核黄素荧光清洗测试方案
核黄素测定实验报告
核黄素测定实验报告篇一：实验八荧光光光度法测定核黄素的含量实验八荧光光度法测定核黄素的含量（见教材p118）一. 实验目的1. 了解荧光法测定核黄素的原理和方法；2. 学习荧光光度计的操作和使用。
二. 实验原理某些具有π-π电子共轭体系的分子易吸收某一波段的紫外光而被激发，如该物质具有较高的荧光效率，则会以荧光的形式释放出吸收的一部分能量而回到基态。
建立在发生荧光现象基础上的分析方法，称为分子荧光分析法，而常把被测物称为荧光物质。
在稀溶液中，荧光强度IF与入射光的强度I0、荧光量子效率?F以及荧光物质的浓度c等有关，可表示为IF=K?FI0εbc。
式中为比例常数，与仪器的参数固定后，以最大激发波长的光为入射光，测定最大发射波长光的强度时，荧光强度IF与荧光物质的浓度c成正比。
核黄素（维生素B2）是一种异咯嗪衍生物，它在中性或弱酸性的水溶液中为黄色并且有很强的荧光。
这种荧光在强酸和强碱中易被破坏。
核黄素可被亚硫酸盐还原成无色的二氢化物，同时失去荧光，因而样品的荧光背景可以被测定。
OHHOOHH3CHNOOHOHHOOHH3CH3C－2HH3CH二氢化物在空气中易重新氧化，恢复其荧光，其反应如下：核黄素的激发光波长范围约为440—500nm（一般为440nm），发射光波长范围约为510—550nm（一般为520nm）。
利用核黄素在稀溶液中荧光的强度与核黄素的浓度成正比，由还原前后的荧光差数可进行定量测定。
根据核黄素的荧光特性亦可进行定性鉴别。
注意：在所有的操作过程中，要避免核黄素受阳光直接照射。
三. 仪器与试剂1. 实验试剂：核黄素标准品；冰醋酸；核黄素药片；连二亚硫酸钠（保险粉）或亚硫酸钠2. 实验仪器：荧光光度计（F-2500型）天平（感量0.0001g）3. 实验器材普通试管：容量瓶：移液管：烧杯：滤纸： 25mL×9 100mL×1 10mL×1 5mL×1 1mL×1 50mL×1 9cm研钵、漏斗、洗瓶、洗耳球、试管架、移液管架、玻棒：各1四. 实验内容1. 核黄素标准液（4×10-6g·mL-1）准确称取核黄素4mg，加5mL冰醋酸和适量蒸馏水，置水浴中避光加热直至溶解。
核黄素测试方法
CIP/COP Validation Test Procedure在线清洁/离线清洁验证测试程序by Jon R. VossSeptember 1999In the hopes that sharing a test procedure from our library of ValPro™ procedures will get others to do the same, I submit the following procedure for your use. Let us know what you think!分享我们实验室的ValProTM测试程序，可以帮助更多的人采用相同的方法做同一件事情，正因如此，我提交如下的程序供大家使用，让我们看看你们是如何思考的。
Coverage Test-CIP/COP覆盖率测试-在线清洁/离线清洁Objective:The objective of this test is to verify that the sprayballs/wands/bars associated with the system are capable of delivering cleaning solutions to all exposed product contact surface areas. Often spray ball coverage testing is performed as part of the final vessel factory acceptance test. Coverage testing may be performed on-site using the actual equipment that will be used to clean the vessel.目的该测试的目的是为了确认连接在系统上的喷淋球/喷淋管/喷淋隔栅是否有能力将清洁溶液喷淋到所有与产品直接接触的暴露表面去。
实验三荧光光谱法测定核黄素的含量（卫化预医）
实验三 荧光光谱法测定核黄素的含量一、实验目的1．熟悉 F950型荧光光度计的使用。
2．掌握荧光光谱法测定核黄素含量的基本原理。
二、实验原理核黄素结构式：NCH 3CH 3N NO NHO CH 2CH OH CH CH CH 2OH OH OH分子式C 17H 20O 6N 4，分子量376.37。
在水溶解度小，遇光分解，须避光。
含有核黄素的溶液吸收光能后，能发射出荧光，在一定条件（溶液abc ≤0.05）下， 荧光的强度与核黄素浓度成正比（I F = Kc )，能作为核黄素含量的测定方法。
三、仪器和试剂1．0.05 mol/L H 2SO 4溶液2．核黄素贮备液（25.00 μg/ml ） 称取2.500 mg （在20万分之一天平）核黄素，移入100 ml 烧杯中，以0.05 mol/L H 2SO 4溶解，移入1000 ml 容量瓶，以0.05 mol/L H 2SO 4稀释至刻度，移至棕色瓶内，冷藏，备用。
3．核黄素标准液（10.00 μg/m1） 吸取25.00 μg/ml 核黄素贮备液40.00 ml ，移入100 ml 容量瓶中，以0.05 mol/L 。
H 2SO 4稀释至刻度（临用时配制）。
4．仪器 F950型荧光计、滤光片、石英比色皿四、F950型荧光计的使用（一）仪器基本结构仪器由光源灯、聚光透镜、滤色系统、比色皿座架、光电检测器、电子系统微安表及稳压电源等部件组成。
仪器的外表和旋钮如图2所示：图2 F950型荧光光度计主机各部分示意图1．样品室2．主机电源开关3．灯电源开关4．主机电源保险丝5．灯电源保险丝样品室：样品室内部如图3所示，样品室盖是掀开式的；主机电源开关：开关处于ON，电源接通；灯电源开关：开关处于ON时，灯电源接通；高压开关：此开关的作用是当样品室门合上时，负高压源输出负高压，光电倍增管处于工作状态。
图3 样品室1．石英比色皿2．滤光片3．比色皿池4．负高压源开关（二）开机、关机操作程序1．开机程序开灯电源开关→开主机电源开关开启灯电源开关后，可听到“嚓”的声音，属正常现象。
医学营养专业《实训七、维生素B2的测定8》
维生素B2的测定1 原理：核黄素在370nm和440nm的光照下产生荧光,发射波长是560nm在稀溶液中荧光强度与核黄素浓度成正比用连二亚硫酸钠将核黄素复原,根据复原前后的荧光差数,计算核黄素的含量色素的干扰可用高锰酸钾氧化法除去2 仪器：荧光分光光度计3 试剂：〔1〕1NNaoH溶液:取40gNaoH溶于1000ml水中。
〔2〕1NHCl溶液：取50ml分析纯HCl以水稀释至600ml。
〔3〕3%高锰酸钾溶液：溶解3g高锰酸钾于水中，再稀释至100ml，每周配一次。
〔4〕1%双氧水：取1ml双氧水稀释至100ml。
〔5〕冰醋酸〔6〕连二亚硫酸钠〔又称粉〕〔7〕核黄素标准储藏液：准确称取２５mg核黄素标准品，用水溶解于1000ml容量瓶中，用水稀释至刻度，此液浓度为２５ug／m1。
〔8〕核黄素标准应用液：取储藏液１ml于５０ml，用水稀释至刻度，／ml。
４操作方法：〔1〕提取：称取含核黄素10ug的均匀样品液样可取50~100ml 于250ml带塞三角瓶中，加1N盐酸15ml、盐酸35ml沸水浴加热1小时。
〔2〕沉淀杂质：样品冷却后，滴加1NNaoH溶液，边加边摇防止局部碱性过强，调节l容量瓶，用水稀释至刻度，如果样品体积很大，可以过滤到100ml容量瓶中，用水洗样品屡次，滤液一并倒入容量瓶中，最后加水至刻度。
〔3〕酸化和纯化：将一样品分装入三个试管中，向每管中准确参加10ml滤液，其中第一只管准确参加1ml核黄素标准应用液，另二支管分别参加1ml蒸馏水。
最后，再向三支试管各参加1ml冰醋酸。
向每支试管滴加1%双氧水，用力摇匀，使高锰酸钾颜色褪去，假设不能马上褪色，可以稍等一会儿，切不可把双氧水加多，以免影响荧光读数。
〔4〕测定：根据仪器具体情况，在激发波长440nm，发射波长560nm条件下，调节零点，使记录位于“0〞处，分别测定三只管中的核黄素的荧光强度。
5 计算：A-C 标准液浓度 1维生素B2含量〔ug/g=——×——————×稀释倍数×—— B-A 10ml滤液样重A：滤液加水管读数B：滤液加标准品管读数C：滤液加水、加2021连二亚硫酸钠管读数。
实验三核黄素(VB2)荧光光度定量测定法
基础生物化学实验-实验三核黄素（VB2）荧光光度定量测定法时间：2009-04-06 07:10:16 来源：作者：实验三核黄素（VB2）荧光光度定量测定法目的了解荧光法测定核黄素的原理和方法。
学习荧光光度计的操作和使用。
掌握荧光定量分析工作曲线法。
原理核黄素（维生素B2）是一种异咯嗪衍生物，其水及酒精的中性溶液为黄色，并且有很强的荧光，这种荧光在强酸或强碱中易破坏。
核黄素可被亚硫酸盐还原成无色的二氢化物，同时失去荧光，因而样品的荧光背景可以被测定。
二氢化物在空气中易重新氧化，恢复其荧光，其反应如下：核黄素的激发光波长范围约为440-500nm（一般定为460nm），发射光波长范围约为510-550nm（一般定为520nm）。
利用核黄素在稀溶液中荧光的强度与核黄素的浓度成正比可进行定量分析。
实验材料核黄素片（5mg/片）、蛋黄粉、大豆。
930型荧光光度计。
容量瓶100ml（×2）。
试管1.5cm×15cm（×7）。
吸管10.0 ml（×1），5.0 ml（×1），2.0 ml（×1），0.50 ml（×2）。
量筒1000 ml（×1），100 ml（×1）。
实验试剂核黄素标准溶液：准确称取核黄素10mg，放入预先装有约50ml蒸馏水的1000ml容量瓶中，加入5ml 6mol/L醋酸，再加入大约800ml水，置水浴中避光加热直至溶解，冷却直至室温，用蒸馏水再定溶至1000ml，混匀。
连二亚硫酸钠（保险粉）或亚硫酸钠。
36%醋酸。
操作标准曲线绘制将配好的10μg/ml标准核黄素溶液，按表1所示比例稀释成6个标准溶液。
样品溶液的配制将被测的样品（如核黄素药片，维生素B2针剂等）参照标准溶液的含量范围和溶剂体系配制成测定溶液。
对于食物和生物材料中的核黄素测定，一定需要事先经过抽提，或经过分离，纯化处理。
荧光测定参照荧光光度计的使用说明，选用滤光片，核黄素荧光测定的激发光波长为460nm，发射光波长为520nm。
核黄素测定实验报告doc
核黄素测定实验报告篇一：实验八荧光光光度法测定核黄素的含量实验八荧光光度法测定核黄素的含量（见教材p118）一. 实验目的1. 了解荧光法测定核黄素的原理和方法；2. 学习荧光光度计的操作和使用。
二. 实验原理某些具有π-π电子共轭体系的分子易吸收某一波段的紫外光而被激发，如该物质具有较高的荧光效率，则会以荧光的形式释放出吸收的一部分能量而回到基态。
建立在发生荧光现象基础上的分析方法，称为分子荧光分析法，而常把被测物称为荧光物质。
在稀溶液中，荧光强度IF与入射光的强度I0、荧光量子效率?F以及荧光物质的浓度c等有关，可表示为IF=K?FI0εbc。
式中为比例常数，与仪器的参数固定后，以最大激发波长的光为入射光，测定最大发射波长光的强度时，荧光强度IF与荧光物质的浓度c成正比。
核黄素（维生素B2）是一种异咯嗪衍生物，它在中性或弱酸性的水溶液中为黄色并且有很强的荧光。
这种荧光在强酸和强碱中易被破坏。
核黄素可被亚硫酸盐还原成无色的二氢化物，同时失去荧光，因而样品的荧光背景可以被测定。
OHHOOHH3CHNOOHOHHOOHH3CH3C－2HH3CH二氢化物在空气中易重新氧化，恢复其荧光，其反应如下：核黄素的激发光波长范围约为440—500nm（一般为440nm），发射光波长范围约为510—550nm（一般为520nm）。
利用核黄素在稀溶液中荧光的强度与核黄素的浓度成正比，由还原前后的荧光差数可进行定量测定。
根据核黄素的荧光特性亦可进行定性鉴别。
注意：在所有的操作过程中，要避免核黄素受阳光直接照射。
三. 仪器与试剂1. 实验试剂：核黄素标准品；冰醋酸；核黄素药片；连二亚硫酸钠（保险粉）或亚硫酸钠2. 实验仪器：荧光光度计（F-2500型）天平（感量0.0001g）3. 实验器材普通试管：容量瓶：移液管：烧杯：滤纸： 25mL×9 100mL×1 10mL×1 5mL×1 1mL×1 50mL×1 9cm研钵、漏斗、洗瓶、洗耳球、试管架、移液管架、玻棒：各1四. 实验内容1. 核黄素标准液（4×10-6g·mL-1）准确称取核黄素4mg，加5mL冰醋酸和适量蒸馏水，置水浴中避光加热直至溶解。
生物产品分析实验.
实验一 荧光法测定药物中核黄素含量
一 实验目的
了解荧光法测定药物中VB2的原 理； 学会荧光仪的使用。
二 实验原理
核黄素（Vit B2）在pH4~9的条件下，用 450nm波长的光激发，可发出波长为 520nm的荧光。在核黄素的含量为 0.1~10μg范围内，荧光的强度，与核黄 素浓度成正比，硫代硫酸钠可消除核黄 素的荧光性。
六．结果计算
式中：A280——蛋白质溶液在280nm处的吸光 值： A260——蛋白质溶液在260nm处的吸光值； 1.45和0.74——校正值； n——稀释倍数； W——样品重（mg）。
七.思考题
1.石英比色皿与玻璃比色皿的区别？ 2.使用高速离心机应注意的事项。
实验五 气相色谱法分离分析 酒中杂醇油
二. 实验原理
采用酸碱中和容量分析法。pH9.0为中和 反应时酚酞指示剂发生颜色突变时的pH 值。电位滴定法控制pH终点，消除了目 视比色法对有色试样的感官误差，有操 作简便、结果准确等优点。
三. 实验仪器与试剂
pHS-3型酸度计； 磁力搅拌器； 0.1N标准NaOH溶液； 20、50ml移液管； 100ml烧杯； 除CO2蒸馏水的制备：将蒸馏水煮沸15min 后，冷却至室温。 样品随意在市场采购。
准确称取味精样品10.00g，加20～25ml蒸馏水, 搅拌下加入6N盐酸32ml,使其全部溶解，冷却 至室温，用蒸馏水定容至100ml。 旋光计零点校正：有三种校正法，一种为蒸馏 水调零法，即将蒸馏水装入旋光管于旋光仪中 调零；一种为空白溶液校正法，即取32毫升6N HCl置入100ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度， 于旋光仪中调零；另一种为空气法，即不用溶 液和旋光管，空着仪器调零。
荧光分析法测定VB2
荧光分析法测定VB2（2学时）一、实验目的1．了解荧光分光光度计的基本原理、仪器结构和使用方法。
2．学习和掌握荧光光度分析法测定VB2的基本原理和方法。
二、实验原理当物质的分子接受光子能量被激发后，从激发单重态的最低振动能级返回基态时发射光子的过程，称之为荧光。
荧光分析中包括激发光谱和发射光谱，是荧光物质的两个重要的性能指标。
激发光谱是荧光物质在不同波长的激发光作用下测得的某一波长处的荧光强度的变化情况；荧光光谱则是某一固定波长的激发光作用下荧光强度在不同波长处的分布情况。
利用物质被光照射后产生的荧光辐射对该物质进行定性分析和定量分析的方法，称为荧光分析法。
对很稀的溶液，荧光强度F与该物质的浓度c有以下的关系：F＝K c式中K为常数。
因此，在低浓度的情况下，荧光物质的荧光强度与浓度呈线性关系。
VB2(即核黄素)在430～450 nm光的照射下发出荧光，其峰值波长为530 nm 左右。
VB2的荧光在pH = 6～7时最强，而且其荧光强度与其溶液浓度呈线性关系，因此可以用荧光光谱法测VB2的含量。
三、仪器和试剂1．仪器：荧光光度计，荧光比色皿、棕色容量瓶、移液管试剂：核黄素VB2药片2．10.0 mg/LVB2标准溶液：准确称取10.0 mgVB2，将其溶解于少量的1% HAc 中，转移至1 L容量瓶中，用1%HAc稀释至刻度，摇匀。
该溶液应装于棕色试剂瓶中，置阴凉处保存。
3．待测液：取市售VB2一片，用1% HAc溶液溶解，定容成1000 ml，贮于棕色试剂瓶中，置阴凉处保存。
四、实验步骤1. 打开电脑，打开荧光分光光度计电源，打开仪器光谱扫描软件。
2. 点击“Setup”图标，选择模式，设置仪器参数，扫描VB2的激发光谱和发射光谱，确定最佳激发波长和发射波长。
3. 标准溶液的测定：开启标准曲线模式，设置适当的仪器参数，从稀到浓测量系列标准溶液的荧光强度，得到VB2的浓度与荧光强度的线性回归方程。
维生素B2的分子荧光测定(精)
１、了解分子荧光分析法的原理。 ２、掌握用荧光法测定维生素的分析方法。 ３、掌握荧光光度计的基本操作方法。
二、方法原理
维生素B2又称核黄素,溶于水,在W为0.05的乙酸溶 液中是一个强荧光物质，在中性和酸性溶液中，对热稳 定，在碱性溶液中较易被破坏。通过实验确定它的最佳 激发波长（370nm和440nm）和发射波长（560nm）， 在所确定的波长条件下，测定维生素B2标准系列溶液 的荧光强度和浓度的工作曲线。用标准曲线法测定生物 样品（蔬菜）中的维生素B2含量。
3.工作曲线绘制 取标准系列溶液之一，试验实验条件，找 出最佳荧光发射波长。在所确定的波长条件 下测定标准系列溶液的荧光强度，绘制荧光 强度与浓度的工作曲线。 4.测定 分别吸取10.00mL样品溶液三份，依次置 于三只25.00mL容量瓶中，加入1.25mL冰醋 酸，再加入KMnO4溶液(3%)0.5mL，放置 2min，边摇边滴H2O2(30%)，使KMnO4刚 好褪色，用纯水稀释至刻度，在荧光光度计 上分别测定其荧光强
四、结果处理
1.在坐标纸上绘制If~C的工作曲线
2.根据测定的If.x，从工作曲线上查出溶液中维 生素VB2的Cx（mg/L） 3.由下式计算出样品（新鲜蔬菜）中的维生素 VB2的含量（mg/100g） VB2 （mg/100g）= Cx ×25.00×10-3
× （100/10）×（1/WS）×100
Байду номын сангаас
2.样品溶液制备
称取50g新鲜蔬菜，加40mL水压汁，将菜 汁加入20mL1mol.L-1HCl和10mL水煮沸1h， 冷却，不断搅拌滴加2mol.L-1NaOH，调节 pH为6，再用稀HCl调节pH至4.5，过滤，用 水洗涤样品，洗涤液和过滤液合并定量转移 至100mL容量瓶中，加水稀释至刻度。
核黄素的测定
标准曲线的测量
1）按标准键
放入空白 0 输入 读取荧光光度值 放入第一管 0 2 → 输入 显示0.2 读取荧光光度值 放入第二管 0 5 → 输入 显示0.5 读取荧光光度值 放入第三管 1 0 → 输入 显示1.0 读取荧光光度值 放入第四管 1 5 → 输入 显示1.5 读取荧光光度值 放入第五管 2 0 → 输入 显示2.0 读取荧光光度值 2）输入结束，再按标准键： 打出拟合一次曲线
[O]
NH H3C N O
C H3C
核黄素
光黄素
33
实验四
核黄素（VB2）荧光光度定量测定法
1
一、实验目的
了解荧光法测定核黄素的原理和方法
学习荧光光度计的操作和使用 掌握荧光定量分析工作曲线法
2
二、实验原理
核黄素在pH4~9的条件下，用440～500nm波长的光 激发，核黄素可发出波长为525nm的荧光
在稀溶液中，荧光强度与核黄素浓度成正比 测定B2标准系列溶液的荧光强度和浓度,做标准曲线 测定样品中B2的荧光强度，查标准曲线得出含量
1 0.0
10.0
管号 项目
2 0.2
9.8
3 0.5
9.5
4 1.0
9.0
5 1.5
8.5
6 2.0
8.0
标准
水
F
5
四、操作步骤
2、样品溶液的配置
准确称取核黄素药片4片，溶于2000ml蒸馏水中
按下表所示加入试剂
项目 管号
单位：ml
1 2.0 8.0
2 2.0 8.0
样品 水
F
6
四、操作步骤
对热稳定 耐氧
核黄素实验报告
一、实验目的1. 了解核黄素（维生素B2）的物理化学性质。
2. 掌握荧光分光光度法测定核黄素含量的原理和方法。
3. 学会使用荧光分光光度计进行样品测定。
二、实验原理核黄素（维生素B2）是一种橘黄色无臭的针状结晶，易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂。
在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，对热稳定。
核黄素溶液在430～440 nm蓝光的照射下，发出绿色荧光，荧光峰在525 nm。
本实验利用荧光分光光度法测定多维葡萄糖粉中核黄素的含量。
三、实验仪器与试剂1. 仪器：970CRT荧光光度计、5 mL吸量管、2 mL吸量管、50 mL容量瓶、10.0g·mL-1 VB2标准溶液（置阴暗处保存）、冰乙酸（AR）、多维葡萄糖粉试样。
2. 试剂：冰乙酸、核黄素标准溶液、蒸馏水。
四、实验步骤1. 标准曲线绘制（1）取10.0g·mL-1 VB2标准溶液，分别用蒸馏水稀释至0.01g·mL-1、0.02g·mL-1、0.04g·mL-1、0.08g·mL-1、0.16g·mL-1、0.32g·mL-1。
（2）分别取上述溶液各5 mL，加入冰乙酸5 mL，混匀。
（3）以蒸馏水为参比，在430～440 nm范围内测定各溶液的荧光强度。
（4）以核黄素浓度C为横坐标，荧光强度I为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 样品测定（1）称取多维葡萄糖粉试样0.1 g，置于50 mL容量瓶中。
（2）加入冰乙酸5 mL，混匀。
（3）用蒸馏水定容至刻度线。
（4）以蒸馏水为参比，在430～440 nm范围内测定样品溶液的荧光强度。
（5）根据标准曲线，计算样品中核黄素的含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制以核黄素浓度C为横坐标，荧光强度I为纵坐标，绘制标准曲线。
结果显示，核黄素浓度与荧光强度呈线性关系，相关系数R²=0.998。
2. 样品测定根据标准曲线，计算样品中核黄素的含量为0.015 mg/g。
维生素B2片剂中核黄素含量的荧光光谱检测
摘要核黄素，常称为维生素B2微溶于水，具有较强的生物活性，与人体的代谢活动密切相关。
当其缺乏时，人体器官会发生一系列的病变导致疾病，如口角炎、唇炎、舌炎、眼结膜炎和阴囊炎等。
现在对药品含量的检测方法有很多，荧光分析法一直广泛应用于药品分析，具有快速、准确、直观等优点，并且可以同时检测多种药物含量。
本文通过荧光发射光谱法检测维生素B2类药品中核黄素的含量。
在做好实验的前期工作后，配制核黄素标准液和维生素B2药品样液并检测其荧光强度。
研究核黄素的激发谱和发射谱，确定最佳激励波长468nm和最佳荧光波长523nm。
由得到的数据绘制核黄素标准液浓度与荧光强度关系的标准曲线，根据检测的维生素B2药品样液的荧光强度值，代入核黄素标准液曲线表达式得到样液核黄素浓度，进而计算出药品中核黄素的含量。
实验结果令人满意，药品核黄素实际含量为5.3753mg/片，稍高于标示值。
该方法具有成本低，检测简单快速、灵敏度高等特点。
关键词：药物检测；核黄素；荧光分析；激发波长；发射波长；标准曲线ABSTRACTRiboflavin,which is widely known as vitamin B2 ,is slightly soluble in water.It is closely related to the body's metabolic activities and possess strong biological activity. With the lack of it,the human organ will undergo a series of leisions,leading to diseases such as angular stomatitis,cheilitis,glossitis,conjunctivitis and oscheitis.etc. Now there are many methods for the detection of dugs,Fluorescence analysis has been widely used in drug analysis, with fast, accuracy, visualization and other advantages, and it can simultaneously detect a variety of pharmaceutical components. In this paper the jod was done through the fliorescence spectrometric analysis of vitamin B2 drugs in the detection of riboflavin content.After preparing the preliminary work,the next step is preparation of Riboflavin standard solution and sample solution,and finish the fluorescence intensity detection of them. Through the experimental detection of fluorescence spectra,the results show the optimal emission wavelength of 523nm and the best excitation wavelength of 468nm.Then using test data to draw a curve about fluorescence intensity to Riboflavin solution concenteation. According to the data of sample, Riboflavin solution conenteation of sample can be determined through substituting the data into the curvilinear expression.,and Riboflavin content in tablets is obtained .The results were satisfactory, the actual content of drug riboflavin is 5.3753mg / piece.,,which is slightly higher than indicated value of 5.0mg / piece.The method has the characteristics of low cost,simple and rapid detection and high sensitivity.etc.Key words: drug detection; riboflavin; fluorescence analysis; excitation wavelength; emission wavelength; standard curve目录1.1 课题研究背景 (1)1.2 维生素 (1)1.2.1 维生素介绍 (1)1.2.2 维生素检测意义和方法 (2)1.3荧光 (3)1.3.1荧光介绍 (3)1.3.2荧光机理 (4)1.3.3荧光光谱 (5)1.3.4荧光衰减 (5)1.3.5荧光量子产率 (6)1.3.6 荧光与分子结构 (6)1.3.7影响荧光因素 (7)1.3.8 荧光分析法及其现状 (9)1.4章节安排 (11)2 实验内容 (11)2.1实验依据 (11)2.1.1核黄素结构及性质 (11)2.1.2定量依据—荧光强度与溶液浓度关系 (12)2.1.3定量方法—标准曲线法 (13)2.1.4总体方案 (13)2.1.5荧光光谱仪及工作原理 (14)2.2实验试剂及仪器 (15)2.3实验装置 (15)2.4实验设计及操作 (16)2.4.1配制试剂 (16)2.4.2光谱测定 (17)2.4.3实验重复性验证 (18)3 实验数据处理 (18)3.1实验数据 (18)3.2数据处理方法—最小二乘法求回归方程 (22)3.3标准曲线绘制 (23)3.4曲线表达式及药品含量计算 (23)4总结 (24)4.1实验数据对比 (24)4.2误差分析 (24)4.3结论 (25)参考文献 (26)致谢 (28)1 绪论1.1 课题研究背景药品是指用于预防、治疗、诊断人的疾病，有目的地调节人的生理机能并规定有适应症或者功能主治、用法和用量的物质，包括中药材、中药饮片、中成药、化学原料药及其制剂、抗生素、生化药品、放射性药品、血清、疫苗、血液制品和诊断药品等。
实验二 荧光法测定医用维生素B2片剂中维生素B2的含量
Cx ( ug/ml) 25 ( ml ) 500( ml ) V ( ml )
六、注意事项
操作应该在避光的条件下进行。
样品池轻拿轻放，垂直放入，小心使用。
不要关闭电脑上的荧光仪联机软件。
七、结果记录
根据测定的样品相对荧光强度ΔF＝F－F0，从标准曲线上 查出样品溶液对应的维生素B2的浓度Cx，并计算维生素B2 片中B2的含量，计算公式如下：
维生素 B 2的 含 量 ( ug )
注：F0为空白溶液的荧光强度。
三、仪器及试剂
棱光F96荧光分光光度计，石英样品池（四面透 光），25 ml比色管，一次性吸管，500 ml容量瓶， 漏斗，滤纸等。
维生素B2标准溶液：10 ug/ml，贮存于棕色试剂 瓶中；1% 醋酸溶液；样品维生素B2片。
四、实验条件
固定激发= KC
采用标准曲线法进行定量：
配制一系列浓度不同的标准溶液，分别测出它们 的荧光强度，以横坐标表示浓度C，纵坐标为相 对荧光强度ΔF（ΔF=F-F0），绘制出标准曲线。 若要测定未知溶液的浓度，则在相同条件下测出 未知溶液的相对荧光强度ΔF，在标准曲线上就可 以直接查出对应的未知液浓度Cx。
实验二 荧光法测定医用维生素B2 片剂中维生素B2的含量
中山大学公共卫生学院 肖琴
一、实验目的
了解荧光分析法的基本原理； 了解荧光分光光度计的使用。
二、实验原理
维生素B2又称核黄素。
在紫外光照射下，维生素B2就会发出绿色的荧光。 当荧光物质溶液的浓度较低时( abc≤0.05 )，若入 射光的强度不变，则物质发出的荧光强度F与其 浓度C成正比：
荧光光度法测定核黄素的含量
五、操作步骤
1.样品液的制备
① 取样：取核黄素药片一粒，放入研钵中磨成粉； ② 定容：用蒸馏水洗入容量瓶，定容至100 mL， 摇匀，浸提10 min； ③ 过滤：收集部分滤液于试管中；
④ 稀释：取滤液2 mL于棕色容量瓶中，加5 mL
1.74 mol/L HAc，用蒸馏水定容100 mL，待测。
六、结果处理
• 由1-6号管的数据，以核黄素含量（g）为 横坐标，F值为纵坐标绘制标准曲线； • 求样品管F的平均值F-； • 由F-从标准曲线中求得样品管的含量 （ μg ）； • 计算你所称取药片所含核黄素的含量（mg/ 片）。
七、思考题
1. 为什么在整个测定过程中需要避光？
五、操作步骤
• 2.标准曲线的制作
取10只试管，按下表顺序操作：
五、操作步骤
注意： • 在测定中，如果待测样品溶液的荧光强度 超出100%，则需要再行稀释，并记录稀释 倍数；或者通过调节里灵敏度，最后乘以 倍率 • 亚硫酸钠不能过多，以免影响荧光强度； 加入后立即读数，否则核黄素又被氧化成 荧光型
• 样品中加入亚硫酸盐，将荧光素还原成无荧光物 质，然后测定样品中残余荧光强度，两者之差即 为核黄素所产生的荧光
三、试剂和器材
• 1.材料
核黄素药片三、试剂和器材•Fra bibliotek2.仪器和器材
荧光分光光度计、天平 试管、容量瓶、烧杯、研钵、滤纸、漏斗
四、试剂的配制
核黄素标准液（5 μg /mL）
准确称取核黄素10 mg，加100 mL浓度为 1.71 mol/L的醋酸和适量蒸馏水，置于水浴中 直至完全溶解。 冷却至室温，用蒸馏水定容至2000 mL， 转入棕色瓶中。
荧光光度法测定核黄素的含量
荧光法测定维生素b2片剂中核黄素含量实验报告结果分析（共7篇）
荧光法测定维生素b2片剂中核黄素含量实验报告结果分析(共7篇)实验报告2荧光分光光度法测定维生素B2的含量实验项目：荧光分光光度法测定维生素B2的含量【实验题目】荧光分光光度法测定维生素B2的含量【实验目的】1、掌握标准曲线法定量分析维生素B2的基本原理。
2、了解荧光分光光度计的基本原理、结构及性能，掌握其基本操作。
【实验原理】维生素B2(又叫核黄素，VB2)是橘黄色无臭的针状结晶。
其结构式为：由于分子中有三个芳香环，具有平面刚性结构，因此它能够发射荧光。
维生素B2易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，对热稳定。
维生素B2溶液在430~440nm蓝光的照射下，发出绿色荧光，荧光峰在535nm附近。
维生素B2在pH＝6~7的溶液中荧光强度最大，而且其荧光强度与维生素B2溶液浓度呈线性关系，因此可以用荧光光谱法测维生素B2的含量。
维生素B2在碱性溶液中经光线照射会发生分解而转化为另一物质——光黄素，光黄素也是一个能发荧光的物质，其荧光比维生素B2的荧光强得多，故测维生素B2的荧光时溶液要控制在酸性范围内，且在避光条件下进行。
在稀溶液中，荧光强度F与物质的浓度c有以下关系：F＝2.303ФI0εbc当实验条件一定时，荧光强度与荧光物质的浓度呈线性关系：F=Kc这是荧光光语法定量分析的依据。
【主要仪器与试剂】主要仪器：F-2500 HiTachi荧光分光光度计；1cm石英皿；50mL 容量瓶；5mL移液管；烧杯；胶头滴管试剂：维生素B2标准溶液：未知液4【实验内容及步骤】1、系列标准溶液的制备取维生素B2标准溶液(10.0μg/mL)1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL分别置于50mL的容量瓶中，各加入去离子水稀释至刻度，摇匀。
标记为①②③④⑤的一系列维生素B2标准溶液。
待测。
2、待测液制备取5.00mL未知液4置于50mL容量瓶中，加入去离子水稀释至刻度，摇匀。
核黄素
核黄素(维生素B2)荧光光度定量测定法摘要: 维生素B2又名核黄素(Riboflavin),是核醇与7,8-二甲基异咯嗪的缩合物。
由于在异咯嗪的1位和5位N原子上具有两个活泼的双键，易起氧化反应，故维生素B2有氧化型和还原型两种形式，在生物体内氧化还原过程中起传递氢的作用。
在体内核黄素是以黄素单核苷酸（flavin mononucleotide,FMN)和黄素腺嘌呤二核苷酸（flavin adenine dinucleotide,FAD)形式存在，是生物体内一些还原氧化酶（黄素蛋白）的辅基，与蛋白部分结合很牢。
由于FAD,FAN 广泛参与体内各种氧化还原反应，因此维生素B2能促进糖，脂肪和蛋白质的代谢，对维持皮肤，粘膜和视觉的正常机能均有一定的作用。
本实验采用荧光光度定量测定法测量核黄素的含量.关键词：核黄素荧光光度还原氧化酶黄素蛋白Vitamin B2 and Riboflavin (Riboflavin), is the nuclear alcohol and 7, 8 - dimethyl luo oxazine condensation product. Due to the different luo oxazine 1 and 5 N atom has two lively double bond, easy oxidation reaction, so the vitamin B2 type oxidation and reduced in two forms, REDOX process in biological hydrogen transfer function. Riboflavin in the body is flavin mononucleotide (flavin mononucleotide, FMN) and flavin adenine dinucleotide (flavin adenine dinucleotide, FAD) form, are some reduction in biological oxidase (flavoprotein) prosthetic group, combined with protein part is very fast. Because the FAD, FAN widely participate in various REDOX reaction in the body, so vitamin B2 can promote sugar, fat and protein metabolism, to maintain the skin, mucous membrane and have certain effect to the normal function of vision. This experiment adopts the quantitative determination of fluorescent photometric method of measuring the content of riboflavin.前言1.1 核黄素的概述维生素B2（化学式：C17H20N4O6，式量376.37）又叫核黄素，微溶于水，在中性或酸性溶液中加热是稳定的。
核黄素清洁验证(中文)
Process Plant and Equipment工艺厂房及设备Information sheetRiboflavin test forlow-germ or sterile process technologies Fluorescence test for examination of clean ability For food,aseptic,pharmacy and chemistry信息表核黄素低细菌或无菌工艺技术的试验荧光测试是对食品，无菌，制药和化学清洁能力的检验Edition December2007版2007年12月Contents1.Introduction (3) (3)Scope (3)2.Scope (3)3.Terms,definitionsdefinitions (3)4.Aim of the fluorescence test (4)5.Installation,equipment,specifications and carrying out the test (5)5.1General notes and points to be observed (5)5.2Test build-up (5)5.3Test equipment and specifications (5)5.3.1Test solution (5)5.3.2Water used to prepare the test solution (6)5.3.3Cleaning water (6)5.3.4Darkening (6)5.3.5Inspection lamp(UV lamp) (6)5.3.6Surfaces to be examined (6)5.3.7Pre-cleaning (6)5.3.8Adjustment of components (6)5.3.9Spray balls/nozzles and fittings (6)fittings (6)5.3.10Pressure and flow rate measurement (6)5.3.11Cleaning procedure procedure................................................................................................................................................................................65.4Carrying out the test . (7)6.Evaluation of the fluorescence test (7)7.Documentation of the fluorescence test (8)7.1Documentation of fluorescence test before carrying out the test (8)7.2Documentation of fluorescence test during carrying out the test (8)7.3Documentation of the fluorescence test after carrying out the test (8)8.Annex Annex (9)........................................................................................................................98.1Ingredients and recipes of test solutions. (9)8.2Schematic sketch of an installation for carrying out a fluorescence test ....10内容1。