第8章 紫外及可见光吸收光谱法 课件-2分析

§8.3紫外-可见分光光度计

8.3.1主要部件

8.3.2常见光路类型

8.3.3一般光学性能

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8.3.1紫外-可见分光光度计的主要部件

•光源：提供能量激发被测物质

•单色器：将来自光源的连续光谱按波长顺序色散，并从中分离出一定宽度的谱带，获得所需单色光

•吸收池：盛放溶液并提供一定吸光厚度

•检测器：检测光讯号，并将光讯号转变为电讯号•讯号处理及显示器：迅号放大、数学换算

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8.3.2紫外-可见分光光度计的光路类型

➢单光束分光光度计

光栅

吸收池

特点：一束单色光

要求：光源稳定

校零

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➢双光束分光光度计

光栅

扇面镜

参比池

样品池

I 0I

I 0

扇面镜

▪优点：减免光源不稳误差；改变波长不需校零；T = I /I 0▪缺点：不适于浑浊溶液的测定

特点：两束同波长单色光

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将单色器所得的单色辐射，用切光器分成两个光束，分别通过试样溶液和溶剂溶液，这两个光束可通过与前一切光器同步的另一切光器在不同时间内交替由一个检测器来接受，并通过一个光电计时信号系统把来自两个光束的信号加以比较，获得吸光度．

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➢双波长分光光度计

单色器1

单色器2样品池

∆A =A 1-A 2

λ1λ2

特点：两束不同波长单色光

优点：无需参比；可测浑浊溶液；可得一阶导数光谱

➢双重单色器分光光度计

▪特点：经先后两次分光

▪优点：单色光较纯，杂散光降得很低(<0.001%)

➢光多道二极管阵列检测器分光光度计

▪特点：多个二极管阵列紧密排列作为检测器

▪优点：扫描时间极短，1/10秒内完成一张紫外-可见全光光谱

62§8.4UV-vis定量分析方法

8.4.1单组分定量分析方法

8.4.2多组分定量分析方法

8.4.3光电比色法

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8.4.1单组分定量分析方法

⏹测定波长的选择原则

➢吸光系数要大（λmax ）➢尽可能不选末端吸收➢尖峰>平坦峰

➢测定波长>溶剂截止波长

∆λ

∆A 尖∆A 平

>

☑单组分定量分析方法

吸光系数法校正曲线法对照法

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8.4.1-1吸光系数法

✷适用：单色光较纯，符合Beer 定律✷方法：▪绝对法：

▪比较法：

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UV-vis

单组分定量分析方法：吸光系数法（例题）例1:VB 12λmax 361nm:E 1%1cm =207, A =0.414, l =1cm ，求C =？

g/100ml

例2:样品VB 1225.0mg →1000ml ，λmax 361nm ：A =0.507，l =1cm ，求VB 12 (%)=?

C =25mg/1000ml=0.0025g/100ml

=20μg/ml

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8.4.1-2校正/标准/工作曲线法

✷适用：单色光不纯，不完全符合L-B 定律（曲线不过零点，线性稍差）✷方法：标准序列固定条件

A ~C 曲线样品

同上条件

A x

C x

曲线

回归方程：A=ElC=KC

A x

校正曲线法示意图

C x

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UV-vis 单组分定量分析方法：校正曲线法（例题）例3:芦丁的含量测定:标准品(0.200mg/ml)0~5ml →25ml

样品3.0mg →25ml

0.710mg/25ml

0.845

回归方程：

A =0.0105+1.162C (r =0.9996)

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8.4.1-3对照法（外标一点法）

✷适用：线性关系较好✷要求：相同测定条件

C s 与C x 相近✷方法：

对照法示意图

A s =EC s l ；A x =EC x l

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UV-vis 单组分定量分析方法：对照法（例题）例4: VB 12的含量测定VB 12注射液：

2.50mL →10.00mL 对照品溶液：25.00mg →1000mL

λmax 361nm:l =1cm,A x =0.508,A s =0.518,求C=?①对照法：

②吸光系数法：

C =98.2mg/L

C =0.00982g/100ml =98.2mg/L

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UV-vis 测定一元弱酸HA 的K a

酸式体：A HA =εHA C

碱式体：A A -=εA -C

A =A HA +A A -=εHA [HA]+εA -[A -]

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✧两组分混合物的吸收光谱

➢

吸收峰互不重叠a 、b 互不干扰

➢吸收峰部分重叠

a 对

b 干扰，b 对a 无干扰

λ1：A 1a →单组分定量C a =A 1a /E 1a l λ2：A 2a+b =A 2a +A 2b =E 2a C a l+E 2b C b l

λ1：A 1a →单组分定量C a =A 1a /E 1a l λ2：A 2b →单组分定量C b =A 2b /E 2b l