福林(Folin)-酚试剂法测定
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连接仪器电源线，确定仪器供电电源有良好的接地性能。 接通电源，使仪器预热20分钟。 用<MODE>键设置测试方式：投射比（T），吸光度（A）， 已知标准样品浓度值方式（C）和已知标准样品斜率（F） 方式。 用波长选择旋钮设置您所需的分析波长。
将参比样品溶液和被测样 品溶液分别倒入比色皿中， 打开样品室盖，将盛有溶 液的比色皿分别插入比色 皿槽中，盖上样品室盖。 一般情况下，参比样品放 在第二个槽位中。 将0％T校具（黑体）置入 光路中，在T方式下按“0 ％T”键，此时显示器显示 “000.0”
四、实验步骤
1.标准曲线的绘制 取7支干燥的试管，编号，按下表加入试剂，比 色后，以光密度为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标 作图。 2.样品测定 准确吸取样液0.5ml于干燥的试管中，同样按下 表加入试剂，测出光密度值后，对照标准曲线求 出样液的蛋白质浓度。
管号 牛血清蛋白液 (1mg/ml)ml 蒸馏水ml 蒸馏水 Folin-酚试剂 酚试剂A 酚试剂
摇匀，在室温下放置 分钟后在 分钟后在500nm下比色 摇匀，在室温下放置30分钟后在 下比色 OD500
蛋白质含量测定的方法有哪些，各有什么优 缺点？
下次试验：氨基酸纸层析和维生素C 下次试验：氨基酸纸层析和维生素 定量测定-2， ，二氯酚靛酚法。 定量测定 ，6，二氯酚靛酚法。
附：7200型分光光度计的操作程序
比色皿的清洁程度，直接影响实验结果。因此， 比色皿的清洁程度 ， 直接影响实验结果 。 因此 ， 特 别要将比色皿清洗干净。装样前处理： 别要将比色皿清洗干净 。 装样前处理 ： 自来水反复 冲洗→蒸馏水漂洗2次 → 待装溶液漂洗 2次 。用完后 待装溶液漂洗2 冲洗 → 蒸馏水漂洗2 用自来水和蒸馏水洗净并用檫镜纸檫干放回比色皿 盒中。 盒中。
按 MODE键选择A模式 将参比样品拉入光路中， 按“0A/100％T”键调 0A/100％T，此时显示器 显示的“BLA”直至显示 “0.000”A为止。 当仪器显示器显示出 “0.000”A后，将被测样 品推入光路，这时，您便 可从显示器上得到被测样 品的吸光度。
分光光度计的使用注意事项 注意事项: 分光光度计的使用注意事项:
福林(Folin)-酚试剂法测定蛋白质 福林 酚试剂法测定蛋白质 的浓度
一、原理
蛋白质或多肽分子中有带酚基酪氨酸或色氨 酸，在碱性条件下，可使酚试剂中的磷钼酸 化合物还原成蓝色（生成钼蓝和钨蓝化合 物）。蓝色的深浅与蛋白质的含量成正比， 可用比色法测定。
二、实验仪器 1.卵清蛋白片 卵清蛋白片 2.7220分光光度计 分光光度计 3.试管 试管 4.移液管 移液管 三、实验试剂 1.Folin-酚试剂 ：碱性铜溶液 酚试剂A： 酚试剂 甲液： 溶于100ml0.1mol/l氢氧化钠溶液中 甲液：取Na2CO32g溶于 溶于 氢氧化钠溶液中 乙液： 晶体0.5g，溶于 酒石酸钾 酒石酸钾100ml中。 乙液：取CuSO4.5H2O晶体 晶体 ，溶于1%酒石酸钾 中 临用时按甲： 混合使用。 临用时按甲：乙=50：1混合使用。 ： 混合使用 2.Folin-酚试剂 ：将100g钨酸钠、25g钼酸钠、700ml蒸馏水、50ml85% 酚试剂B： 钨酸钠、 钼酸钠、 蒸馏水、 酚试剂 钨酸钠 钼酸钠 蒸馏水 磷酸继100ml浓盐酸置于 浓盐酸置于1500ml的磨口圆底烧瓶中，充分混匀后，接 的磨口圆底烧瓶中， 磷酸继 浓盐酸置于 的磨口圆底烧瓶中 充分混匀后， 上磨口冷凝管，回馏10小时 再加入硫酸锂150g，蒸馏水 小时， 上磨口冷凝管，回馏 小时，再加入硫酸锂 ，蒸馏水50ml及液 及液 溴数滴，开口煮沸15分钟 在通风橱内驱除过量的溴。冷却， 分钟， 溴数滴，开口煮沸 分钟，在通风橱内驱除过量的溴。冷却，稀释至 1000ml，过滤，滤液成微绿色，贮于棕色瓶中。临用时，用1mol/l的 ，过滤，滤液成微绿色，贮于棕色瓶中。临用时， 的 氢氧化钠溶液滴定，用酚酞作指示剂，根据滴定结果， 氢氧化钠溶液滴定，用酚酞作指示剂，根据滴定结果，将试剂稀释至 相当于1mol/L的酸。 的酸。 相当于 的酸 3.1mg/mL牛血清蛋白液：称取 牛血清蛋白片溶于 牛血清蛋白液： 牛血清蛋白片溶于0.9%氯化钠溶液中， 氯化钠溶液中， 牛血清蛋白液 称取1g牛血清蛋白片溶于 氯化钠溶液中 并稀释至 1000ml
1 0 0.5 4.0
2 0.05 0.45 4.0
3 0.1 0.4 4.0
4 0.2 0.3 4.0
5 0.3 0.2 4.0
6 0.4 0.1 4.0
7 0.5 0 4.0
样品 0.匀，在室温下放置10分钟 Folin-酚试剂 酚试剂B 酚试剂 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
拿放比色皿时，应持其“毛面” 不要接触“光面” 拿放比色皿时，应持其“毛面”，不要接触“光面”。
毛面
光面
若比色皿外表面有液体，应用擦镜纸朝同一方向拭干， 若比色皿外表面有液体 ， 应用擦镜纸朝同一方向拭干 ， 以保证吸光度测量不受影响。 以保证吸光度测量不受影响。
比色皿内盛液应为其容量的2/3， 比色皿内盛液应为其容量的 ， 过少会影响实验 结果，过多易在测量过程中外溢，污染仪器。 结果，过多易在测量过程中外溢，污染仪器。
光透过窗口 容 量 的 2/3
比色皿的光面要与光源在一条线上。 比色皿的光面要与光源在一条线上。
将参比样品溶液和被测样 品溶液分别倒入比色皿中， 打开样品室盖，将盛有溶 液的比色皿分别插入比色 皿槽中，盖上样品室盖。 一般情况下，参比样品放 在第二个槽位中。 将0％T校具（黑体）置入 光路中，在T方式下按“0 ％T”键，此时显示器显示 “000.0”
四、实验步骤
1.标准曲线的绘制 取7支干燥的试管，编号，按下表加入试剂，比 色后，以光密度为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标 作图。 2.样品测定 准确吸取样液0.5ml于干燥的试管中，同样按下 表加入试剂，测出光密度值后，对照标准曲线求 出样液的蛋白质浓度。
管号 牛血清蛋白液 (1mg/ml)ml 蒸馏水ml 蒸馏水 Folin-酚试剂 酚试剂A 酚试剂
摇匀，在室温下放置 分钟后在 分钟后在500nm下比色 摇匀，在室温下放置30分钟后在 下比色 OD500
蛋白质含量测定的方法有哪些，各有什么优 缺点？
下次试验：氨基酸纸层析和维生素C 下次试验：氨基酸纸层析和维生素 定量测定-2， ，二氯酚靛酚法。 定量测定 ，6，二氯酚靛酚法。
附：7200型分光光度计的操作程序
比色皿的清洁程度，直接影响实验结果。因此， 比色皿的清洁程度 ， 直接影响实验结果 。 因此 ， 特 别要将比色皿清洗干净。装样前处理： 别要将比色皿清洗干净 。 装样前处理 ： 自来水反复 冲洗→蒸馏水漂洗2次 → 待装溶液漂洗 2次 。用完后 待装溶液漂洗2 冲洗 → 蒸馏水漂洗2 用自来水和蒸馏水洗净并用檫镜纸檫干放回比色皿 盒中。 盒中。
按 MODE键选择A模式 将参比样品拉入光路中， 按“0A/100％T”键调 0A/100％T，此时显示器 显示的“BLA”直至显示 “0.000”A为止。 当仪器显示器显示出 “0.000”A后，将被测样 品推入光路，这时，您便 可从显示器上得到被测样 品的吸光度。
分光光度计的使用注意事项 注意事项: 分光光度计的使用注意事项:
福林(Folin)-酚试剂法测定蛋白质 福林 酚试剂法测定蛋白质 的浓度
一、原理
蛋白质或多肽分子中有带酚基酪氨酸或色氨 酸，在碱性条件下，可使酚试剂中的磷钼酸 化合物还原成蓝色（生成钼蓝和钨蓝化合 物）。蓝色的深浅与蛋白质的含量成正比， 可用比色法测定。
二、实验仪器 1.卵清蛋白片 卵清蛋白片 2.7220分光光度计 分光光度计 3.试管 试管 4.移液管 移液管 三、实验试剂 1.Folin-酚试剂 ：碱性铜溶液 酚试剂A： 酚试剂 甲液： 溶于100ml0.1mol/l氢氧化钠溶液中 甲液：取Na2CO32g溶于 溶于 氢氧化钠溶液中 乙液： 晶体0.5g，溶于 酒石酸钾 酒石酸钾100ml中。 乙液：取CuSO4.5H2O晶体 晶体 ，溶于1%酒石酸钾 中 临用时按甲： 混合使用。 临用时按甲：乙=50：1混合使用。 ： 混合使用 2.Folin-酚试剂 ：将100g钨酸钠、25g钼酸钠、700ml蒸馏水、50ml85% 酚试剂B： 钨酸钠、 钼酸钠、 蒸馏水、 酚试剂 钨酸钠 钼酸钠 蒸馏水 磷酸继100ml浓盐酸置于 浓盐酸置于1500ml的磨口圆底烧瓶中，充分混匀后，接 的磨口圆底烧瓶中， 磷酸继 浓盐酸置于 的磨口圆底烧瓶中 充分混匀后， 上磨口冷凝管，回馏10小时 再加入硫酸锂150g，蒸馏水 小时， 上磨口冷凝管，回馏 小时，再加入硫酸锂 ，蒸馏水50ml及液 及液 溴数滴，开口煮沸15分钟 在通风橱内驱除过量的溴。冷却， 分钟， 溴数滴，开口煮沸 分钟，在通风橱内驱除过量的溴。冷却，稀释至 1000ml，过滤，滤液成微绿色，贮于棕色瓶中。临用时，用1mol/l的 ，过滤，滤液成微绿色，贮于棕色瓶中。临用时， 的 氢氧化钠溶液滴定，用酚酞作指示剂，根据滴定结果， 氢氧化钠溶液滴定，用酚酞作指示剂，根据滴定结果，将试剂稀释至 相当于1mol/L的酸。 的酸。 相当于 的酸 3.1mg/mL牛血清蛋白液：称取 牛血清蛋白片溶于 牛血清蛋白液： 牛血清蛋白片溶于0.9%氯化钠溶液中， 氯化钠溶液中， 牛血清蛋白液 称取1g牛血清蛋白片溶于 氯化钠溶液中 并稀释至 1000ml
1 0 0.5 4.0
2 0.05 0.45 4.0
3 0.1 0.4 4.0
4 0.2 0.3 4.0
5 0.3 0.2 4.0
6 0.4 0.1 4.0
7 0.5 0 4.0
样品 0.匀，在室温下放置10分钟 Folin-酚试剂 酚试剂B 酚试剂 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
拿放比色皿时，应持其“毛面” 不要接触“光面” 拿放比色皿时，应持其“毛面”，不要接触“光面”。
毛面
光面
若比色皿外表面有液体，应用擦镜纸朝同一方向拭干， 若比色皿外表面有液体 ， 应用擦镜纸朝同一方向拭干 ， 以保证吸光度测量不受影响。 以保证吸光度测量不受影响。
比色皿内盛液应为其容量的2/3， 比色皿内盛液应为其容量的 ， 过少会影响实验 结果，过多易在测量过程中外溢，污染仪器。 结果，过多易在测量过程中外溢，污染仪器。
光透过窗口 容 量 的 2/3
比色皿的光面要与光源在一条线上。 比色皿的光面要与光源在一条线上。