补骨脂黄酮体的提取

应用：pH梯度法分离
7，4′-OH > 7或4′-OH > 其他位-OH > 5-OH
NaHCO
+
-
-
-
3
Na2CO3
+
+
-
-
NaOH
+
+
+
+
2.碱性：
Cl
O+
γ -吡喃酮环1-氧原子
OH
微弱碱性（孤对电子，接受质子）
仅溶于强的、浓酸 +水 （浓硫酸）
烊 盐（呈色） 应用
初步鉴别黄酮母核类型：黄酮、黄酮醇 —— 黄~橙色，并有荧光 二氢黄酮 —— 橙红（冷）、紫红（热） 查耳酮 —— 橙红~洋红 异黄酮（二氢）—— 黄色 橙酮 —— 红~洋红
A. 化合物中酚羟基数目越多，被聚酰 胺吸附越牢，越难洗脱。 酚羟基数目
相同时，聚酰胺对邻位羟基吸附弱于间、 对位，容易洗脱。
B. 共轭系统多的形成氢键能力强，因 此黄酮类化合物骨架不同，聚酰胺的吸 附能力也不同，吸附能力从小到大依次 为：异黄酮 < 二氢黄酮 < 黄酮 < 黄酮 醇
C. 有分子内氢键的羟基吸附弱 .
实验目的和要求
掌握补骨脂黄酮体的提取分离原理及操 作： 溶剂法提取、聚酰胺柱色谱分离
熟悉黄酮类化合物在聚酰胺上的吸附规 律与结构的相互关系。
不同层析系统原理
硅胶：是根据物质在硅胶上的吸附力不同而得到 分离，硅胶为极性吸附剂，化合物的极性越强， 吸附剂对其吸附能力就越强；洗脱剂的极性越大， 其洗脱能力就越强。
显色反应
1．还原显色反应
反应类型
鉴别特征
鉴别意义
备注
盐酸-镁粉 黄酮、二氢黄酮、 红~紫红 黄酮类特征性 假阳性
反应
黄酮醇、二氢黄酮醇 红~紫红 鉴别反应
（花色素
）
（最常用）
查耳酮、橙酮、 （-）
儿茶素类、异黄酮 （-）
四氢硼钠 还原反应
二氢黄酮、二氢黄酮醇 红~紫红 二氢黄酮类特有
其它黄酮类
（-）
聚酰胺“双重色谱”原理
苷与苷元聚酰 胺色谱
正相色谱
反相色谱
聚酰胺：极性固定相（极性酰胺基团） 非极性固定相（非极性脂肪链）
洗脱剂：有机溶剂（氯仿-甲醇，极性小） 含水溶剂（甲醇-水，极性大）
先洗脱：游离黄酮（苷元，极性小）
苷（极性大）（柱色谱分离）
Rf值： 苷元 > 苷
苷元 < 苷（TLC色谱鉴别）
补骨脂乙素(isobavachalcone) ：分子 量324.36。黄色片状结晶，mp. 166～ 167℃。
二氢黄酮类：2、3位双键被氢化而成。
HO
O
OR
O
补骨脂甲素、乙素结构差异
OH
HO
O
O
补骨脂甲素
补骨脂乙素
二氢黄酮和查尔酮，异戊烯基取代位置不同使得两者的极性差异
补骨脂乙素次生代谢产物转换
酸水层
CH2Cl2层 回收CH2Cl2至干，少量50%甲醇（现配）溶解（超 声、加热助溶），上聚酰胺柱，50% MeOH（现配
）洗脱，至洗脱液呈现黄色
80%甲醇（现配）洗脱，至洗脱液颜色变浅
50%甲醇洗脱液(TLC检测) 补骨脂甲素（回收）
80%甲醇洗脱（TLC检测） 补骨脂乙素（回收）
新购聚酰胺
钠汞齐反应
黄酮、二氢黄酮
红
异黄酮、二氢异黄酮 红
黄酮醇类
黄~淡红色
二氢黄酮醇类
棕黄色
2.与金属盐类试剂的络合反应：
三氯化铝反应：4′或7，4′-OH黄酮显 天蓝色荧光。
补骨脂-化学成份
补骨脂是一些高等生物中发现的杂多环式化合物，补骨 脂主要含黄酮类、香豆素类、单萜酚类等成分。
1.黄酮类 包括补骨脂二氢黄酮(补骨脂甲素、补骨脂 乙素)、补骨脂双氢黄酮甲醚、异补骨脂双氢黄酮、补 骨脂查耳酮、异补骨脂查耳酮、新补骨脂查耳酮、补骨 脂异黄酮、新补骨脂异黄酮、补骨脂异黄酮醛等。
OH
OH
O
查尔酮
OH
OH
OH
HO
OH
HO
O
O
双键断裂与-OH形成环合
O
二氢黄酮
提取分离流程图
药渣
补骨脂粗粉（30g） CH2Cl2回流提取（100ml）聚 酰胺(8g)前处理，湿法装柱
CH2Cl2液 等体积5%Na2CO3萃取3次,不振摇
CH2Cl2层 （回收）
碱水层
HCl调酸pH4-5, CH2Cl2萃取2次，剧烈振摇，每次50ml
***上述规律也适用于黄酮类化合物在聚酰胺薄层上的行为。
聚酰胺层析系统原理
其酰胺基可与酚羟基、羧基、 羰基、硝基等形成氢键吸附。
聚酰胺是分离黄酮类化合物的比较理想 的吸附剂，其吸附强度主要取决于黄酮 类化合物分子中酚羟基的数目、位置以 及溶剂与黄酮类化合物或与聚酰胺之间 形成氢键缔合能力的大小。黄酮类化合 物从聚酰胺色谱柱上洗脱大致遵循下列 规律：
聚酰胺：由酰胺键聚合形成的高分子化合物。当 所分离化合物的结构与聚酰胺形成氢键的能力越 强，其吸附越强，越难洗脱。其用途比较广，基 本上各种类型化合物都能使用。
聚酰胺具有“双重色谱”性能之故，即其分 子中既有非极性的脂肪链，又有极性的酰胺 基团，当用极性移动相（如含水溶剂系统） 洗脱时，聚酰胺作为非极性固定相，其色谱 行为类似反相分配色谱，因黄酮苷比游离黄 酮极性大，所以苷比游离黄酮容易洗脱。当 用有机溶剂（如氯仿-甲醇）洗脱时，聚酰胺 作为极性固定相，其色谱行为类似正相分配 色谱，因游离黄酮的极性比黄酮苷小，所以 游离黄酮比黄酮苷容易洗脱。
2.香豆素类 包括补骨脂内酯、异补骨脂内酯(异补骨 脂素白芷素)、补骨脂定、异补骨脂定、双羟异补骨脂 定。
3.单萜酚类如补骨脂酚。 4.其他 尚含补骨脂醛、豆甾醇、β-谷甾醇葡萄糖苷、
脂肪油、葡萄糖、挥发油、生物碱等。
补骨脂甲素(coryfolin) ：分子量324.36。 无色针状结晶，mp.191～192℃。
D. 苷元相同，洗脱顺序一般是：叁糖 苷，双糖苷，单糖苷，苷元
黄酮
定义：两个苯环（A与B环）通过三个碳原子相互联结而成的一系列
化合物。（C6-C3-C6）
2'
1Leabharlann Baidu
3'
8
O
2 1'
7
4'
6 5
3
6'
5'
4
O
母核：2—苯基色原酮 分布：多存在于高等植物中，是数量最多的天然酚性化合物。
性质
1．酸性 （1）来源：酚羟基（ 数目、位置） （2）酸性规律 a、7，4‘-OH酸性强于其他位置羟基 的酸性（处于羰基对位，羰基的共轭诱 导）。 b、5-OH酸性最弱（处于羰基邻位， 形成分子内氢键）。 c、酚羟基数目越多，酸性越强。
通常有两种杂质：一种是蜡质（锦纶丝 在制成以后，表面涂有一层蜡）。另一 种是原料单体及其小分子聚合物。