消毒剂效力及有效期验证方案

1.目的PURPOSE (5)

2.范围SCOPE (5)

3.引言INTRODUCTION (5)

4.参考资料REFENRENCE (6)

5.验证方法TEST METHOD (6)

5.1.所用仪器和物料 (6)

5.2.测试工作菌种 (6)

5.3.实验程序 (6)

6.接受标准 (8)

6.1.消毒效力接受标准： (8)

6.2.中和效力控制及其接受标准： (8)

1.目的PURPOSE

验证惠氏苏州工厂目前使用的几种消毒剂Process LpHse: 酸性、Process VespheneⅡ se:碱性、Ethanol 酒精溶液、快活溶液，在不锈钢、橡胶、瓷砖、玻璃、塑料门帘、墙面等不同材质上的消毒效力，同时验证消毒剂的使用有效期。

2.范围SCOPE

本验证需要验证的消毒剂有：Process LpHse: (酸性)、Process VespheneⅡ se:(碱性)、Ethanol 酒精溶液、快活溶液FORWARD disinfectant四种。

3.引言INTRODUCTION

本验证的原理是，在某种材质表面接种0.1ml (104-105CFU)的菌种，室温下自然风干后，将消毒剂直接喷在材质表面，等消毒剂作用一段时间后，检验没有被杀灭的细菌数；根据细菌被杀灭的数量，来判断消毒剂的杀菌效果。实际消毒操作时，消毒剂喷到要消毒物体表面后，再通过人为的涂擦等操作使消毒剂与物体表面充分接触，同时，此操作也会机械去除掉一部分微生物。在该验证中，消毒剂是喷到材质表面，这种方法要比实际消毒时的效果差，因此验证的结果更能体现实际的消毒效果。

4.参考资料REFENRENCE

Disinfectant Effectiveness Study（812-Analytical Report-0807-1.0）

SOPTS-35(V5)

5.验证方法TEST METHOD

5.1.所用仪器和物料

➢所用培养皿、移液管、容器均在121度下灭菌30分钟后使用

➢无菌一次性培养皿，移液管。

➢生物安全柜(BHC-1300ⅡA/B3生物安全柜)工作窗口吸入风速为≥0.5m/s

➢灭菌锅

➢培养箱（25度和32度各一个）

5.2.测试工作菌种

➢大肠埃希菌（ CMCC(B)44102）菌种斜面

➢金黄色葡萄球菌（CMCC(B)26003）菌种斜面

➢白色念珠菌（ CMCC98001）菌种斜面

➢环境菌种科氏葡萄球菌斜面（六、九、十月环境检测沉降菌平板上连续检出科氏葡萄球菌，特选此菌为环境菌种）

需验证的消毒剂应质量合格并在有效期即将结束时开始验证试验，实验所用的仪器设备均在校正合格期限内。

5.3.实验程序

5.3.1.消毒剂的配置：

消毒剂按照相关的程序进行稀释，配置好的消毒剂溶液储存在实际操作时使用

的喷壶中，在有效期内（7天）每天模拟日常使用方法使用，第8天开始验证试

验。消毒剂配置方法及消毒反应时间见表2.

5.3.2.材质的准备：

所需的材质均是在实际操作中消毒剂所消毒的表面材质，准备的材质需为无菌

材质，在实验过程中，每个实验组需3块同种材质同时进行。

表2.消毒剂配置方法及消毒反应时间

5.3.3.菌悬液的制备：

取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌及环境菌种科氏葡萄球菌的营养琼脂斜面培养物，接种至营养琼脂斜面上，在35 ~ 37℃培养20 ~ 22小时。再接种上述菌种的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，在35 ~ 37℃培养18 ~ 24小时，上述营养肉汤培养物用0.9%无菌生理盐水溶液逐级10倍稀释，制成每0.1 ml含菌落数104-105CFU的菌悬液。

5.3.4.实验操作：

准备3块待测表面材质于生物安全柜内，分别吸取0.1 ml(104-105CFU)接种于3块待测表面材质上，让其在生物安全柜中自然风干后待测，将配置好的的消毒装入喷壶中，均匀地喷洒在材质的表面后立即开始计时，按表2等计时结束

后，迅速把该材质放入100ml的D/E 中和液中，充分振荡1min后经0.45微米的滤膜过滤，用100ml/次的D/E 中和液冲洗3次，取滤膜放在D/E中和琼脂平板上培养。培养条件：大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌及环境菌种科氏葡萄球菌在30-35℃，至少3天，重复以上实验操作3次，完成验证实验。

5.3.5. 阴性控制实验：

100ml 的D/E 中和液经0.45-micron 的滤膜后，取滤膜放在D/E 中和琼脂平板上培养，培养条件：细菌30-35℃，至少3天， 5.3.6. 阳性控制实验：

准备3块无菌的待测表面材质于生物安全柜内，分别吸取0.1 ml(10-100CFU)阳性菌接种于3块待测表面材质上，让其在生物安全柜中自然风干后，将每种带菌的材质放入100ml 无菌的缓冲溶液中，充分振荡1min ，经0.45微米的滤膜过滤，用100ml/次的D/E 中和液冲洗3次，取滤膜放置于D/E 中和琼脂平板上培养。培养条件：大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌及环境菌种科氏葡萄球菌在30-35℃，至少3天。

6. 接受标准

6.1. 消毒效力接受标准：

计算Log Reduction ，评价该种消毒剂对该菌种的杀灭效果，

Log Reduction=Log(Average#of Organisms in Control Plates)-Log(Average# of Organisms in Test Plates)

接受标准：Log Reduction ≥3

6.2. 中和效力控制及其接受标准：

吸5ml 已配制好的消毒剂，经0.45微米的滤膜过滤后，用100ml/次中和液冲洗3次，加入1ml 菌悬液（10-100cfu ）置滤膜上，用100ml/次中和液冲洗1次，取滤膜放在D/E 中和琼脂平板上培养，计数。每种菌重复做3份样品。分别取上述菌悬液1ml （10-100cfu ）置100*10mm 的无菌平皿，浇入约20ml （≈45℃）TSA 培养，计数。每种菌重复做3份样品。

培养条件：大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌和环境菌种科氏葡萄球菌30-35℃，至少3天。 根据结果计算回收率：

Percent Recovery ==

%100

Control Positive CFU Mean

Sample CFU

接受标准：Percent Recovery ≥70%