurately， to support some useful theoretical foundation for screening some excellent oat varieties， the determination methods of β－ glucan content were considered as critical point and studied β－ glucan contents of 11 domestic oats were determined by Congo red method， enzyme determining method and fluorescence method respectively It proved that the results of the 3 methods were different， but they were linearly dependent The correlation coefficient between Congo red method and enzyme determining while between Congo red method and fluorescence method was 09837 ， and between enzyme method was 09921 ， determining method and fluorescence method was 09914 Key words: oat and its products; β－ glucan; Congo red method; enzyme determining method; fluorescence method 中图分类号: TS2107 文献标识码: A 文 章 编 号: 1002－0306 ( 2011 ) 06－0417－04 燕麦是 禾 谷 类中 营养 价 值 最高 的 作 物 之 一， 其 高油 脂 含 量、 高 β－ 葡聚糖含量 具有高蛋白质 含 量、 及低淀粉含量等特点， 其中 β － 葡 聚 糖 是 燕 麦 膳 食 纤 。 维的主要 功 能 成 分 近年来， 燕 麦 β － 葡 聚 糖因 其具 ［ 1］ ［ 2］ 有调 节 血 糖 、 降 血脂 、 降 胆 固 醇、 提 高 人体 免 疫 ［ 3］ 力 等功能作用 而得 到 了广泛 的关注和研究。 燕 麦 ［ 4］ β － 葡聚糖在籽粒中的含量一般 为 3%～7% ， 目前 国
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究刚 果 红 法 、 酶法及荧 光 法 测 定 燕 麦 中 β － 葡 聚 糖 含 量， 尝试通过研究 上 述方法， 分析 其中的联系 与 相 关 希望能达到用 快 速 简 单 的 方法， 得 到 准 确可 靠 数 性， 据的目的。
接着加 入 乙 酸 盐 缓 冲 液 50mL， 室 温 下 平 衡 5min 。 3000r / min 离心 10min 后， 分别 移 取上 清 液 01mL 至 3 支试管 中， 并向其中两试管加入 β－ 葡萄糖苷酶 ( 2U / mL) 01mL( 用于反应) ， 在第三支 试 管中加 入 乙 酸盐缓冲液 01mL ( 用作反应 空 白 ) ， 将 所 有 试 管在 50℃ 水 浴 中 保 温 10min 。 加 入 氧 化 酶 － 过 氧 化 酶 ( GOPOD) 试剂 30mL 并 在 50℃ 水 浴 中 保 温 20min 。 取出试管， 并在 510nm 下测量 样 品的 吸 光 值， 所有样 品在 1h 内测完。其中试剂空白包括 02mL 乙酸盐缓 冲液 和 30mL GOPOD 试 剂， 葡萄糖标准样品包括 01mL 乙 酸 盐 缓 冲 液、 01mL 葡 萄 糖 标 准 溶 液 和 30mL GOPOD 试剂。 1322 液 体 样 品 取上 清 液 调 节 其 pH 至 65 ， 取 20mL 并加入 40mL 磷 酸 盐 缓冲液， 混匀后 在 沸 水 中 保温 2min ， 再次剧烈振荡后将试管放在 100℃ 水浴中 保 温 4min 。 先 后 加 入 地 衣 酶、 β－ 葡萄糖苷酶和 GOPOD， ( 并测定样品吸光值 具体操作同固体 样 品 ) 。 01mL 蒸馏 其中试剂空 白 包括 02mL 乙 酸 盐 缓冲液、 水和 30mL GOPOD 试 剂， 葡萄糖标准样品包括 02mL 乙 酸 盐 缓 冲 液、 01mL 葡 萄 糖 标 准 溶 液 和 30mL GOPOD 试剂。 133
1， 2 2 1 1， * 林伟静 ， 吴广枫 ， 王 强 ， 周素梅 ( 1 中国农业科学院农产品加工研究所， 北京 100083 ; 2 中国农业大学食品科学与营养工程学院 ， 北京 100193 )
摘 要: 为了准确测定燕麦及其制品中 β－ 葡聚糖的含量， 筛选品质更为突出的燕麦品质提供 实验 依 据， 分析 比较 了 测 － 。 、 11 － ， 种 燕 麦 的 β 葡 聚 糖 含量 并 分析了 3 种 方 定 β 葡聚糖的多种方法 分别用刚果红法 酶法和荧光法测定 了国 内 3 种测定方法 所 得 结果 不 一 致， 法之间的相关性。结果表明， 但 其 之间 具有较 好 的 线 性 关 系， 刚果红法与酶法的相关 系数为 09921 ， 刚果红法与荧光法之间的相关系数则为 09837 ， 而酶法与荧光法之间的相关系数则达 09914 。 关键词: 燕麦及其制品， β－ 葡聚糖， 刚果红法， 酶法， 荧光法
内外关于燕 麦 β － 葡 聚 糖 含 量 的 测 定方法 主要 有 刚 ［ 5］ ［ 6］ ［ 7］ ［ 8］ 果红 法 、 酶法 、 荧光法 、 高 效液相色谱 法 等。 刚果红 法 操 作 简 单 方 便 且 成 本 低， 是测定 β － 葡聚糖 含量较常用的方法; 酶 法 具有 高度 的 专 一 性， 是 目前 ， 较为可靠的 方法 但 此 法 对 酶 制 剂 要 求较 高 以致其 成 本 较 高， 因此不 能 被 广泛应用; 荧 光 法 具有 高 效、 准确、 灵敏度高等优 点， 但 其 与 高 效液相色谱 法 都因 其所需仪器 投 入 较 高， 而 使 它 们 的 推 广 受到 一 定 的 限制。燕麦 β － 葡 聚 糖 的各 种 测 定方法 各有其 优 缺 点， 曾 有 外 国学 者 对 酶 法 和 荧 光 法 测 定 燕 麦 β － 葡 聚 ［ 9］ 糖的相关性进行研究 ， 国内关于 β － 葡聚糖性质研 、 究较多 测 定 方 法 研 究 较 少， 且尚未发现关于燕麦 β － 葡聚糖各种测定方法的相关性研究。 本文 旨 在研