发酵饲料中乳酸含量的测定方法

发酵饲料中乳酸含量的测定方法

微生物发酵饲料的生产菌种主要有乳酸菌、酵母菌和芽孢菌，其中乳酸菌包括发酵乳杆菌、嗜酸乳杆菌和粪肠球菌3种。乳酸菌是发酵的主角，其在厌氧条件下大量繁殖占支配地位时产生大量的乳酸，抑制其他不良微生物的生长繁殖，从而制成了优质的微生物发酵饲料。豆粕中加入乳酸菌后，产品不仅小肽含量高，而且具有乳香味，诱食性极佳。因此，发酵饲料中乳酸含量的高低是判断微生物发酵饲料品质优劣的一个重要指标。

1 原理

乳酸在铜离子的催化下，与浓硫酸作用生成乙醛，乙醛能与对羟基联苯作用生成在565nm 处有特征吸收的紫色物质。在一定浓度范围内，乳酸含量与565nm 处吸光度呈线性关系，因此可以通过测定565nm 处的吸光度来测定乳酸的含量。

2 材料、试剂与仪器

无水乳酸锂、对羟基联苯、钨酸钠、硫酸铜、氢氧化钙、浓硫酸均为分析纯试剂。

钨酸溶液：0.667mol/L硫酸及10%(W/V)钨酸钠溶液等体积混合，使用前配制；20%(W/V)硫酸铜溶液：称取硫酸铜20g，加蒸馏水定容至100ml；对羟基联苯溶液：称取对羟基联苯1.5 g溶于100ml 的0.125mol/L氢氧化钠溶液中( 配制时加热助溶，溶解后为澄清液体)，贮存于棕色瓶中，保存于4℃冰箱；乳酸标准储存液(0.5mg/ml)：精确称取无水乳酸锂53.25mg，溶于50ml蒸馏水中，加0.5mol/L 硫酸10ml，后加蒸馏水定容至100ml，混匀后保存于4℃冰箱。

紫外可见分光光度计、离心机、恒温水浴锅、具塞试管。

3 样品预处理

1 g发酵饲料溶解于100 mL 蒸馏水中，4000 rpm 离心10 min，以除去菌体和碳酸钙沉淀，吸取上清液0.5ml置于洁净离心管中，加入等体积1mol/L硫酸，静置，10000r/m离心10min，以除去硫酸钙(若发酵时没加入碳酸钙，将发酵液离心取上清液即可)，取上清液适当稀释，吸取稀释液2.00mL于洁净离心管中，加入2.00mL钨酸溶液，混匀，室温静置，直至溶液中出现明显絮状物，10000r/m 离心10min，取上清液置于10ml 洁净离心管中，60℃水浴保温30min 左右，冷却待用。

4 标准曲线的绘制

0.5mg/ml乳酸标准液与发酵液同样预处理后，取0、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35、0.40、0.45、0.50、0.55、0.60、0.70、0.80、1.00ml处理液，分别加进15 支预先编号的试管，再用蒸馏水补足体积至5ml，按次序加入氢氧化钙0.05g，20%硫酸铜0.8ml，浓硫酸6ml，对羟基联苯0.125ml，静置时间15min，沸水浴加热显色时间5min。在565nm下分别测定吸

光度。以乳酸含量为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。

5 样品测定

精确吸取5mL处理后的样品于具塞试管中按标准曲线制作的方法测定吸光度，然后换算出样品中乳酸含量（%）。