薄层色谱

例如：用硅胶作吸附剂，其主要是根据吸附
力与分配系数的不同，使混合物得以分离。 当溶剂沿着硅胶吸附剂移动时，带着样品中 的各组分一起移动，同时发生连续吸附、解 吸、反复分配作用。由于各组分在溶剂中的 溶解度不同，以及吸附剂对它们的吸附能力 的差异，最终将混合物分离成一系列斑点， 从而达到分离的目的。
分配柱色谱 离子交换色谱 凝胶色谱
薄层色谱
平面色谱法
纸色谱
CE（毛细管电泳色谱法）
薄层色谱
（Thin Layer Chromatography）
薄层色谱又称薄层层析，是以涂布于支
持板上的支持物作为固定相，以合适的 溶剂为流动相，对混合样品进行分离、 鉴定和定量的一种层析分离技术。 常用 TLC表示。 属于固-液色谱的一种
化学显色法：
①喷射显色，采用适宜的显色剂与样品组分发生化学 反应生成有色物质；
②蒸气显色，当薄层板展开后放入氨气、溴蒸 气、碘蒸气中直接显色； ③硫酸显色，用96﹪的硫酸喷射薄板并直接在 火焰上或于100℃加热，有机组分被碳化呈现 黑色斑点。
绝大多数的PTLC吸附剂中含有荧光指示剂，它 可帮助确定被分开的、具有紫外吸收化合物的色带位 置。对于没有紫外吸收的化合物，可采用下列几种方 法定位：
对普通酸性组分：特别是离解度较大的弱酸性
组分应在展开剂中加入一定比例的酸，可防止 拖尾现象； 对于碱性物质：如某些生物碱，多数情况是选 用氧化铝为吸附剂，选用中性溶剂为展开剂。 若采用硅胶为吸附剂，则选用碱性展开剂为宜； 但对某些碱性较弱的生物碱可使用中性展开剂。 理想的展开剂应能使混合物分离后各组分的Rf 值相差尽可能大。 各组分理想的比移值在0.2-0.8之间。
点样直径≤2mm 1cm≤点间距≤1.5cm
反应混 合液样
1-2cm 原料样
点样示意图
点样注意事项
a. 样品的浓度应在 5 ％～ 10 ％左右。点样带应尽可能 狭窄，以获得更好的分离效果。溶解样品的溶剂要 尽量避免用水，因为水溶液斑点容易扩散，且不易 挥发。 b.适当的点样量，可使斑点集中，点样量过大，易拖 尾或扩散；点样量过少，不易检出。点样量多少， 应视薄层的性能及显色剂的灵敏度而定，此外还应 考虑薄层的厚度。一般是几微克到几十微克。 c.尽量用小的点样管，如果有足够的耐性，最好只用1 微升的点样管。这样，点的斑点较小，展开的色谱 图分离度好，颜色分明。
PTLC板可以自己制备，也有预制板出售。自 制 PTLC 板的优点在于吸附剂的厚度及组成可调节 (最厚可达5mm)，也可以在吸附剂中掺入硝酸银及 缓冲物质。
硅 胶
混合 黏和剂
煅石膏或 羧甲基纤维素钠水溶液
平铺 涂铺器
自然干燥一夜
活化
注意事项
调制时慢慢搅拌，勿使产生气泡。 均匀涂布在玻璃板上，摇动摊平，晾干。 使用前放入烘箱内，在 105-115 ℃左右烘干 4050min。冷却后使用。
相关参数
组分 二
比移值（Rf）
组分 一
被分离混 合物
Rf 的范围： 0< Rf<1 Rf=0.2～0.8（常用） Rf=0.3～0.5（最佳）

影响Rf值的因素：
（1）展开温度 ：室温对分离影响不明显。其他条件相同，温 度低比温度高时展开慢，分离好。 （2）薄层厚度：板厚度变化对比移值影响明显；厚度达 0.2mm时，影响较小；在0.25mm时，分离效果最佳。 （3）吸附剂含水量：与吸附剂的种类、使用时的加水量、风 干时间、活化温度、活化时间等因素有关。 （4）层析缸中蒸气：缸中蒸气未达饱和时，比移值不能重现。 为使缸中蒸气饱和，可以在缸内壁附上一层滤纸，让展开剂 全部湿润；把展开剂放入层析缸一段时间后再放薄层板；尽 可能在恒定温度下层析。 （5）其他影响因素：展开剂的pH、展开时间、展开距离、样 品浓度、点样量、薄层板所用吸附剂中的粘合剂的种类和用 量等，都有可能影响样品组分比移值的大小。
加压制备薄层色谱示意图
离心薄层色谱法
离心薄层色谱技术主要是 在经典的 PTLC 基础上运 用离心力以促使流动相加 速流动，是一种强迫流动 相移动的方法。 在使用该仪器时，先将 吸附剂与洗脱剂的混合物 加到两块直径为 30era 的 水平薄板之间，像三明治 一样。离心力使过量的溶 剂排出，然后将样品混合 物加到仍然潮湿的吸附剂 薄层上，采用常规方法进 行色带的洗脱。
展开示意图

边缘的Rf值高于中部的 下沿，但切勿接触到样 Rf值的现象。它主要是 由于色谱槽中的不饱和 点。 状态和展开剂在薄板不 同部位分配不同而引起 薄层板呈倾斜状。 的。 影响展开的因素有: 盖上盖子，容器密闭。 相对湿度; 溶剂蒸汽 （a 展开室的饱和 b预 防止边缘效应。 吸附）; 温度；展距。
化合物的极性、吸附剂的活性及展开剂的
极性配合
a.分离非极性物质时，应选择非极性展开剂和高 活性吸附剂； b.分离强极性物质时，则应选择强极性展开剂和 活性较低的吸附剂； c.分离中等极性物质，则应选择中等极性物质和 中等活性吸附剂。
操作步骤
1.点样
上样是进行 PTLC 分离的一个最关键的步骤。上样 之前薄层板最好先用溶剂展开一次，以减少所需化合 物从吸附剂洗脱下来时可能混入的杂质。 样品溶解：上样前先将样品溶于少量溶剂，难挥发 性溶剂可引起点样带变宽，因此最好选用挥发性溶 剂 (如己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、丙 酮、氯仿等)， 最好用与展开剂极性相似的溶剂，应 尽量使点样后溶剂能迅速挥发，以减少色斑的扩散。 水溶性样品，可先用少量水使其溶解，再用甲醇或 乙醇稀释定容。
注意
a.无论采用何种回收方法，都应以极性尽可能小 的溶剂将化合物从吸附剂中提取出来(1g吸附剂 约使用5ml溶剂)。 b.化合物与吸附剂接触的时间越长，被破坏的可 能性越大。可先用4型玻璃砂芯漏斗过滤洗脱液， 然后再用孔径为0.2～0.45μm的滤膜过滤。 c.甲醇可溶解硅胶及其中含有的一些杂质，因此， 并不适用于从吸附剂上洗脱被分离的化合物， 较合适的溶剂是丙酮、乙醇或氯仿。
加压制备薄层色谱
在加压薄层色谱装置中，有一弹性的气垫覆盖
在水平的薄层色谱板上。外压使得薄层色谱在 分离过程中没有气相存在。展开剂被强制流动， 使得样品展开速度加快。与靠毛细作用的色谱 方法相比， OPLC 由于采用更细颗粒的吸附剂 及更长的色谱板，因而分离效果更好。 优点： 分离所需时间短，扩散效应相应减小； 加压使得某些润湿能力较差的流动相也可应用。
向板上喷洒水(如用于皂苷类化合物)；
在板上覆盖一块玻璃板，并在板的边缘喷洒显
色剂； 加入一种参照物。
4.样品的收集
在确定色带位置后，可用刮刀或一与真空 收集器相连的管形刮离器将该色带吸附剂从板 上刮下。后一种方法并不适用于敏感的物质， 因吸附剂持续与气流接触，所含的纯化合物有 被氧化的危险。
2.展开
将点好样的薄板与流动相接触，使两相相对运动 并带动样品组分迁移的过程称为展开。
一般硬板常用上行法展开。 将点样后的薄板直立于已盛有展 开剂的直立形层析槽的凸出处， 不接触底部的展开剂，加盖饱和， 再迅速将薄板置于槽底使之浸入 展开剂中展开，直至展开剂上升 一段距离（一般约 15cm ），取 出薄板，用铅笔画出溶剂前沿位 置，以便测量Rf值。
展开剂要接触到吸附剂 边缘效应：展开时薄板
3.显色与定位

常见的显色方法：
物理显色法： ①荧光样品，不少有机物在紫外灯照射下会出现不 同的荧光，许多金属离子与8-羟基喹啉的化合物在 紫外线下也会呈现不同色调的荧光； ②荧光背景，含荧光剂的薄层板在紫外线照射激发 下背景显荧光，无荧光性样品斑点呈暗色。 生化显色法： 一些生化物质对某些微生物的生长具有显著的促进 或抑制作用。
薄层色谱视频
基本原理 相关参数
分类及操作步骤
特
应
点
用
基本原理
薄层色谱法是利 用各成分对同一吸附剂 吸附能力不同，使其在 流动相（溶剂）流过固 定相（吸附剂）的过程 中，连续的产生吸附、 解吸附、再吸附、再解 吸附，从而达到各成分 的互相分离的目的。
固 定 相：吸附剂 流 动 相：展开剂分离原理： 吸附、 解吸附
薄层色谱分类
常规制备薄层色谱（PTLC）
加压制备薄层色谱（OPLC） 离心薄层色谱(CTLC)
常规制备薄层色谱
1.固定相（吸附剂）的选择
在吸附薄层色谱中，固定相的选择十分重 要。其选择应从两个方面考虑： a. 被分离物质的性质（如极性、酸碱性、溶解 度等） b.吸附剂吸附能力的强弱。 若被分离物质极性强，应选择吸附能力弱的吸 附剂； 若被分离物质极性弱，应选择吸附能力强的吸 附剂。
C.环境有害物质的分析
对农药及农药残留分析、有毒金属测定和多环芳烃测定等。
D.食品分析
分离测定食品中所含有的碳水化合物、维生素、有机酸、氨基 酸等天然营养成分，也用于食品添加剂如色素、防腐剂等。
E.其他领域的分析
无机及金属有机化合物分析、染料及化妆品分析、石油和煤分 析、手性化合物分离和化工及高分子材料分析。

特 点
优点
方法简便易行； 分析速度快； 分离能力强； 检出灵敏度高； 应用面广；
缺点
对生物高分子的分离效果不很理想。
应
用
薄层色谱法具有操作简单、快速，设备投资小、检测 运行成本低等特点，在医药、生物、环境、食品等各 领域得到了广泛的应用。
A.医药方面
由于薄层色谱的快速、简便与实效性，广泛应用于中草药
薄层色谱
冯红艳
S1211W202
概
述
色谱法是利用不同物质在不同相
态的选择性分配，以流动相对固 定相中的混合物进行洗脱，混合 物中不同的物质会以不同的速度 沿固定相移动，最终达到分离的 效果 。
填充柱色谱法
GC
毛细管柱色谱法 高效液相 (HPLC) 柱色谱 色谱法 吸附柱色谱
色谱法
LC
经典液相 色谱法
品种鉴别和成分分析、中成药鉴别和质量标准研究、合成药 物的定性鉴别、纯度检查、稳定性考察和药物代谢以及合成 工艺监控分析、生化和抗生素研究等方面。 应用薄层扫描即薄层色谱与紫外分光光度或荧光光度分析 联用，可进行各种药物的定量分析。
B.生物样品与毒物分析
薄层色谱法分析的生物样品多为血清、血浆或尿液等,用来进 行药物生物利用度的分析,检测临床用药的血药浓度,以利于诊 断临床疾病等。毒物分析如植物毒素、真菌毒素、兴奋剂、药 物中毒、走私毒品、农药以及尸检、刑侦破案等方面的样品分 析。
2.流动相（ 展开剂）的选择
展开剂选择是否适当是薄层分离的重要条件之一。 在吸附薄层色谱中，选择展开剂主要是由被分离物质 的极性、吸附剂的活性以及展开剂本身的极性来决定. 在薄层色谱中，一般先选择单一溶剂作展开剂， 但对难分离组分，则需要使用二元、三元甚至多元的 溶剂。先用一种极性较小的溶剂为基础溶剂展开混合 物，若展开不好，用极性较大的溶剂与前一溶剂混合， 调整极性，再次试验，直到选出合适的展开剂组合为 止。
吸附剂就其性质而言，可分为有机吸附剂
（如聚酰胺、纤维素和葡聚糖等）和无机吸 附剂（如氧化铝、硅胶、硅藻土、磷酸钙、 磷酸镁和硅酸钙镁等）。最常用的是氧化铝 和硅胶，它们的吸附性能好，适用于多种化 合物的分离。 常用的吸附剂厚度为0.5～2.5mm，色谱板的 尺寸一般为20cm×20cm或20cm×40cm。 薄层厚度与薄层板的尺寸限制了PTLC可以分 离的样品量。 1.0mm厚的硅胶板最多可上样5mg／cm2。 硅胶是最常用的吸附剂，可用它来分离亲脂 或亲水性物质。