Ⅰ型糖尿病自身抗体检测

GAD-Ab可于发病前10年测出，且在此期间呈高
低度持续存在，约80%新发患者血清中GAD阳 性且水平较稳定，病程10年以上仍存在高滴度 GAD抗体 。

GAD抗体在大多数T1DM患者中阳性，且阳性率不随病程延长而下降。
实验显示新诊断的患儿中GAD抗体阳性率为74%，长病程者为67%， 而他们的ICA阳性率分别为64%和14%。 如在初发T1DM患者中查到GAD抗体有助于排除T2DM，以助于DM 诊断分型并指导治疗。

最常用的GAD-Ab的检测方法 是ELISA法和放免法。 放免法由于存在放射性污染

目前已逐渐被ELISA法替代

ELISA法采用亲和素和生物 素扩大级联反应增强了检测
的敏感性
GAD检测方法的评价

GAD 自身抗体:41 个实验室测定了血清GADab ,其中多数运用重 组人GAD 的RIA法,其调整敏感性是0～91 %(平均81 %) 。 ELISA 法与RIAs 法比较,有较好效果,其调整敏感性77 % ,双管测 定的阳性或阴性一致性为100 %。 在125例血清RIA法的阳性率为22.4%， ELISA的阳性率为26.4%，
病毒蛋白如柯萨奇B 病毒p2C 蛋白肽段, 胰岛β细胞
抗原分子谷氨酸脱羧酶(GAD) 的部分肽段序列相似, 前者(外源性蛋白多肽) 在诱导机体产生免疫的同时, 亦可能诱发针对自身胰岛β细胞的攻击，导致β细胞 的损伤。
GAD的临床应用

GAD-Ab具有与β细胞缓慢损伤相关性好、出现 早、持续时间长、年龄跨度大、阳性率高、检 测易标准化等特点，是目前公认的诊断LADA及 预测胰岛功能的免疫学指标

胰岛细胞 自身抗体的组合 预测Ⅰ型糖尿病 糖 尿 病 的 发 病 率
跟踪的年数
Progression to Diabetes vs Number of Autoantibodies (GAD, ICA512, Insulin)
能做到半定量，而推荐使用IA22Ab 联合GAD2Ab 及IAA的筛选组 合。 近来,国外还建立了一种GAD-Ab 和IA2-Ab 一步性联合检测法。其 结果与GAD-Ab、IA2-Ab 分别检测结果高度一致。此法简单高效、 成本低、重复性好,并可用毛细血管血作为标本,适于在一般人群特 别是少儿中进行普查。


在T1DM一级亲属（高危人群）， 33.3% 的GADA阳性者可能患 TIDM。
TIDM一级亲属中GAD抗体阳性率为15%左右，其中1/3在6~18个月 后发展为T1DM。 GADA在僵人综合征（SMS）中的阳性率为100%, 此外还见于与

T1DM相关的多腺体自身免疫综合征。
GAD在不同人群中的阳性率

两者的显著相关（P=0.025)。均 与ICA显著相关P值分别为0和
0.01。 说明ELISA法可以替代RIA法做为1型糖尿病自身抗体筛 选的有效手段。 （RIA试剂——欧蒙公司 ； ELISA试剂——美国BLOMERICA 公司）
GAD在T1DM发病机理中的作用

分子模拟(molecular mimicry) 机制致病学说：

预测价值, 80 %敏感性和100 %特异性。

预测率最高的组合是ICA加IA-2A和（或）IA-2β抗体。另一项研究 发现采用两步筛查法，即先筛查IA-2A和（或）GAD抗体，然后筛 查IAA和（或）ICA，对糖尿病的预测敏感度最高 。

另有人认为ICA的检测缺乏稳定性，通常所用的间接免疫荧光法仅
新发病者做了血浆臵换,这份血浆在青少年糖尿
病基金会(FDA)组织的ICAs定标实验中,在参加 这项工作的所有实验室检测时均为ICAs阳性,于
是用这份血样定出了ICAs的JDF单位,并逐渐成
为国际上较为通用的单位。

敏感度 81 %(44 %～100 %) ，特异度 96 %(64 %～100 %) 特异度较GADA和IA2A差 ICA可作为早期预测指标 能早于T1DM发病8年前被检测出 高滴度的ICA（大于20-40JDF单位）预示疾病进展的高危险性。 大部分T1DM病人的ICAs在发病2年后消失，ICA持续阳性超过2~3年 者，仅占T1DM的10%。 ICA滴度的持续高水平通常与β细胞的损伤有关，ICA的水平与C肽水 平呈负相关。 ICA和其他胰岛自身抗体（如GAD或IAA）同时阳性对疾病更有诊断 价值，这类病人发生T1DM的危险性是仅ICA阳性的病人的3-5倍。
检测方法： 间接免疫荧光法 组织化学染色法 免疫沉淀化学法 ELISA法

目前ICA的检测方法主 要是以猴胰腺为基质的 间接免疫荧光法，但易 受组织的固定方法的影 响。 抗胰岛细胞抗体与胰腺 的内分泌部位反应，可 见所有胰岛细胞胞浆呈 现均质到颗粒型荧光。


检测方法的标化： 1983年瑞典的Ludvigsson为一名1型糖尿病
Ⅰ型糖尿病自身抗体检测
糖尿病的分型诊断的进展

1979年WHO提出了原发性临床糖尿病分为胰岛素依赖型 和非胰岛素依赖型，依赖型与非依赖型的区别主要依据 胰岛素β细胞功能受损的程度，临床上是否依赖胰岛素而 言，并不反映其发病本质

1997年WHO建议取消依赖型与非依赖型，改为1、2型。 1、2型的区别要看病因是否由胰岛β细胞自身免疫破坏造 成，1型与2型是完全不同的两类疾病，但2型非依赖型可 发展成1型胰岛素依赖型，成人缓慢进展型就经历了这个 过程。



检测方法
放免法；ELISA法
不同实验室及不同方法测定IAAs,结果的一致性显著 低于IA2A和GADAs。

自身抗体对T1DM的诊断 敏感性和特异性
自身抗体 敏感度（%） 特异度(%)
IAA GADA IA-2A ICA
40~70 70~80 50~70 84
99 99 99 95

Biblioteka Baidu
T1DM患者中胰岛自身抗体的阳性率常因种族、发病年龄、病程和临 床亚型不同而不同。单一的自身抗体的检测缺乏最佳的敏感性和特异 性，目前常采用多项自身抗体的联合检测，对T1DM的诊断准确性更 高 IA2－Ab 联合GAD－Ab 及IAA 两种以上抗体阳性具有68 %的阳性
约80%
男女相近 多为儿童青少年 急，有者以酮症酸中毒 （DKA）发病 发病时严重 常无 发病后即依赖 发病后即严重受损，血中C 肽水平低或侧不出
约20%
男略多于女 多为成年人，一般>30岁 酷似非肥胖T2DM，多在病 后3年内发生DKA 数年后显著或严重 可有（Addison，恶性贫血， 重症肌无力等） 初期对饮食和/或口服降糖药 有效随后依赖 发病时尚有残存功能，数年 后同急性型
抗胰岛素自身抗体(IAA)

IAA的识别的抗原表位是胰岛素A链的A8-A13残
基和B链的B1-B3残基

IAA与逆转录病毒的p73蛋白间存在交叉反应，提 示内源性的逆转录病毒感染与T1DM的发生有关

IAA与胰岛素治疗诱导的抗胰岛素抗体相似

IAA在新诊断的T1DM患者中的阳性率为40%，多见 于儿童（≤4岁），在成人中的阳性率仅为4%，在5岁 以前发生的IAA阳性率达50%，IAA滴度随增龄而降 IAA与ICA相关，在高危人群中约40%ICA阳性者 IAA阳性。 IAA水平与T1DM发生的速度呈相关性，高滴度IAA 者发病较快

与糖尿病相关的自身抗原不仅在β细胞表达，这些抗原的 组织分布可分为： (1) β细胞特异的，如胰岛素； (2)胰岛细胞特异的； (3)神经内分泌特异的，如分子量为65 kD的谷氨酸脱羧 酶（GAD65kD）、ICA512、神经节苷脂（ganglioside）、 脑硫脂（sulfatides）等； (4)较广泛的分布，如HSP62等。 目前所知的ICA主要抗原的是谷氨酸脱羧酶（GAD） 和酪氨酸磷酸酶（IA2）
•
1990年，Beakkeskov首次证明GAD是1型糖尿病
的自身抗原
•
GAD分子存在65kD和67kD两种形式，两者在氨 基酸水平上有65%的同源性和80%的相似性，免 疫源性也基本相同，目前认为T1DM中抗GAD65
抗体更常见

检测方法： 免疫沉淀酶活性法
放射免疫法
ELISA法 间接免疫荧光法 化学发光法
1型糖尿病的病程
1型糖尿病和2型糖尿病的比较
T1DM T2DM
起病 内源性Ins 酮症 发病年龄 体重 治疗 家族史 孪生子发病一致率 HLA相关 自身抗体
急 低或缺乏 常见 各年龄段 通常非肥胖 Ins 10-15% 30-50% HLA-DR,HLA-DQ 多见（>85%)
进行性 正常，升高或降低 少见 绝大多数为成人 肥胖或非肥胖 饮食，口服降糖 药， Ins 30% 70-90% 无关 少见
人群 健康对照组 T1DM患者直系亲属 其他的自身免疫性 内分泌疾病患者 新近诊断的T1DM患者 T2DM患者 妊娠糖尿病 阳性率（%） 0.3-0.6 3-4 1-2 55-85 10-15 10
抗酪氨酸磷酸酶抗体(ICA 512/IA 2ab)

ICA 512/IA 2是利用1型糖尿病患者或其前期病人的血清 免疫筛选胰岛细胞的cDNA文库得到的一个新的β细胞自身 抗原。


T1DM患者中IA2A阳性率可能受多种因素影响，15岁 以上T1DM者IA2A阳性率最高，随增龄阳性率逐渐下 降，但其发生率与DGA抗体无关。 携带IA-2抗体的个体在5岁时患Ⅰ型糖尿病的风险是 34岁时的11倍。


检测方法
酶联免疫吸附分析法( ELISA)
放射配体分析法(RLA)
35S标记的放射免疫沉淀法
1型糖尿病和2型糖尿病的区分
一般<30岁，起病急，中到重度症状 明显体重下降，消瘦，尿酮或DKA 空腹或餐后C肽低下 免疫标记物(GADA,ICA,IA-2)
是
否
T1DM
T2DM
免疫介导型1型糖尿病亚型的特征
急性发病型 缓慢发病型（LADA)
患病率（%）
性别 起病年龄 起病方式 糖耐量减低 伴其他自身免疫 病 依赖Ins治疗 胰岛β细胞功能 β细胞自身抗体
WHO （1997年）建议的糖尿病 分型方案

1型糖尿病（T1DM）
胰岛β细胞破坏导致胰岛素绝对缺乏：A.免疫型；B.特发型
2型糖尿病（T2DM） 胰岛素抵抗为主体的胰岛素相对缺乏，或胰岛素分泌受损 为主体的胰岛素抵抗 其他特殊类型糖尿病 妊娠期糖尿病



1型糖尿病的流行病学

主要见于15岁以前的儿童和未成年人； 亚洲及我国发病率相对较低（我国儿童中的发病率为 0.59/10万每年，全国T1DM的总数至少200-400万） 各国的1型糖尿病较以前有逐年增加趋势； 不少地区的1型糖尿病的发病率与季节有关



ICA在不同人群中的阳性率
人群 健康对照组 T1DM患者直系亲属 新近诊断的T1DM患者 T2DM患者 阳性率（%） 0.1-0.2 2-5 60-80 5-7
ICA的检测对1型糖尿病有很好的预测价值
谷氨酸脱羧酶抗体(GAD-Ab)
• • •
谷氨酸脱羧酶 γ氨基丁酸（GABA）的合成酶 表达于人脑及胰岛中均有，主要位于细胞浆中 具有抑制生长抑素和胰高糖素分泌的作用，并可调节胰岛 素的分泌和胰岛素原的合成
起病时急剧升高，发病后下 低水平持续阳性，有人超越 降，数年后可阴转 10年
抗胰岛细胞抗体(ICA)

1974年Bottazzo采用间接免疫荧光法在胰岛素依
赖性糖尿病患者血清中首次检测到抗胰岛细胞抗
体（islet cell autoantibodies, ICA）。

ICA是针对胰岛细胞内多种抗原的一组抗体,其靶 抗原至今尚未完全阐明。



1型糖尿病的发病机制
遗传易感性 环境因素 感染、饮食、地理、气候
β细胞自身免疫损伤
β细胞破坏、功能损害
胰岛素分泌缺乏
1型糖尿病的病程
β细胞量
环境因素 胰岛素正常 遗传易感性 自身抗体阳性 血糖正常 胰岛素↓↓ 血糖↑ 胰岛素↓ 血糖正常 应激血糖↑ 80% β细胞破坏 胰岛素缺乏 临床糖尿病

其氨基酸序列与T淋巴细胞蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP)CD45 相似，而碱基序列与人胰岛素瘤克隆的 cDNA (IA2)相近。 Northern印迹示ICA 512/IA 2在胰岛、脑和垂体中均有表 达。

Rabin等发现ICA512实际上是ICA的一个片段。

IA2A存在于大约65%（55%-75%）的新发T1DM病 人中，而正常对照人群中阳性率小于1%。 IA-2Ab 特异性强,在不伴1型DM的自身免疫病患者中 较少发现。