沙门氏菌检验方法(pdf 52页)
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沙门氏菌检验方法
GB 4789.4-2010
李天添
目录
v 概述 v 致病性 v 细菌学特性 v 生化特性 v 血清学特性 v GB 4789.4-2010检验方法
沙门氏菌属（ Salmonella ）
v 美国兽医微生物和病理学家。1884年任 美国农业部畜牧局首任局长，他首次从 病猪中分离出猪霍乱沙门氏菌。隶属于 肠杆菌科，是一种重要的肠道致病菌， 可引起人类的伤寒、副伤寒、感染性腹 泻、食物中毒和医院内感染，并引起动 物发生沙门氏菌病。
产生乙酰甲基甲醇（V-P），对苯丙氨酸不脱氨 § 在氰化钾培养基上不生长
目录
v 概述 v 致病性 v 细菌学特性 v 生化特性 v 血清学特性 v GB 4789.4-2010检验方法
沙门氏菌血清学特性
v 抗原成份极为复杂，且有变种，因此这给血清分型带来很多困难，分 为菌体（O）、鞭毛（H）、荚膜（K、Vi）、纤毛抗原。其中菌体和鞭 毛抗原在沙门氏菌血清型的鉴别上很重要。 § O抗原：存在于细胞壁中，每一种沙门氏菌的光滑型菌株至少有一 种特异的菌体抗原，由于菌体抗原耐热性相对稳定，抗原不易丧失 或变异，因此菌体抗原已公认为沙门氏菌血清学分型的基础。O抗 原耐热，100℃~121℃加热2.5h，而不失去抗原性；用乙醇和1N盐 酸处理细菌，其抗原性不受影响。O凝集反应呈颗粒状。 § H抗原：系由不耐热的蛋白质组成，经加热和用乙醇及碱处理易变 性，失去凝集性，但不改变抗原性。加热100℃以上，H抗原会失去 活性。H凝集反应出现迅速，2h内即达最终效价。H凝集为絮状，松 散，轻摇易散开。 § K抗原：为Vi抗原和M抗原。Vi和M抗原，均为O抗原表面的荚膜抗 原，具有这种抗原的细菌，不被相应的O血清凝集。但100℃加热处 理后，虽然抗原不被灭活，而已从菌体表面脱落，游离于液体中， 从而暴露出O抗原，可以与0血清凝集。个别种有Vi抗原，如伤寒沙 门氏菌等 § 纤毛抗原：纤毛是一种比鞭毛更细小的纤维样结构物，含有蛋白性 的抗原物质。其纤毛能凝集豚鼠的红血球，该特性因加甘露糖而消 失，即谓1型纤毛。所有沙门氏菌的纤毛抗原性一样。
沙门氏菌细菌性特性
v 0.7µm~1.5µm×2.0µm~5.0µm的G-直杆菌 v 多数具有周身鞭毛，能运动，但也有无鞭毛者，不能运
动，如鸡沙门氏菌、雏白痢沙门氏菌 v 无芽孢
目录
v 概述 v 致病性 v 细菌学特性 v 生化特性 v 血清学特性 v GB 4789.4-2010检验方法
生化特性——培养特性
v 是一大群寄生于人类和动物肠道内，形 态、培养、生化反应和抗原构造相类似 的革兰氏阴性杆菌，种类繁多。已发现 近3000个种（或血型）。
v 共分为7个亚属（生化群），亚利桑那菌 为第三群。
DANIEL ELMER SALMON
(1850-1914)
肠杆菌科隶属关系
肠杆菌科(肠道内菌群)
耶尔森
Enterobacteriaceae
v 需氧或兼性厌氧 v 在10℃～43℃内均能生长，35℃～43℃最适，一般沙门氏
菌在40℃～43℃培养能提高阳性检出率，而伤寒沙门氏菌 在37℃培养阳性检出率最高 v 最适pH6.8～7.8
生化特性
v 沙门氏菌生化特性比较复杂 v 常见的沙门氏菌均属于第I亚属 v 常见的典型特性如下
§ 不分解乳糖（亚利桑那菌除外） § 分解葡萄糖产酸产气（伤寒沙门氏菌产酸不产气） § 多数产H2S，能利用枸橼酸盐，能还原硝酸盐为亚硝酸盐 § 多数不产生靛基质（吲哚），不液化明胶，不分解尿素，不
§ 轻轻摇动培养过的样品混合物，移取1 mL，转种于10 mL四 硫酸钠煌绿增菌液（TTB），42℃±1℃, 18h~24h
• 含有胆盐，抑制除沙门氏菌以外的肠道菌（主要抑制革兰氏阳性球菌 和部分大肠埃希氏菌的生长），而伤寒与副伤寒沙门氏菌仍能生长
目录
v 概述 v 致病性 v 细菌学特性 v 生化特性 v 血清学特性 v GB 4789.4-2010检验方法
GB 4789.4-2010检验方法
§ 前增菌 § 选择性增菌
§ 平板分离 § 初步鉴定 § 生化反应
§ 血清学
BPW，8~18h 同时SC & TTB，1天 同时BS & XLD，1~2天 TSI 赖氨酸 尿素 靛基质 KCN NA，1~2天 甘露醇、山梨醇、ONPG试验等，1~2天 O多价血清，H多价血清，A~F O血清…
前增菌
v Day1：
§ 25g(mL)样品+225mL缓冲蛋白胨水（BPW）
• BPW是基础增菌培养基，不含任何抑制成分，有利于受损伤的沙门氏 菌复苏。使受损伤的沙门氏菌细胞恢复到稳定的生理状态
§ 36℃±1℃, 8h~18h § 样品呈酸性、碱性时，需调PH值至6.8±0.2
选择性增菌
v Day2：
沙门氏菌致病性
v 重要的肠道致病菌，可引起人类的伤寒、副伤寒、感染性 腹泻、食物中毒和医院内感染，并引起动物发生沙门氏菌 病。据世界卫生组织不完全统计，每年至少有16百度文库0万病 例，导致死亡约60万。
v 人类沙门氏菌感染的临类型主要有四类：
§ 胃肠炎型：主要由沙门氏菌I的各种血清型引起，最常见的是 沙门氏菌食物中毒和感染性腹泻，是由于沙门氏菌在食品中 大量繁殖，侵入肠道后继续繁殖并释放出大量肠毒素，引起 剧烈的胃肠炎。通常表现为轻度，持久性腹泻。
沙门氏 菌属
氏菌属
大肠菌群Coliform
变形杆
克雷伯
菌属
柠檬酸杆菌属
氏菌属
摩根菌 属
粪大肠菌群 Fecal Coliform
志贺氏 菌属
沙雷氏 菌属
克罗诺
肠杆菌属
……
大肠埃希氏菌属(大肠杆菌)E.Coli
出血性
侵袭性
致病性 非致泻
O157:H7
（非典
集聚性 产毒性
型）
目录
v 概述 v 致病性 v 细菌学特性 v 生化特性 v 血清学特性 v GB 4789.4-2010检验方法
§ 伤寒型：由伤寒、副伤寒沙门氏菌引起，未接受过治疗的病 人致死率可超过10%，而对经过适当医疗的病人其致死率低 于1%
§ 败血症型：最常由猪霍乱、鼠伤寒和肠炎沙门氏菌引起 § 无症状携带者不显示发病症状仍能将微生物传染给其他人
（传统的例子就是玛丽伤寒）
目录
v 概述 v 致病性 v 细菌学特性 v 生化特性 v 血清学特性 v GB 4789.4-2010检验方法
GB 4789.4-2010
李天添
目录
v 概述 v 致病性 v 细菌学特性 v 生化特性 v 血清学特性 v GB 4789.4-2010检验方法
沙门氏菌属（ Salmonella ）
v 美国兽医微生物和病理学家。1884年任 美国农业部畜牧局首任局长，他首次从 病猪中分离出猪霍乱沙门氏菌。隶属于 肠杆菌科，是一种重要的肠道致病菌， 可引起人类的伤寒、副伤寒、感染性腹 泻、食物中毒和医院内感染，并引起动 物发生沙门氏菌病。
产生乙酰甲基甲醇（V-P），对苯丙氨酸不脱氨 § 在氰化钾培养基上不生长
目录
v 概述 v 致病性 v 细菌学特性 v 生化特性 v 血清学特性 v GB 4789.4-2010检验方法
沙门氏菌血清学特性
v 抗原成份极为复杂，且有变种，因此这给血清分型带来很多困难，分 为菌体（O）、鞭毛（H）、荚膜（K、Vi）、纤毛抗原。其中菌体和鞭 毛抗原在沙门氏菌血清型的鉴别上很重要。 § O抗原：存在于细胞壁中，每一种沙门氏菌的光滑型菌株至少有一 种特异的菌体抗原，由于菌体抗原耐热性相对稳定，抗原不易丧失 或变异，因此菌体抗原已公认为沙门氏菌血清学分型的基础。O抗 原耐热，100℃~121℃加热2.5h，而不失去抗原性；用乙醇和1N盐 酸处理细菌，其抗原性不受影响。O凝集反应呈颗粒状。 § H抗原：系由不耐热的蛋白质组成，经加热和用乙醇及碱处理易变 性，失去凝集性，但不改变抗原性。加热100℃以上，H抗原会失去 活性。H凝集反应出现迅速，2h内即达最终效价。H凝集为絮状，松 散，轻摇易散开。 § K抗原：为Vi抗原和M抗原。Vi和M抗原，均为O抗原表面的荚膜抗 原，具有这种抗原的细菌，不被相应的O血清凝集。但100℃加热处 理后，虽然抗原不被灭活，而已从菌体表面脱落，游离于液体中， 从而暴露出O抗原，可以与0血清凝集。个别种有Vi抗原，如伤寒沙 门氏菌等 § 纤毛抗原：纤毛是一种比鞭毛更细小的纤维样结构物，含有蛋白性 的抗原物质。其纤毛能凝集豚鼠的红血球，该特性因加甘露糖而消 失，即谓1型纤毛。所有沙门氏菌的纤毛抗原性一样。
沙门氏菌细菌性特性
v 0.7µm~1.5µm×2.0µm~5.0µm的G-直杆菌 v 多数具有周身鞭毛，能运动，但也有无鞭毛者，不能运
动，如鸡沙门氏菌、雏白痢沙门氏菌 v 无芽孢
目录
v 概述 v 致病性 v 细菌学特性 v 生化特性 v 血清学特性 v GB 4789.4-2010检验方法
生化特性——培养特性
v 是一大群寄生于人类和动物肠道内，形 态、培养、生化反应和抗原构造相类似 的革兰氏阴性杆菌，种类繁多。已发现 近3000个种（或血型）。
v 共分为7个亚属（生化群），亚利桑那菌 为第三群。
DANIEL ELMER SALMON
(1850-1914)
肠杆菌科隶属关系
肠杆菌科(肠道内菌群)
耶尔森
Enterobacteriaceae
v 需氧或兼性厌氧 v 在10℃～43℃内均能生长，35℃～43℃最适，一般沙门氏
菌在40℃～43℃培养能提高阳性检出率，而伤寒沙门氏菌 在37℃培养阳性检出率最高 v 最适pH6.8～7.8
生化特性
v 沙门氏菌生化特性比较复杂 v 常见的沙门氏菌均属于第I亚属 v 常见的典型特性如下
§ 不分解乳糖（亚利桑那菌除外） § 分解葡萄糖产酸产气（伤寒沙门氏菌产酸不产气） § 多数产H2S，能利用枸橼酸盐，能还原硝酸盐为亚硝酸盐 § 多数不产生靛基质（吲哚），不液化明胶，不分解尿素，不
§ 轻轻摇动培养过的样品混合物，移取1 mL，转种于10 mL四 硫酸钠煌绿增菌液（TTB），42℃±1℃, 18h~24h
• 含有胆盐，抑制除沙门氏菌以外的肠道菌（主要抑制革兰氏阳性球菌 和部分大肠埃希氏菌的生长），而伤寒与副伤寒沙门氏菌仍能生长
目录
v 概述 v 致病性 v 细菌学特性 v 生化特性 v 血清学特性 v GB 4789.4-2010检验方法
GB 4789.4-2010检验方法
§ 前增菌 § 选择性增菌
§ 平板分离 § 初步鉴定 § 生化反应
§ 血清学
BPW，8~18h 同时SC & TTB，1天 同时BS & XLD，1~2天 TSI 赖氨酸 尿素 靛基质 KCN NA，1~2天 甘露醇、山梨醇、ONPG试验等，1~2天 O多价血清，H多价血清，A~F O血清…
前增菌
v Day1：
§ 25g(mL)样品+225mL缓冲蛋白胨水（BPW）
• BPW是基础增菌培养基，不含任何抑制成分，有利于受损伤的沙门氏 菌复苏。使受损伤的沙门氏菌细胞恢复到稳定的生理状态
§ 36℃±1℃, 8h~18h § 样品呈酸性、碱性时，需调PH值至6.8±0.2
选择性增菌
v Day2：
沙门氏菌致病性
v 重要的肠道致病菌，可引起人类的伤寒、副伤寒、感染性 腹泻、食物中毒和医院内感染，并引起动物发生沙门氏菌 病。据世界卫生组织不完全统计，每年至少有16百度文库0万病 例，导致死亡约60万。
v 人类沙门氏菌感染的临类型主要有四类：
§ 胃肠炎型：主要由沙门氏菌I的各种血清型引起，最常见的是 沙门氏菌食物中毒和感染性腹泻，是由于沙门氏菌在食品中 大量繁殖，侵入肠道后继续繁殖并释放出大量肠毒素，引起 剧烈的胃肠炎。通常表现为轻度，持久性腹泻。
沙门氏 菌属
氏菌属
大肠菌群Coliform
变形杆
克雷伯
菌属
柠檬酸杆菌属
氏菌属
摩根菌 属
粪大肠菌群 Fecal Coliform
志贺氏 菌属
沙雷氏 菌属
克罗诺
肠杆菌属
……
大肠埃希氏菌属(大肠杆菌)E.Coli
出血性
侵袭性
致病性 非致泻
O157:H7
（非典
集聚性 产毒性
型）
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v 概述 v 致病性 v 细菌学特性 v 生化特性 v 血清学特性 v GB 4789.4-2010检验方法
§ 伤寒型：由伤寒、副伤寒沙门氏菌引起，未接受过治疗的病 人致死率可超过10%，而对经过适当医疗的病人其致死率低 于1%
§ 败血症型：最常由猪霍乱、鼠伤寒和肠炎沙门氏菌引起 § 无症状携带者不显示发病症状仍能将微生物传染给其他人
（传统的例子就是玛丽伤寒）
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v 概述 v 致病性 v 细菌学特性 v 生化特性 v 血清学特性 v GB 4789.4-2010检验方法