高效液相色谱荧光检测法分析氨基酸

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１８．９４
离柱柱效损失为５６～％，分开的连接型式柱效损失
可达１％左右。０
（稿日１８年４２日收期：９７月９）ＡｖＧａＣｌｎＨｈｒｒａｅｕＮｅｕｄｕｆｉＰｆｍｎＬｉｏｌｒｏｍｏｇｅｏｃｉｄｒｑＣｒａｇｐＹＹｎａ，ｉａ，ＬｈａｈｍｔｒｈｕｉＬＹｓｎＷｕｕｏｏａｙｉｎｉａｄＰｅｈｎ，ａｉＩｓｔｔｏＣｅｉｌｎＬｕｉａｇＤｌｎｔｕｃａｎｉｅｈｍｃａＰｙｃｃｅｉＳｎｃａｉＣｒａｏｈｓｓａｍａｉ，Ｄｌｎｈｏｔｉ，Ａｄｉａａｍ－ｇｐｉＲ＆ＤＣｎｅＣｉａｒｈ．．ｅｒｏｈａｃｔｆｎＴｅｅｇａｃｌｎｈｐｅｔｄｈｎｖｕｒｏｍｃｎｔｘｅｏｌｄｕａｅｏｎｌｔｌｅｍｏａＨＬｃｕｎｔｕｓｎｈｉｔｅｎＣｌｍｗｈｔｉｅｉｆＰｆｏｉｏｉ－ｇｆａｔｉｐａｃｕｔＨＬｃｕｎｉｉｎｌｓｌｅｎ．ＰＣｌｍｗｔｃｏｎｔｏｓｏｈｔｇｒｄｕｎｓｉｂｅｔａａｓｏｈｕａｃｍｉｕｔｌｆｈｎｌｉｆｅｏｌｓａｏｅｙｓｒｂｏｅｉｌｐｅｍｄｉｅｙｓｄｈｒｉｃｍｃｓｌ，ｅｉｎ，ｄｅａｏｅｈａａｓｍｃｓｎｔｍｃｍｌｕａｃｍｏｎｓａｒｏｃｌｏｐｕｄ．ｏｅｒ
Ｘｉ痑ｎ ’
参
考文
wk.baidu.com
献
［］ＡＰＷｉｉｎＪＣｒｍｔ．３３１１．．ｌａｓ．ｎａｏ，７，７ｌ，ｏｇｒ５（８．１６９）［］Ｙ．ｓｄｅａ，．ｈｏａｇ．２４１３２ＩｉａｌＪＣｒｍｔｒ０，４ｈｔ．ｏ，
（三）样品处理豆芽组织的处理方法在文
（一）主要仪器日本岛津ＬＣ４－Ａ高效液相色谱仪；ＳＤ－Ａ紫外检测器（本岛津），ＣＰ２Ｓ日－Ｒ２ＸＡ数据处理器（本岛津）；ＷＭＫ－２型培日０养箱（武昌实验仪器厂）：离心机，Ｌ６４型Ｄ－－
（连医疗器械厂）；微型玻璃细胞破碎器（大本
（９１．１８）
［］ＩＲＨｎｅｅａ．ＪＡｒＦｏＣｅ．３．．ｕｄｒｌ．ｇ．ｏｄｍ，ｔ，ｈ
４８４５）ｅ．Ｃ５，８５，７（９６；ｒｆＡ，１３５．［４］ＫｅｃｉＳｇｍｒｅａ．ｈｋｒｏｎｉｈｒｕｉｕａｌｉｏｔ，ＳｏｕｙＫ－ｅｋｕｈＫｅｋｕｋｋ，１，１９１５）ｙｓｏｎｙＨｏｏｕ２０（９７；ｒ．Ａ５，０１．ｅＣ，２２７４ｆ
几年，国外有人用离子交换色谱分离分析植物种子、叶片、块茎等组织中的核苷酸或核苷酸糖，取得了令人满意的结果［］本文采用反相色谱，１３。利用单核苷酸在结构和在不同ｐＨ值范围其ｐＫ值的差异，通过控制ｐＨ实现它们之间的分离。初步实验表明，在绿豆芽的细胞中，可能至少存在５＇－ＵＭＰ等若干种游离核苷酸。实验方法
种氨。黑米是中基酸国特产，基酸总量其氨约是一
般大米的三倍，是已有报道的米类中含量最高的。２．茶叶样品沸水泡三次，滤液合并，调
Ｐ２５Ｈ．。６
（四）定量方法用已知浓度的３种氨基酸混７合标样作标准，用绝对标准曲线法定量。定量结果拷由Ｃ３动给出。Ｒ－Ａ自
表１茶叶中游离氨基酸含量
２．往子分析柱是Ｓｉ－ａＩＣ０／ｈｍｐｃＳ－７ｋＳ５４柱，１０４ｍｉ． μ １％交联度的苯１０Ｌｉ５ｍｄ，７蘭０
乙烯－乙烯基苯聚合物的阳离子交换树脂。二３．试剂（）１流动相Ａ２二水柠檬酸：４．３
锂、１ｍ甲基溶纤素、４ｍ６％ＨＣＯ，蒸馏水２０ｌ０ｌ０Ｉ稀释到３０ｍ，Ｈ＝２５＃）００ｌｐ．。流动相Ｂ：８ｇ６２．二２水柠檬酸锂，２ｇ１．硼酸，ｍｌＯ调ｐ４用４ｏＬｉＨ鱬Ｈ＝１．／０，０
实验
部
分
（一）仪器及试剂１．仪器岛津ＬＣ６ＨＰ－ＡＬＣ仪；Ｆ－３Ｒ５５荧光检测器；ＳＬ－Ａ主机控制器；Ｃ３数据Ｃ６Ｒ－Ａ
处理系统，手动进样。
分析
结果
大米和茶叶中基酸的氨成分都有过报道［６３］－。
本文应用离子交换色谱荧光检测法分析了黑米等四种谷物中氨基酸的总量和四种中国茶叶中的游离氨基酸，确定了谷物中二十四种氨基酸和茶叶中三十
Ｉｔｐｅｎｅ－Ｈｒｕ－ｎｉｉｎｈｒｅｃｏＳｇｏｐｃｔｎｎｅｓｆｏａｇｃｍｏｎｓＯＡ（ｐｔｌｌｈｄ）ｅｔｗｔｏｐｕｄ，Ｐｏｈｈａｄｙｅｒｃｉ－ａｅａｓｈａｐｕｄｖｇＨｇｏｐｐｏｕｅｃｍｏｏｎｈｉ－２ｕｔｒｄｃａａｎＮｒｏｓｏｇｆｏｅｅｔｓｎ．ｆｉｈｐｃｔｎｌｌｒｃｓｂｔｃＩｓｕｙｏ－ｒｙｓｎｕａｅｕｏｍｈｄｌｉｉａｄｄａｉｏｄｓｈｐｏｎａｏｏｔｓｅｍｎａｉｓａｒｌｅｒｅｄ，ｃｕｓｉｌｃｓｒｃｗｔＯＡＴｉｐｐｒｓｔｔａａｓｅｔｈ．ｈｓｅｐｅｎｓｎｌｉａｉＰａｒｅｈｅｙｓｏａｉａｄｉｓｅｌｎｅｉａｄｓｆｎｃｓｅｒＣｉｓｇａｓｔｍｏｉｎａｈｅｒｎｎｅｖａｂＨＰＣｉｆｏｓｎｅｔｔｎＩｗｓｙＬｗｔｌｒｃｃｄｅｉ．ｔｈｅｅｕｅｃｏａ
［］Ｎｋｇｗｅａ．ＣａｙＫｎｙＨｋｋ，６ａａａａｌｈｇｏｋｕｏｕｔ，ｅｏ
５，６１７）ｅ．Ｃ，３４０４０５（９９；ｒｆＡ９，４７．
（稿日收期：１７０５）９年１８月日ＴｅｌｉｏＡｉＡｉｂＨｇＰｒｒａｃｈＡａｓｆｎｃｓｉｅｏｎｎｙｓｍｏｄｙｈｆｍｅＬｕＣｒａｇｐｗｈｏｓｎＤｔｃｏｉｉｈｍｔｒｈｉＦｒｃｃｅｔｎｑｄｏｏａｙｌｅｅｅｅｉ，ｔｕＣａｇａｈＳｎＺｅｈａｄＺｉｈｎＪｎｕ，ｏｈｕｎＧｉｇｎｏｈｎａＤｒｅｔＣｅｉｒＮｏｈｅＵｉｅｉ，ｅａｍｎｏｈｓｙｒｗｔｖｓｙｔｍｔ，ｔｓｎｒｔ
稀释到１０ｍ。（）００ｌ３流动相Ｃ．ＬＯ配成：４ｇｉＨ２
５０ｌ０ｍ水溶液，清洗柱子用。（）４反应液Ａ：先配缓冲液无水ＮａＣ３． ⑴硼酸４．硫酸钾２Ｏ１３２ｇ２０ｇ７５．溶后稀释到３０ｍ，Ｈ＝１．６ｇ４００ｌｐ０。在１０ｍ３００ｌ缓冲液中加入７ａＩ０ｍｌ％ＮＣＯ４即是反应液Ａ（）．。５反应液Ｂ：５ｍ缓冲液中加入４０ｇＰ，ｍ在４０ｌ０ｍＯＡ７ｌ乙醇、１％Ｃ（Ｈ）Ｏ（ＨＣＯ）Ｈ溶液０ＨＣＨＣ２ｎ２ｌ巯基乙醇１ｌ以上用日本片山化学工业株ｍｍ式会社的试剂。（３种氨基酸的标样，出自日６７）本和光纯药工业株式会社。（二）色谱条件总流速０ｍ／ｉ；梯度洗．ｌｎ４ｍ脱１０９分钟；荧光检测器Ｅ３０ｍ，ｍ４０ｍｘ５ｎＥ５ｎ恢柱温３５℃，反应温度５。梯度曲线见图２８８妫５。（三）样品的准备１．谷物水解样在６ｏＬＩ中１０ｍｌＨＣ／１℃封管水解２小时，用流动相Ａ４稀释样品。
表４
不同填料的保护柱对柱效的影响
参考文
献
［］ＢＯＲＤａａｏｕＫ８．１Ｔ－ＡＣｔｌｇｅ１５９
［］ＨＬＭｃｒ－ａｌ４２ＰＣｈｅＮｇ１．ａｅｙｅ９８［］ＴｅｏｐｃＧｉｅＣｒｍｔｒｐｙ３ｈＣｒｍａｋｄｔｈｏａｇｈｈｕｏｏａ
献［］１的基础上作了一些改动。将２粒绿豆加适量０自来水置于３℃的培养箱中，４小时后即长成３ｍ０８ｃ左右长的豆芽。去壳去根须。然后将２豆芽加ｇ２ｌｍ冰冷的３％的高氯酸后放入－２℃的冰库中，５８待冻成冰渣样后取出研磨，研至冰完全融化前再送入冰库，再冻再研，如是者三。之后将少量样品从研钵转移至微型玻璃细胞破碎器中，在４ ℃以下充分匀浆，之后迅速离心５分钟（００ｍｎ，上４０转／ｉ）＊本系１７９届毕业现在湖南吉首８生，州化验分析中
（二）主要试剂ＣＯＨ３Ｈ、ＫＨＰ２Ｏ、
ＮＨ４２ＯＩ４皆为分析纯，５ＵＭＰＵｒ４ＣＯ＇－、ｄ
为美国Ｓｍ公品；＇ＭＰ＇ＭＰｉａ司产５Ａ，５Ｃ为中国－－
科学院上海生化所产；５－ＭＰ５Ｉ、＇＇－＇Ｇ、＇ＭＰ３（）－２ＧＭＰ为上海试剂二厂产。
ｆｕｄａｔｅｅｅａｉｏｉｓＣｉｅｏｎｔｔｒａ３ｍｎａｄｉｈｎｓｈｈｒ０ｃｎｅ
ｔｓ２ａｉｏｄｉｇｉｓｂｔａｉｏｅａｄｍｎａｓｒｎｕｔｍｎａｎ４ｃｎ，ｉａｈｅ
ａｉｓｔｔｂａｋｃｉｔｅｇｅｔｃｃｎｅｉｌｃｒｅｈｈｈｓｉｄｏｎｎ１ｓｉｎ
ｇｉｄｃｓｙｔｒｎｉｌｅｅ．ａｓｏｄｓ
绿豆芽细胞中游离５ＵＰ＇Ｍ等的反相液相色谱分析－
周春凤谢明高石慧萍＊
（中南民族学院化学系，武汉）
生物体细胞中的游离核苷酸具有极其重要的生
理功能，若干年来对它们的研究一直相当活跃。近
×１０（５ｍｍ日本岛津）ｕｌｏｉＣ８．ｉ．；Ｎｃｓ－１６ｄ）ｅｌ，４（ ×２０（５ｍｍ中国大连色谱技术研究开发中心）。
高效液相色谱荧光检测法分析氨基酸
常建华宋正华郭治安
（大学化，西安）西北学系
氨基酸的分析方法应用最普遍的是离子交换色谱法［］１。在－Ｈ存在下，邻苯二甲醛（Ｐ）ＳＯＡ与伯氨基在柱后反应产生荧光物质进行被基酸的检测是一种有效的微量分析法［６而亚氨酸则须先用次］氯酸钠氧化再与ＯＡ反应。整个系统如图１Ｐ如示。我们应用此法分析了谷物的总氨基酸和茶叶中的游离氨基酸含量。
表２
谷物中氨基酸总含量
（续表２）
［］ＭｃｙＴｕｍｒｅａ．ＪｓＪｈ５ｈｏｓｉｕａｌｉｅｏｉｉｊｔ，ｓｎｓＤｉｋＫｙ，４（５）ｒｆＣ，５ａａｕｉｇｏ，１７；ｅ．Ａ３５９，
２０．２５