_1HNMR_PR研究4种基源种川贝母的整体差异性

collecting the information of samples，and the hierarchical cluster analysis（ HCA） and principal component analysis （ PCA） were used for analysis of the data from 1 HNMR． RESULTS The all chemical components were almost the same in four genus． However，there
第6 期
谭小燕，等。1 HNMR － PR 研究 4 种基源种川贝母的整体差异性
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Fritillaria unibratata Hsiao et K． C． Hsia、甘肃贝母 Fritillaria przewalskii Maxim 和 梭 砂 贝 母 Fritillaria delavayi Franch 基源种均经鉴定，所有样品现均保存 于四川大学华西药学院天然药物学系； 甲醇为分析 纯； 数 据 分 析 软 件 为 MestRe － C 4． 7、SIMCA － P 11. 0。 1. 2 方法与结果 1. 2. 1 溶液的制备 称取约 1． 2 g 研碎的川贝母 样品（ 过 80 目筛） ，加入 15 mL 甲醇，称重，于 55 ℃ 水浴中回流 90 min，冷却后称重，并补足重量，过滤； 弃去初滤液，取 10 mL 续滤液，减压浓缩至干，真空 干燥 30 min； 残渣用 0． 5 mL DMSO － d6 溶解，转入 5 mm 核磁管中，即得样品溶液。依法制得 24 份川贝 母的样品溶液。 1. 2. 2 1 HNMR 谱的测定、数据的采集和处理［7］ 将所有待测样品于 296 K 恒温在核磁共振仪中，以 DMSO － d6 为内锁，每个图谱扫描 64 次，采样时间 域为 64 k，谱宽为 12． 34 kHz，采样时间为 2. 66 s，脉 冲间隔 D1 为 3． 00 s，采用标准的预饱和脉冲序列 （ zgpr ） 压 制 水 峰 信 号。 获 得 各 样 品 的 自 由 衰 减 （ FID） 信号。将各样品的 FID 信号导入 Mestre － C 软件进行傅立叶转换，经修整基线、调整象限后，以 DMSO － d6 信号峰的化学位移值 δ2． 50 为标准校正 图谱。每张图谱的 δ10． 00 ～ 0． 00 化学位移区间，按 每 0． 05 化学位移值单位进行分段积分，即得到化学 位移 值 段 与 积 分 值 一 一 对 应 的 数 据 矩 阵 （ 200 × 24） 。该矩阵的行代表不同的化学位移段，列代表 对应于化学位移值段的积分值。将该数据矩阵导入 Excel 软件，进行归一化处理后，获得新数据矩阵。 将新数据矩阵导入 SPSS 或 SIMCA － P 软件，调用聚 类分析或主成分分析程序，进行聚类分析或主成分 分析。 1. 2. 3 1 HNMR 谱的直观比较 4 种川贝母基源种 样本的1 HNMR 图谱见图 1。直观地比较这 4 张图 谱均相似，很难发现彼此存在的明显差异。图谱仅 是每种各 1 个样品的图谱，存在的细微差异可能源 于样品本身或样品处理、测定过程中的差异，因此， 以单张图谱并不能判断 4 种川贝母间存在的明显差 异。为 此，选 用 模 式 识 别 法 中 的 层 次 聚 类 分 析 （ HCA） 、主成分分析（ PCA） 和偏最小二乘法 － 判别 分析（ PLS － DA） 等方法从不同角度进行鉴别分析， 并相互验证分析结果的可靠性。 1. 2. 4 HCA 分析 HCA 分析是一种根据数据间的 相关性对分析对象进行分类分析的方法，属于模式 识别中的非监督法。将 4 个基源种川贝母的 24 个 样 本 的 数 据 导 入 SPSS1 1 ． 5 软 件 ，并 做 HCA 分 析 ，
Abstract： OBJECTIVE To study the differences of all chemical components in the four bulbus fritillariae cirrhosae P． E． （ Fritillaria cirrhosa，Fritillaria unibratata，Fritillaria przewalskii and Fritillaria delavayi） ． METHODS The 1 HNMR technology was used for
（ 1． West China School of Pharmacy，Sichuan University，Chengdu，Sichuan，610041 P． R． China； 2． National Medical College，Chengdu University of Traditional Chinese Medicine，Chengdu，Sichuan，611137 P． R． China）
were some differences in the contents of chemical components between two samples of the same genus，and there were some differences
not only in the contents，but also in the type of the chemical components between two sampleΒιβλιοθήκη Baidu of different genus． CONCLUSION The
Study on the samples of Fritillaria cirrhosa，Fritillaria unibratata，Fritillaria przewalskii and Fritillaria delavayi by 1 HNMR － PR
TAN Xiao － yan1 ，ZHANG Yi2 ，XIAO Yun － chuan1 ，XI Zhen1 ，HUANG Lian1 ，HUANG Jing1*
图 2 4 个基源种川贝母的聚类树状图 Fig 2 The combination of the hierarchical clusters of F． cirrhosa，
F． unibratata，F． przewalskii and F． delavayi
1. 2. 5 PCA 分析 将 4 个基源种川贝母的 24 个样 品数据导入 SIMCA － P 软件，选择 PCA 分析。先从 原始数据矩阵中提取主成分，前 6 个主成分的累计 贡献率已达到 85% 以上，即表示前 6 个主成分能解 释原变量信息的 85% 以上。以前 6 个主成分的得 分值分别为横、纵坐标绘制得分散点图，并对各图中 各样品得分散点的分布情况进行比较分析。结果显 示： 以主成分 2（ PC2） 和主成分 1（ PC1） 的得分值为 横、纵坐标绘制的得分散点图（ 图 3） 对样品的区分 效果相对更明显。表明 4 个基源种川贝的区别主要 集中在 PC1 和 PC2 上。由图 3 的得分散点图可以
华西药学杂志 W C J· P S
2011，26（ 6） ∶516 ～ 519
1HNMR － PR 研究 4 种基源种川贝母的整体差异性
谭小燕1 ，张 艺2 ，肖云川1 ，席 贞1 ，黄 连1 ，黄 静1*
（ 1． 四川大学华西药学院，四川 成都 610041； 2． 成都中医药大学民族医药学院，四川 成都 611137）
results indicate that the 1 HNMR － PCA approach is a feasible and efficient method for differentiating the four genus of Fritillaria
cirrhosa，Fritillaria unibratata，Fritillaria przewalskii and Fritillaria delavayi． Key words： Liliaceae； Fritillaria cirrhosa； Fritillaria unibratata； Fritillaria przewalskii； Fritillaria delavayi； 1 HNMR； PR； PCA
典》收载的 4 基源种 17 个不同产地的川贝母生物碱 的含量，测得 17 个不同产地的川贝母中总生物碱的 含量以卷叶贝母较高、暗紫贝母偏低［6］。但川贝母 的成分并不仅限于生物碱类，单以生物碱类成分判 断其品质的优劣有失偏颇，因此，研究采集了主产区 4 个基源种的川贝母，采用氢核磁共振技术结合模 式识别（ 1 HNMR － PR） 法对样品进行了比较研究， 以此说明 4 种基源种川贝母样品间主要代谢物的差 异，为更合理地使用川贝母提供参考。
图 1 4 种川贝母基源种样品的1 HNMR 图谱 Fig 1 1 HNMR spectra of F． cirrhosa，F． unibratata，F． przewalskii
and F． delavayi
获得树状分类图（ 图 2） 。从图 2 可以看出： 卷叶贝 母 6 个样品（ jy1 － 6） 和甘肃贝母 6 个样品中的 5 个 样品（ gs2 － 6） 相对集中，说明卷叶贝母和甘肃贝母 各有特征； 梭砂贝母 6 个样品中有 4 个样品（ ss2、3、 5、6） 相对集中； 而暗紫贝母 6 个样品中的 3 个样品 （ az1 － 3） 与甘肃贝母相近，另 3 个样品（ az4 － 6） 则 与卷叶贝母相近。说明暗紫贝母在整体成分上介于 卷叶贝母和甘肃贝母之间。
差异。结论 1 HNMR 结合模式识别的全成分分析方法可有效地鉴别不同基源种川贝母样品，其结果可为进一步研究不同基
源种川贝母的生物活性物质基础提供参考。
关键词： 川贝母； 卷叶贝母； 暗紫贝母； 甘肃贝母； 梭砂贝母； 氢核磁共振； 模式识别； 主成分分析
中图分类号： R284
文献标志码： A
文章编号： 1006 － 0103（ 2011） 06 － 0516 － 04
1 实验部分
1. 1 仪器与试药 核磁用 Bruker AVII － 600 MHz 核磁共振仪测
定。卷叶贝 母 Fritillaria cirrhosa D． Don、暗 紫 贝 母
基金项目： 国家十一五科技支撑项目（ 2007BAI40B05） 作者简介： 谭小燕（ 1982—） ，女，正攻读天然药物化学专业的硕士学位。 * 通信作者（ Correspondent author） ，Email： huangj_pharm@ scu． edu． cn
摘要： 目的 比较川贝母 4 种基源种的种内、种间化学成分的整体差异性。方法 采用1 HNMR 采集川贝母样品的信息，采用
模式识别分析法中的聚类分析、主成分分析法分析信息。结果 4 种川贝母基源种间的相似度较高，但种内、种间样品存在细
微差异。同一基源种川贝母样品间的主要差异体现在成分的含量上，而不同基源种样品间则存在成分含量和成分类别上的
CLC number： R284
Document code： A
Article ID： 1006 － 0103（ 2011） 06 － 0516 － 04
川贝母味甘，间有微苦，有清热润肺、化痰止咳 的功效，主 治 肺 热 燥 咳、咯 痰 带 血、痰 多 胸 闷 等 症［1 － 2］。目前发现的贝母属植物有 60 种、45 变种 和 5 变型。2005 年版《中国药典》收载的川贝母的 4 个基源种为百合科植物卷叶贝母 Fritillaria cirrhosa D． Don、暗紫贝母 Fritillaria unibratata Hsiao et K． C． Hsia、甘肃贝母 Fritillaria przewalskii Maxim 和梭 砂贝母 Fritillaria delavayi Franch 的干燥鳞茎［3］。前 三者按性状 不 同 分 别 习 称 为 松 贝、青 贝，后 者 为 炉 贝。松贝的植物种源主要为川贝母，品质最优； 青贝 的主要为暗紫贝母，品质亦优； 炉贝的一般为梭砂贝 母，品质 次 于 松 贝、青 贝［4］。 川 贝 母 中 主 要 有 效 成 分为生物碱，4 个基源种川贝母的共有有效成分为 贝母辛［5］。文 献 采 用 双 相 滴 定 法 测 定 了《中 国 药