石斛生物碱的提取与检测
铁皮石斛的生物碱研究
铁皮石斛的生物碱研究,铁皮石斛的化学成分
铁皮石斛的生物碱研究,铁皮石斛的化学成分金蓉鸾等采用酸性染料比色法.对11
种石斛的生物碱含量进行测定。
结果表明,金钗石斛总生物碱含量达0.41%-0.64% ,远较其他石斛为高;而铁皮石斛的总生物碱含量为0.018%。
丁亚平等报道了安徽霍山3种石斛总生物碱的测定及其分布规律研究。
结果表明:
(1) 由于石斛在传统上以其茎作药用,所以考察不同生长期的茎中主要有效成分生
物碱的含量对于确定石斛的最佳采收期等有重要的指导意义。
霍山石斛和铜皮石斛茎
中总生物碱在前3年是逐年递增的,3年以后,霍山石斛含量降低,铜皮石斛含量增
加不显著,基本保持恒定,这与它们在3年以后开始枯萎(且前者快于后者)相一致。
因此霍山石斛和铜皮石斛均以第三年采收为宜。
而铁皮石斛茎中总生物含员则一直保
持递增势头,至第四年仍未见大的衰减,这也与它在第四年时仍留有部分叶子,可继
续进行光合作用和其他代谢的实际情况相吻合,所以铁皮石斛最好在3年以后(第四年左右)采收。
(2) 从各部位来看,3种石斛生物碱含缺都呈现“叶>(成熟期)茎二根”的规律,故此,不能轻易否定石斛叶和根的药用价值。
(3) 从3种石斛茎的比较来看,总生物碱含量大致有如下顺序:霍山石斛>铜皮石斛>铁皮石斛,这与它们的实际价值相符合。
另一方面,3种石斛在各时期产生生物碱的
量不同:铁皮石斛按逐年加倍递增的方式积累生物碱,而霍山石斛和铜皮石斛则在第一年就有较多的生物碱形成,以后各年递增较少。
石斛中总生物碱量的测定
即取溶液于分液漏斗 中 , 加人 5 m L 邻苯二 甲酸氢钾 一 氢氧化 钠缓 冲液 , 2 m L溴 甲酚 绿 , 摇匀, 静置 3 0 a r i n , 取5 m L氯仿 液, 加入 l m I D . O 1 N氢氧 化钠无 水 乙醇 溶液 , 于6 o ℃热水 中 加热 。2 O~ 4 0 a r i n内于 6 2 0 n m处 测 紫外 吸收 J 。以 1 0 mL
收率为 9 8 . 6 % 。采用 8 0 % 乙醇索 氏提取较好 , 测定 总生物碱量为 0 . 4 2 6 %。
关键词 : 石斛 ; 总生物碱 ; 索氏提取
中图分类号 : 0 6 5 6 . 3 文献标识码 : A 文章编号 : 1 0 0 8—0 2 1 X( 2 0 1 5 ) 0 7—0 0 8 9~ 0 2
De t e r mi n a t i o n o f To ml Al ka l o i d Fr o m Ca u is f De ndr o b i i
, l g X i a o f a n , W a n g W e n j i a n
( B o z h o u T e a c h e r s C o U e g e , B o z h o u 2 3 6 8 0 0 , C h i n a )
分别取 0 . 4 、 0 . 8 、 1 . 2 、 1 . 6 、 2 . 0 m L盐酸金 刚烷胺标储液 于1 0 m L容量瓶 中 , 用氯仿稀 释至刻度 , 即得 2 、 4 、 6 、 8 、 1 0 1  ̄ r : , / m L的盐酸金 刚烷 胺溶 液 , 用 酸 性染 料 比色法 测定 吸光 度 。
石斛生物碱的提取与检测
石斛总生物碱的提取与检测石斛属(Dendrobium Sw.)是兰科植物中一个较大的属,全世界有1500多种,广泛分布于亚洲、欧洲和大洋洲等热带及亚热带地区。
我国有80多种,主要分布于西南、华东及华南地区。
在我国传统医学中,石斛为常用贵重药材,药用历史悠久。
该属植物的化学成分主要有生物碱、菲类、联苄类、芴酮、香豆素、倍半萜、多糖及挥发油等。
生物碱(alkaloid)是存在于生物体(主要为植)中的一类含氮的碱性有机化合物,大多数有复杂的环状结构,氮素多包含在环内,有显著的生物活性,是中草药中重要的有效成分之一。
生物碱类成分是最早从石斛属植物中分离得到的化合物。
目前,从石斛属植物中共分的34中生物碱,其中倍半萜类生物碱19种、四氢吡咯类生物碱3种、苯酞四氢吡咯类生物碱3种、吲哚联啶生物碱5种、咪唑类生物碱2种、其他新型2种。
石斛生物碱的药理作用主要表现在抗肿瘤,对心血管、肠胃道抑制作用及止痛退热等作用。
一、实验原理游离态的生物碱一般不容或难弄于水,易溶于乙醇、丙醇、乙醚、氯仿等有机溶剂。
生物碱与酸结合成盐溶于水,在遇碱又变成不溶于水的游离态生物碱。
生物碱的盐与生物碱相反,大部分易溶于水和乙醇,而难溶于其他有机溶剂。
利用此性质可进行生物碱的提取、分离和精制。
用溴钾酚绿酸性染料比色法测定。
在pH4.5缓冲溶液中,石斛碱(或其他生物碱)盐的阳离子与溴钾酚绿的阴离子结合成黄色的离子对,并定量地被氯仿提取。
加碱碱化后,石斛碱变成碱式,离子对被破坏,定量释放出的溴钾酚绿(碱式蓝色),它与石斛碱含量成正比,根据定量释放出的溴钾酚绿在620nm处测定吸收度,从而确定生物碱的含量。
各种石斛中多种生物碱分子的相对分子质量差异不大,大多一个氮原子,与溴钾酚绿1:1的离子对结合,故可用石斛碱纯品做对照来计算总生物碱含量。
二、材料与仪器(1)材料:石斛药材。
(2)试剂:邻苯二甲酸氢钾,氢氧化钠,溴钾酚绿,无水乙醇,甲醇,氨水。
石斛碱检测
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石斛碱检测
石斛碱(Dendrobine)是一种吡咯里西啶衍生物类生物碱,是从兰科植物金钗石斛的茎中提取分离得到的。
具有调节血糖、降血压、抗流感以及抗炎症等作用,具有较高的研发价值。
迪信泰检测平台采用高效液相色谱(HPLC)和液质联用(LC-MS)技术,可高效、精准的检测石斛碱的含量变化。
此外,迪信泰检测平台还提供其他多种生物碱检测服务,以满足您的不同需求。
HPLC和LC-MS测定石斛碱样本要求:
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。
周期:2~3周。
项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告,报告包括:
1. 实验步骤(中英文)。
2. 相关质谱参数(中英文)。
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4. 原始数据。
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铁皮石斛生物总碱提取纯化研究
2013年第1期广东化工第40卷总第243期 · 13 · 铁皮石斛生物总碱提取纯化研究杜平1,张利2,罗容珍2,易学文2,赵香琼2(1.四川理工学院材料与化学工程学院,四川自贡 643000;2.四川理工学院化学与制药工程学院,四川自贡 643000) [摘要]文章采用纤维素酶法提取铁皮石斛中的生物总碱,用离子交换树脂对铁皮石斛生物总碱进行了初步纯化,采用正交试验法优选石斛总碱的纯化条件。
实验结果表明,离子交换树脂法最佳纯化条件为:上样速度为10 mL/3 h,洗脱液(氨水)浓度为1 mol/L,洗脱速度为50 mL/4 h,生物总碱最佳收集段为洗脱液流出20~30 mL时。
本工艺操作简便,成本较低,值得进一步深入研究。
[关键词]铁皮石斛;生物总碱;纤维素酶法;离子交换树脂;纯化[中图分类号]TQ [文献标识码]A [文章编号]1007-1865(2013)01-0013-02Study on the Extraction and Purification of D.candidum Total AlkaloidDu Ping1, Zhang Li2, Luo Rongzhen2, Yi Xuewen2, Zhao Xiangqiong2,Liu Xingyong2(1. School of Material and Chemical Engineering, Sichuan University of Science & Engineering, Zigong 643000;2. School of Chemistry and Pharmaceutical Engineering, Sichuan University of Science & Engineering, Zigong 643000, China)Abstract: In the thesis, alkaloid was extracted from dendrobium candidum with cellulase, ion exchange resin were used to purify it, in which the orthogonal experimental method was adopted. The result showed that the best purification condition for ion exchange was that the sample speed was 10 mL/3 h, eluent (ammonia water) density was 1 mol/L, elution speed was 50 mL/4 h, and finally when the eluent outflowed from 20 to 30 mL, it was the best time to collect total alkaloid. With advantages of simpleness, and low cost, it was worthy for further research.Keywords: D.candidum;total alkaloid;cellulose;ion exchange resin;purification石斛是常用名贵中药材,为兰科(Orchidaceae)石斛属(Dendrobium)多种植物的新鲜或干燥茎的统称。
铁皮石斛提纯实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 学习并掌握铁皮石斛的有效成分提取方法。
2. 探究不同提取工艺对铁皮石斛提取效果的影响。
3. 对提取过程进行优化,提高提取效率。
二、实验原理铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)是一种珍贵的中药材,具有滋阴清热、生津止渴、润肺止咳等功效。
其主要活性成分包括石斛多糖、石斛碱等。
本实验采用超声波辅助提取法,利用超声波的高频振动作用,提高提取效率。
三、实验材料与仪器材料:1. 铁皮石斛药材(干燥)2. 乙醇3. 甲醇4. 水浴锅5. 超声波提取仪6. 离心机7. 精密天平8. 容量瓶9. pH计仪器:1. 1000ml容量瓶2. 50ml容量瓶3. 烧杯4. 玻璃棒5. 滤纸6. 铁皮石斛粉碎机四、实验方法1. 样品制备:将干燥的铁皮石斛药材粉碎,过筛,取适量粉末作为实验样品。
2. 超声波辅助提取:将样品置于50ml容量瓶中,加入适量乙醇或甲醇,超声提取30分钟,离心分离,取上清液。
3. pH调节:将提取液用pH计测定,根据需要调节pH值。
4. 浓缩:将提取液在40℃下减压浓缩至一定体积。
5. 纯化:采用大孔树脂进行纯化,收集纯化液。
6. 测定:对纯化液进行含量测定,如石斛多糖、石斛碱等。
五、实验结果与分析1. 提取率:采用超声波辅助提取法,提取率可达80%以上,明显高于传统提取方法。
2. pH值:通过调节pH值,可以提高提取效果,最佳pH值为5.0。
3. 纯化效果:采用大孔树脂纯化,纯化率可达90%以上,纯度较高。
4. 含量测定:通过测定石斛多糖、石斛碱等含量,验证提取效果。
六、实验结论1. 超声波辅助提取法是一种高效、简便的铁皮石斛提取方法,具有较好的应用前景。
2. pH值对提取效果有显著影响,最佳pH值为5.0。
3. 大孔树脂纯化技术可有效提高铁皮石斛提取物的纯度。
七、实验讨论1. 本实验采用超声波辅助提取法,提取效率较高,但提取过程中需要注意温度、时间等因素的控制。
石斛中总生物碱和多糖的含量测定
12 仪 器 与试 药 .
73 紫外 分 光 光 度 计 ( 海 分 析 仪 器 厂 ) 20型 上 ; p 45缓 冲液 ( .m lL H. 02 o・ ~,p H=4的 邻 苯 二 甲酸
氢 钾 , 用 0 2 o ・ 氢 氧 化 钠 调 至 p =4 5 : .m l L H .)
12 8 ℃馏 分 。称 取 1g 7 ,加 水 10 混 匀 ,溶 解 即得 , 5g
金钗 石 斛 ( D. nbe) 和 铁 皮 石 斛 ( oi l D.
cni )是 《 Байду номын сангаасd m u 中国药 典》 收 载 的两 个 石 斛 品种 ,
也是 研 究 最 多 的品 种 。本 文 以酸 性染 料 比色法 测 定
00 %溴 甲 酚 绿 溶 液 ( 取 溴 甲 酚 绿 4 0 g . 4 称 0.m ,加 lO l H . 冲溶 液 溶 解 ,滤 过 即得 ) .l o・ O m 45缓 p ;0Om l
L 氢氧 化 钠 无 水 乙 醇 溶 液 ;石 斛碱 对 照 品 ( 析 分
纯 ,浙 江 省 医 学 科 学 院 提 供 ) 苯 酚 试 剂 ( 酚 ; 苯 2 0 ,加入 铝 片 02 0g .g和 碳 酸 氢 钠 0 1 .g蒸 馏 ,收 集
维普资讯
・
46 ・ 2
中国药 事 2 0 0 2年第 1 6卷第 7期
0.0 0
1.9 2
2. 57
3.6 tm . 8 , n
0 00
.
12 .9
2. 7 5
3 8 tr i .6 / n a
0. O0
1Z9 .
2. 57
表 2 样 品测 定结果
铁皮石斛中石斛碱、多糖的含量测定
0 . 9 9 9 7 , n= 6 ) , 平均加样回收率 为 9 7 . 1 %; 多糖在 0 . 0 2— 0 . 1 0 g / L范围内线性 关系 良好 ( r=0 . 9 9 9 5,
n= 6 ) , 平均加样 回收率为 9 4 . 9 % 。结 论 : 本 研 究建 立 的 方 法 测 定 准 确 、 重复性好 , 可 更 好 地 控 制 铁 皮 石
2 . 2 . 1 石斛碱对照 品溶液 的制备
典》 内容 , 为完善铁皮石斛 的质量 评价提供依据 。
1 材料
精密称取石斛碱对 照品 5 0 . O l m g 至1 0 0 m L 量瓶 中 , 加
甲醇定 容至 刻度 , 摇匀 , 得5 0 0 . 1 mg・ L 石斛 碱对 照品母 液 。精密量取 1 m L石斛碱母 液至 1 0 m L量瓶 中 , 加 甲醇定
提高外周 白细胞数 , 促进淋 巴细 胞产生 移动抑 制 因子 , 可有
2 . 1 . 2 多糖 供试 品的制备 取上述过滤后药材粉末 , 挥干溶剂 , 加水 2 0 0 0 m L , 加热 回流 2小时 , 放冷 , 转移 至 2 5 0 mL量瓶 中 , 用少量 水分 次洗 涤容器 , 洗 液并 入同一量 瓶中 , 加水至刻度 , 摇匀 , 滤过 , 精密 量取续滤液 2 m L, 置1 5 m L离心管 中, 精密 加入 9 5 % 乙醇 , 摇匀 , 冷藏 1小时 , 取 出, 离心 2 0分 钟 , 弃 去上清液 , 沉淀加
物碱类 、 多糖类 、 菲类 、 联苄 母 核类 _ 4 J , 其 中生物 碱类 、 多糖 类药理 活性 较为显著 。石 斛碱型 倍半萜 类生物 碱为 石斛 属
2 . 1 . 1 石斛碱供试 品的制 备 取鲜 铁皮石斛样品 , 置烘 箱 中 5 0  ̄ C, 干燥 , 粉碎 , 过三 号
快速测定铁皮石斛总生物碱含量方法的优化
舱 ) 总 生物 碱在 0 . 0 1 9% 一 0 . 0 4 3% , 生 物碱含 量 因种 质和 种植 年 限的 不 同 而异 , 其 中云 南 产铁 皮 石斛总生物碱明显高于浙江产铁皮石斛 。1 9 6 4年 ,
收稿 日期 : 2 o 1 3— 0 9 — 2 8 基金项 目: 云南省 自然科学基金项 目( 2 0 1 2 F B 1 9 3 ) 作者简介 : 刘 莉( 1 9 8 2一 ) , 女, 云南 昆明人 , 助研 , 硕士, 主要 从事 中药农业研究 , ・ 为通讯作者 , E . m a i l : w y l  ̄ 0 1 2 @1 2 6 . e o m。
要: 通过取样 量、 超 声时间、 漫提剂量 、 粒径等 4 个石斛 生物碱 的超声提取 影响 因素的正交和 单 因素试验 。结果表 明, 石斛 生
物碱含 量超声提 取测定 的最佳参数 : 0 . 0 5 0 g 的取样 量、 6 o目的粒径、 5 0 r a i n的超 声时间、 6 o的漫提试 剂用量 与取样 量比。该方 法
具 有样 品前期处理时间短, 测定仪器操作 简便 , 测定速度快、 样 品用 量少的特点 , 能在较 短时 间内对 大量单株个 体进行 检测鉴定 , 为石斛的 品质育种提供 了有效途径和 手段。
关键词 : 石斛 ; 超声提取 ; 总生物碱含量
中图分类号 : S 5 6 7 . 9 文献标识码 : A
应, 且每种石斛 的生物碱含量变化很大。铁皮石斛 具有抗衰老 、 抗肿瘤 、 降低血糖、 提高免疫功能等作 用, 对 恶 性肿 瘤 、 胃肠 道 疾病 、 糖尿病、 白 内障 、 关 节
炎、 血栓 闭塞性 脉管 炎 及 慢 性 咽炎 等 疾 病 具 有 很 好 的疗 超声 3 种不同方 式及甲醇 、 乙醇、 氯仿、 丙酮等不同溶剂对铁皮石斛
石斛中生物碱的提取分析
石斛中生物碱的提取分析安徽丰原发酵技术工程研究有限公司233010【摘要】金钗石斛为我国传统的名贵中药材,药用价值广泛,其化学成分含生物碱类、多糖类、黄酮类等,其中生物碱类其主要特征性活性成分。
金钗石斛生物碱在改善胰岛素抵抗、保护急性脑缺血损伤、改善大脑记忆和认知功能障碍、抗肿瘤等方面有明显的疗效。
将金钗石斛用氨水浸润后,以氯仿为溶剂,在不同液固比、不同提取时间和不同提取温度下提取生物碱,建立金钗石斛生物碱提取过程的动力学模型。
【关键词】生物碱;金叉石斛;提取;分析作为我国传统的名贵中草药,金钗石斛喜温暖、湿润、阴凉的环境,主要分布于贵州、四川、云南、广西、湖南、湖北、福建等长江以南的亚热带地区。
早在《神农本草经》中就描述了石斛具有滋阴清热、生津益胃、润肺止咳、明目强身等功效,现代药理研究发现金钗石斛在抗肿瘤、抗衰老、改善记忆和提高免疫力等方面具有应用价值。
随着国内外石斛研究者运用现代科学技术手段,从石斛中分离出生物碱类、多糖类、黄酮类、酚类、香豆素类等多种生物活性成分,其中生物碱属其特征性成分。
一、金钗石斛概述生物碱属含有氮杂环的天然有机化合物,其遍及植物体中。
日本人铃木秀干在1932年首次从金钗石斛中分离出石斛碱,随后我国的科学家在1935年从金钗石斛中再次提取到该化合物。
石斛品种繁多,国内石斛植物有70余种,而具有栽培药用石斛约30多种,其中主要以金钗石斛、霍山石斛、铁皮石斛、美花石斛、束花石斛等为主。
金蓉鸳通过对比11种不同石斛的生物碱含量,发现不同的石斛属植物中生物碱的含量差异很大,且金钗石斛所含生物碱要远高于其他品种,其含量达0.41%-0.64 %。
研究发现,不同生长期金钗石斛生物碱的含量也具有差别,其中1年生长期金钗石斛中生物碱的含量最高为0.55%。
随着金钗石斛生物碱类化学成分进行大量的深入研究,现已鉴定的生物碱类主要有石斛碱、金石斛碱、石斛副碱、石斛星、石斛酮碱、石斛次碱等24种,其中运用催化等方式合成的有10种和季铰生物碱5种。
石斛中总生物碱和多糖的含量测定
品种 金钗石斛
铁皮石斛
# 427 #
表 2 样品测 定结果
批号
1 2 3 1 2 3
平均百分含量( % )
014566 014528 014672 01 02649 01 02557 01 02579
RSD ( % )
310 215 217 414 315 312
212 多糖的含量测定 21211 多糖的提取精制
省力, 且提取结果与药典方法一致。 412 采用高效液相色谱法测定六味木香散中荜茇 的含量, 其结果的精密度, 重现性较好。结果准确 可靠。
参考文献
1 中国药典 1 一部, 2000: 414 2 中国药典 1 一部, 2000: 188
石斛中总生物碱和多糖的含量测定
李亚芳 张晓华 孙国明 ( 浙江省杭州市第一人民医院 310006)
52162
951 6 1031 3 51 2
金钗石斛总生物碱提取及含量测定方法的改进
Z h a o F u k u n , Wu Q i n , L u 0
e n g .‘ s J i n g s h a n
,
W e n j i n , Y a o X i a o d o n g ,Z h a n g Ma o s h —
第3 8卷 第 5期 2 0 1 5年 1 0月
遵
义
医学Βιβλιοθήκη 院学报 V0 I . 3 8 NO. 5 oc t .2 01 5
J o u r n a l o f Z u n y i Me d i c a l Un i v e r s i t y
金钗 石 斛 总 生 物碱 提 取 及 含 量 测定 方 法 的 改 进
赵 福 坤 , 吴 芹 , 陆远 富 , 杨 文进 , 姚 晓东 , 张茂 生 , 石京 山
( 1 .遵 义医学院 药理学教研 室暨基础药理省部共建教育部重点实验室 , 贵州 遵义
学教 研 室 , 贵 I , I 遵义 5 6 3 0 9 9 )
5 6 3 0 9 9 ; 2 .遵义医学 院 药学 院药物化
( 1 . D e p a r t m e n t o f P h a r ma c o l o g y a n d K e y L a b o r a t o r y f o r B a s i c P h a r m a c o l o g y o f Mi n i s t y r o f E d u c a t i o n ,Z u n y i
[ 摘
要 ]目的 提取较 高纯度的金钗 石斛总生物碱 , 并简单 、 准确地测 定总生物 碱含量 。方 法 金钗 石斛药材 以 9 0 % 乙醇
l 0倍量浸 泡 1 2 h , 然后加 热煮 沸 2 h , 连续 3次。醇提液减压浓缩至无醇味后 以5 %盐酸溶解 , 抽滤 , 酸水溶液经石油醚萃取 3次 , 脱脂 , 浓氨水碱化至 p H=1 0 , 碱水 液经 三氯 甲烷萃 取 2次 , 回收溶剂 , 即得生 物碱 粗提 物 。然后 用氯 仿 一甲醇 溶液 ( 1 : 1 , v / v ) 溶解 , 过L H一 2 0凝胶柱 , 回收溶剂 , 冷冻干燥 , 得石斛生物碱提取物 。分别采用气相色谱法和酸性染料 比色法测 定提取物 中石斛碱 以及 总生物碱 的含量 , 以石斛碱 ( C H N O : ) 为基准物计 算金钗 石斛 中总生 物碱 的含 量。结果 提取 5 药材 , 得 提取 物干膏 2 2 . 5 g , 气相色谱法测得石斛碱含量为 6 1 . 6 %, 酸性染料 比色法 测得 总生物碱含 量为 7 3 . 2 % 。结论
铁皮石斛有效成分的检测
铁皮石斛有效成分的检测铁皮石斛具有增强机体免疫力、抗肿瘤、促进消化液分泌、抑制血小板凝集、降血脂、降血糖、抗氧化、抗衰老和退热止痛等药理作用。
而这些功效与作用是铁皮石斛内含有的多糖、氨基酸、微量元素、菲类、联苄类、酚酸类和生物碱等类型的化学成分在起作用,下面小编向大家介绍铁皮石斛有效成分的检测。
一、石斛多糖判断铁皮石斛质量的好坏,一般常用多糖含量的高低来衡量。
这是因为多糖类成分是铁皮石斛中具有抗肿瘤作用和免疫增强作用的活性成分。
铁皮石斛生理活性的强弱与其多糖含量密切相关。
多糖含量越高,质越重,嚼之越有黏性,质量更优。
采用GB/T5009.8-2008国家标准规定的方法,用酸水解法测定铁皮石斛中多糖含量。
称取20 g粉碎后的试样,置250 mL容量瓶中,加入200 mL水,在45 ℃水浴中加热1 h,冷却沉淀。
吸取200 mL 上清液加入5 mL乙酸锌溶液及5 mL亚铁氰化钾溶液,静置30 min,用干燥滤纸过滤,取滤液加入盐酸,水浴加热冷却后,加入2滴甲基红指示液,用氢氧化钠溶液中和至中性。
然后用碱性酒石酸铜溶液滴定测试。
二、氨基酸氨基酸是人类必需的重要营养成分,铁皮石斛含有16 种氨基酸,分别为谷氨酸、天门冬氨酸、甘氨酸、缬氨酸、亮氨酸、苏氨酸、丝氨酸、丙氨酸、胱氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、组氨酸、精氨酸、脯氨酸、酪氨酸等,其中谷氨酸、天门冬氨酸、甘氨酸、缬氨酸和亮氨酸等主要氨基酸的含量非常接近,总和占总氨基酸含量的53%。
人体必需的氨基酸中除了色氨酸其他均含有,某些氨基酸还具有生物活性和疗效。
铁皮石斛性味甘淡微咸的特点,正是由氨基酸的组成特性导致的。
采用GB/T5009.124-2003国家标准规定的方法,用氨基酸自动分析仪测定铁皮石斛中氨基酸的含量。
三、微量元素的测定铁皮石斛含有铜、锌、铁、锰、钙、镁、钾等7种主要微量元素。
分别采用GB/T5009.90-2003、GB/T5009.91-2003、GB/T5009.92-2003、GB/T5009.13-2003和GB/T5009.14-2003国家标准规定的方法,分析测定铁皮石斛中各种微量元素的含量。
气相色谱法测定金钗石斛药材中石斛碱的含量
为 1148% 。
216 重现性试验 取同一批号的药材共 5份 (浙
江省医学科学 院提供 ) , 按上述方法制备供试品溶
液, 依法测得 5份药材中石斛碱的百分含量, RSD为
1144% 。
217 加样回收率试验 取上述已知含量的药材 5 份, 精密称定, 分别精 密添加一定量 的石斛碱对照
品, 按供试品溶液制备项下操作, 计算其平均回收率
有良好的线性关系。
214 精密度试验 取上述对照品溶液重复进样 5 次, 测得石斛碱的峰面积比值 (石斛碱峰面积 /内标
物峰面积 )的 RSD为 0173% 。
215 稳定性试验 取上述供试品溶液, 分别在 0
h、1 h、2 h、4 h、8 h分别进样, 测得 8 h内石斛碱的
峰面积比值 ( 石斛碱峰面积 /内标物峰面积 )的 RSD
23标准曲线和线性范围精密称取金钗石斛对照品以内标液分别配制成01125mgml0225mgml09mgml18mgml36meml的各浓度溶液按气相色谱实验方法操作进样量均为1txl以浓度mgm1为横坐标峰面积比值各浓度标准溶液峰面积内标物峰面积为纵坐标绘制标准曲线结果回归方程为
化合物 结 构初 步定 为 4-羟 脯氨 酸 ( 4-hydroxy proline) , 根据文献 142可知羟脯氨酸具有四种构 象 2s, 4s型; 2r, 4r型; 2r, 4s型; 2s, 4r型 ( 18e 时 ), 通过对 比各种羟脯氨酸的旋光与熔点, 结晶化合物的结构 定为 2s, 4s-4-羟脯氨酸, 结构式见图 1, 该化合物系 首次从檀香中分离出来。
中药石斛的药材品种来源十分复杂, 各品种的 鉴别均没有合适的定量指标和方法, 因此药材的品 质难以保证。作为石斛药材的品种之一 ) ) ) 金钗石 斛, 其已有的含量测定方法多采用酸性染料分光光 度法, 其操作繁复且稳定 性差, 测定 结果准确度不 高。我们经过研究, 最终选择以石斛碱作为指标成 分, 采用 GC 法测定金钗石斛药材中石斛碱的含量, 操作简便, 准确度高, 适用性好。 1 仪器与材料
石斛中多糖和生物碱的含量测定
为此 , 者从 成分含 量上 进行 比较 探索 , 苯酚一 硫 酸法 和酸 性染 料 比色法 测 定所 收 集 的 1 石 斛 的 多 笔 用 9种
糖和总生物碱含量 一 , 6’ 为其品种选育推广提供参考 。 J
20 。余 下操 作 同标 准 曲线制 备 。 .mL 换算 因子按 下式 计算 :
厂= W
式中 为换算 因子; C为多糖溶液 中相 当于葡萄糖 的浓度 , 由回归方程得出 ; D为多糖 的稀释因素 ; 为多糖的称样量 。依公式计算厂 3 1 。 = .7
13 16 样 品 中 多糖 提 取 .. . 称 取石 斛 粉 末 0 5 , 10 .g 置 0 mL圆底 烧 瓶 中 , 入 8 % 乙醇 10 L, 6 加 0 0 m 于 o~ 7 ̄ 0C水浴 回流提 取 1 , h 热滤 。用 热 乙醇 5 mL洗涤 残渣 及 滤纸 4次 , 渣 中加入 8 mL纯 水 冷 浸过 夜 , 于 残 5 再 6 ℃水浴 温浸 1 , O h 趁热 抽滤 。用 热水 5 mL洗 涤残 渣及 滤 纸 4次 。合 并 洗液 于滤 液 中 , 移至 10 L容量 瓶 0m 中, 以纯 水定 容 , 备用 。 13 17 样 品 中多糖含 量测 定 ... 分别 吸取 各样 品 液 10L 01 . L至试 管 中 , 加纯 水 稀 释 至 20 , 匀 。余 再 .mL 摇 下操 作 同标 准 曲线制 备 。样 品 中多糖 的含量 按下 式 计算 : 多糖 含量% : ×10 0%
13 12 标 准 溶液 制 备 ... 度 。摇匀 , 用 。 备 称取 已恒重 的葡 萄糖 1. g置 1mL容量 瓶 中 , 少 量 纯 水 溶 解后 定 容 至刻 O1 , 0 m 加
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石斛总生物碱的提取与检测
石斛属(Dendrobium Sw.)是兰科植物中一个较大的属,全世界有1500多种,广泛分布于亚洲、欧洲和大洋洲等热带及亚热带地区。
我国有80多种,主要分布于西南、华东及华南地区。
在我国传统医学中,石斛为常用贵重药材,药用历史悠久。
该属植物的化学成分主要有生物碱、菲类、联苄类、芴酮、香豆素、倍半萜、多糖及挥发油等。
生物碱(alkaloid)是存在于生物体(主要为植)中的一类含氮的碱性有机化合物,大多数有复杂的环状结构,氮素多包含在环内,有显著的生物活性,是中草药中重要的有效成分之一。
生物碱类成分是最早从石斛属植物中分离得到的化合物。
目前,从石斛属植物中共分的34中生物碱,其中倍半萜类生物碱19种、四氢吡咯类生物碱3种、苯酞四氢吡咯类生物碱3种、吲哚联啶生物碱5种、咪唑类生物碱2种、其他新型2种。
石斛生物碱的药理作用主要表现在抗肿瘤,对心血管、肠胃道抑制作用及止痛退热等作用。
一、实验原理
游离态的生物碱一般不容或难弄于水,易溶于乙醇、丙醇、乙醚、氯仿等有机溶剂。
生物碱与酸结合成盐溶于水,在遇碱又变成不溶于水的游离态生物碱。
生物碱的盐与生物碱相反,大部分易溶于水和乙醇,而难溶于其他有机溶剂。
利用此性质可进行生物碱的提取、分离和精制。
用溴钾酚绿酸性染料比色法测定。
在pH4.5缓冲溶液中,石斛碱(或其他生物碱)盐的阳离子与溴钾酚绿的阴离子结合成黄色的离子对,并定量地被氯仿提取。
加碱碱化后,石斛碱变成碱式,离子对被破坏,定量释放出的溴钾酚绿(碱式蓝色),它与石斛碱含量成正比,根据定量释放出的溴钾酚绿在620nm处测定吸收度,从而确定生物碱的含量。
各种石斛中多种生物碱分子的相对分子质量差异不大,大多一个氮原子,与溴钾酚绿1:1的离子对结合,故可用石斛碱纯品做对照来计算总生物碱含量。
二、材料与仪器
(1)材料:石斛药材。
(2)试剂:邻苯二甲酸氢钾,氢氧化钠,溴钾酚绿,无水乙醇,甲醇,氨水。
(3)仪器:恒温水浴锅,恒温电热鼓风干燥箱,超声波振荡器,分光光度计,冷凝管,pH计,分液漏斗,烧杯,容量瓶,圆底烧瓶,分析天平,分液漏斗。
三、实验步骤
1、材料的预处理
石斛茎干燥后通过粉碎机粉碎过60目筛,放置干燥烧杯中储藏使用。
2、不同提取方式和提取时间分别采用3种提取方法制备样品液。
A.超声提取法:精密称取铁皮石斛粉末(过60目)2.0g于磨口三角瓶中,用适量10%
氨水润湿后,加入50mL甲醇并密闭静置30min,进行0.5、1h超声提取,过滤,于
65℃下旋转蒸发至干后,用5mL甲醇溶解并定容,即为供试品溶液
B.水浴回流提取法:精密称取铁皮石斛粉末(过60目)2.0g于磨口三角瓶中,适量10%氨水润湿后,加入50mL甲醇并密闭静置30min,于85℃下进行2、4h水浴回流提取,趁热过滤,滤液于65℃下旋转蒸发至干后,用5mL甲醇溶解并定容,即为供试品溶液。
C.索氏提取法:精密称取铁皮石斛粉末(过60目)2.0g,适量10%氨水润湿后,加入甲醇100mL并密闭静置30min,于85℃下分别进行4、8、10h的索氏提取,溶液于65℃下旋转蒸发至干后,用5mL甲醇溶解并定容,此即为供试品溶液。
以上供试品溶液用0.45μm微孔滤膜过滤后进行上机测定,考察提取方式对样品化学成分的影响。
3、生物碱含量的测定
1)标准曲线制定
精密吸取石斛碱1.00mg置100ml容量瓶中加甲醇至刻度。
精密量取1.00ml、
2.00ml、
3.00ml、
4.00ml、
5.00ml分别置分液漏斗中,然后用甲醇准确稀释至
10.0ml加入pH4.5的缓冲溶液5.0ml和0.04%溴钾酚绿溶液1.0ml,剧烈震荡3min,
静置30min,溶液经甲醇浸泡处理并干燥后的药棉过滤,取滤液6.0ml加
0.01mol/L氢氧化钠无水乙醇液1.0ml摇匀。
以甲醇10.0ml同样操作,做空白对
照。
于波长620nm处分别测得吸收度。
以石斛碱量为横坐标,吸收度纵坐标,
石斛碱量在1~5ug/ml范围内符合比尔定律。
2)样品测定
精密吸取样品试剂10.0ml,加入pH4.0~6.0缓冲液5.0ml,0.04%溴钾酚绿1.0ml,
显色测定同标准曲线操作,侧吸收度,按标准品对照法计算总生物碱的含量(以
石斛碱计算)计算公式如下:
总生物碱含量=(A
样品/A
标准品
)X(C
标准品
/W
样品量
)X100%
其中A表示吸收度,C表示浓度,W表示样品质量。
4、含量的测定方法学考察
(1)精密实验:精密量取3ml标准溶液于分液漏斗中,按标准曲线制定操作,测定5次结果以均值RSD判断。
(2)稳定性实验:按标准曲线方法操作,于甲醇提取液加碱释放染料后,间隔5min、15mn、30min、60min、120min测其吸收度。
(3)重现性实验:取同一样品5份,按样品提取步骤操作,分别吸取个样品液
10.0ml置分液漏斗中,显色测定吸收度。
(4)加样收率实验:称已知含量的5份同样样品0.2g,用适量氨水浸湿密塞放置30min分别加入石斛碱对照样0.1mg的甲醇溶液10.0ml按重现性实验操
作。
加样收率=(测定量—样品量)/加入量X100%。