药典方法验证要求

类别3研究： 准确度
Category I Analytical Performance Characteristics Accuracy Precision Specificity Detection Limit Quantification Limit Linearity Range <1225> Y Y Y N N Y Y <1200> 1 1 2 N N 1 1 Category II (Quantitative) <1225> Y Y Y N Y Y Y <1200> 3 4 2 N 3 3 3 Category II (Semiquantitative) <1225> ? N Y Y N N ? <1200> N 4 2 5 N N N
药典方法验证要求 <1200>
方法验证

分析方法验证中包含的验证项目 (<1225>)
– – – – – – – 准确度 精密度 专属性 检测限 定量限 线性范围 耐用性
药典方法有关的文章

近期出版的文章
– USP “Performance-Based Monographs”: PF 35(3) – USP “Acceptable, Equivalent, or Better: Approaches for Alternatives to Official Compendial Procedures”: PF 35(3) – USP Medicines Compendium “Assessing Validation Parameters for Reference and Acceptable Procedures - Guideline for Donors - Instructions for Staff” <10>: https://mc.usp.org/ – USP “Requirements for Compendial Validation <1200>”: PF 39(6)
验证参数
验证参数（续）

类别1研究: 精密度-准确度和范围
Category I Analytical Performance Characteristics Accuracy Precision Specificity Detection Limit Quantification Limit Linearity Range <1225> Y Y Y N N Y Y <1200> 1 1 2 N N 1 1 Category II (Quantitative) <1225> Y Y Y N Y Y Y <1200> 3 4 2 N 3 3 3 Category II (Semiquantitative) <1225> ? N Y Y N N ? <1200> N 4 2 5 N N N

方法性能验收标准: 在每一个浓度水平上计算得出的概 率都需不小于 0.95

类别2研究: 专属性
Category I Analytical Performance Characteristics Accuracy Precision Specificity Detection Limit Quantification Limit Linearity Range Category II (Quantitative) <1225> Y Y Y N Y Y Y <1200> 3 4 2 N 3 3 3 Category II (Semiquantitative) <1225> ? N Y Y N N ? <1200> N 4 2 5 N N N
*从Horwitz方程估算得出
如果1≤2 否则,
且 3<2, 则差异可被检测出
该方法不能胜任限度检测
小结
USP对现有的验证观念提出质疑 把可测量的参数和明确的标准列入方法验证 专注于精密度和准确度的结果 用专属性来帮助理解准确度 提出可检测性 淘汰检测限、定量限和线性
Prep. 1 2 3 4 5 6
Result = t(qU,df)-t(qL,df)

qU = (Upper-Mean)/(SD√(1 + 1/n)) qL = (Lower-Mean))/(SD√(1 + 1/n)) df = n-1
范围

计算值和已知浓度之间比较
准确度评估 取决于所采用的分析技术 样品: 在范围内每个浓度水平上采用不少于6个标准溶液。 评估的浓度需至少包括一个高于个论规定的上限的浓度和 一个低于个论规定的下限的浓度。以下浓度至少应被包括 在内： 80%, 90%, 100%, 110%, 和 120%.

类别5研究：可检测性
Category I Analytical Performance Characteristics Accuracy Precision Specificity Detection Limit Quantification Limit Linearity Range Category II (Quantitative) <1225> Y Y Y N Y Y Y <1200> 3 4 2 N 3 3 3 Category II (Semiquantitative) <1225> ? N Y Y N N ? <1200> N 4 2 5 N N N
<1225> Y Y Y N N Y Y
<1200> 1 1 2 N N 1 1
可检测性
<1200>中的新术语 取代检测限 3个步骤
LOD
– 1: 配置一个在限度浓度的杂质标准品溶液 – 2: 配置一个添加了在限度浓度的杂质标准品的样品标准品溶液 – 3:配置一个添加了（限度100%-%RSD*浓度）的杂质标准品的样品 标准品溶液
通则<1200>

适用范围
– <1200> 注重于在USP-NF决定是否收载与某项测试 相关的分析方法及其验收标准前，USP期望看到的数 据类型。 – <1200> 提供了一套系统的验证方法和标准用以评估 验证数据。能够提供满足本通则要求的验证数据的分 析方法适用于药典，也可适用于监管的考量。 – <1200> 不是为了满足公司对于应用于生产基地的分 析方法的验证的需求。
<1225> Y Y Y N N Y Y
<1200> 1 1 2 N N 1 1
精密度

样品:
– 6个待测样品，每个定量添加规定限度的指定杂质对照 品.

精密ห้องสมุดไป่ตู้ (重复性):
– RSD% NMT C -0.1505% (Horwitz–Massart equation)

粗放性和中间精密度: – RSD% NMT 2C -0.1505% (Horwitz–Thompson equation)
<1225> Y Y Y N N Y Y
<1200> 1 1 2 N N 1 1
专属性研究

专属性是准确度的特殊情况 考察干扰 色谱方法 – 分离度不小于1.5
专属性研究

非色谱方法比较困难 在样品中添加干扰物质 测量由干扰物质引起的误差 限度与被分析物的验收标准有关: – 使用校准曲线，对含量测试的浓度误差应不大于1% – 当应用于杂质检测，偏差水平应不大于精密度值的 1/3。 (例如, 对于一个限度为0.1%的杂质，偏差应不 大于1%）
准确度研究

准确度
– 对杂质的准确度测量是在可能的分析物的线性范围内采用 加样回收率的研究 – 评估需在一个较大的范围内进行 (如某个特定杂质限度的 50% - 150%) – 分析: 加样浓度和测量浓度之间的差异

–
验收标准:
在每个浓度水平上平行配置的样品的均值： 加样回收率 = 100% ± 2C -0.1505%
精密度和准确度研究

精密度
– 6个独立制备的样品在100%浓度水平进行的含量测量值 之间的% RSD

准确度
– 测量值和标准物质标注量之间的差异（100%浓度水平） – 对准确度的计算需要用到精密度数据 结合验收标准，运用T-分布计算得出概率

限定: 概率不小于 0.95
精密度和准确度研究
精密度和准确度的恰当的结合产生的概率用来评估验证是
可接受的分析方法
哪些参数描述了一个可接受的分析方法?
– <1225> 规定
• 准确度– 一个已知标准物质的回收率或平均值和接受的真实 值之间差异，并给出置信区间 • 精密度 – 对一个均质样品取6-9等份检测的相对标准偏差 %RSD • 专属性 – 检测结果不受辅料或杂质的影响 • 线性 – 浓度和响应值之间的可视评估，伴随线性回归方程 • 范围 –在此操作区间内，证实使用该方法进行检测具有适当 水平的精密度、准确度、和线性。
什么是Horwitz?
RSD=C−0.1505% RSD=2C−0.1505%

类别4研究： 精密度
Category I Analytical Performance Characteristics Accuracy Precision Specificity Detection Limit Quantification Limit Linearity Range Category II (Quantitative) <1225> Y Y Y N Y Y Y <1200> 3 4 2 N 3 3 3 Category II (Semiquantitative) <1225> ? N Y Y N N ? <1200> N 4 2 5 N N N
否通过
精密度和准确度研究
Weight Taken (mg) 99.82 99.66 99.73 99.68 99.81 99.70 Area Response Weight Dilution Average recovered % Assay Factor Injection Injection Area (mg) 1 2 1000 1000 1000 1000 1000 1000 4437885 4439685 4438785 4442037 4443457 4442747 4445579 4447313 4446446 4445592 4443608 4444600 4456644 4454219 4455432 4455009 4455378 4455194 Average Upper 102%, lower: 98% Probability (T-distribution): 1.00 SD % RSD 99.27 99.35 99.44 99.40 99.64 99.63 99.45 0.15 0.15 99.44 99.69 99.71 99.71 99.83 99.93 99.72 0.16 0.16