小鼠腹腔巨噬细胞的分离培养与吞噬功能测定

采取病例对照研究方法, 以2003—01～2006—12 于本院 为: Px = ex p ( 0. 821A 2 - 0. 759A 1 + 0. 901A 3 + 0. 775A 4
消 化科和普 通外科住院 患者中 符合《内科 学》和《外 科学》诊 + 1. 894A 5 + 3. 012A 6) / [ 1 + Ex p ( 0. 821A 2 - 0. 759A 1 +
1 对象和方法
2 结果
笔者将可 能与胆源性胰腺炎 发生有关的 29 项因 素同时 列入条 件 L og istic 回归模 型进行多 因素分析, 逐步去 除无统 计关联的因素, 最终进入模型的因素见表1。A 1 指文化程度, A 2 指饮酒情 况, A 3 指食 用肉制品情 况, A 4 指血 脂情况, A 5 指植物神经功能情况, A 6 家族史。根据 L o gist ic 回归最终分 析结 果推导出研 究人群 的患胆 源性胰 腺炎的 危险因 素模型
吞 噬百分 率=
吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数 200 个巨噬细胞( 吞噬及未吞噬的)
×
100% ; 吞噬指数= 被2吞00噬个的巨鸡噬红细细胞胞÷2
2 实验结果
2. 1 倒置显微镜下巨噬细胞形态
台酚蓝排斥法检测巨噬细胞的成活 率> 95% 。巨噬细胞 在 0. 5h 内贴壁, 随后细胞逐 渐增大, 形 状呈椭圆 形, 梭形, 不 规则 形, 形成伪足 或突起 等, 形 态典型, 直 至形成单 层细 胞, 见图 1。
关键词: 巨噬细胞; 分离培养; 吞噬功能 中图分类号: R329. 2+ 8 文献 标识码: A 文章编号: 1008- 0104( 2007) 05- 0009- 01 巨噬细胞是 动物机体内重要的 免疫细胞, 具 有抗肿瘤和 免疫 调节等 重要作 用[1,2] , 被广 泛应用于 体外免 疫增强 药物 的非特异性免疫功能评价[ 3] 。本实验以小鼠腹腔巨噬细胞为
细胞悬液移入培养瓶中, 置于 37℃, 5%CO 2 培养 箱中继续培 养, 观察细胞形态变化[4] 。
1. 5 小鼠腹腔巨噬细胞体内吞噬功能测定
小鼠的腹 腔注射 0. 5% 淀 粉生理 盐水 0. 5mL , 诱导 小鼠 产生腹腔巨噬细胞。2d 后小鼠腹 腔注射5% 鸡红细胞生理盐 水悬液 0. 5mL , 间隔 8～12h, 颈椎脱臼法处死小鼠, 经腹膜注 入生理盐水悬液 2mL [5] 。轻轻按揉 1min, 用注射器针头刺入 腹膜吸 取腹腔洗 液 1mL , 分滴于两 片载玻 片, 放入垫有 湿纱
2. 149
1. 468
2. 596
A3
0. 784
0. 395
5. 286
0. 027
2. 754
1. 005
4. 194
A4
1. 231
0. 543
4. 227
0. 008
3. 248
1. 012
10. 524
A5
2. 147
0. 648
7. 452
0. 004
11. 234
1. 979
48. 472
布的搪瓷盒中, 移至 37℃孵 箱温育30min, 然后以生理盐水液
漂洗, 晾干。1: 1 丙酮- 甲醇溶液固定5min, 晾干后以4% ( V /
V ) G iemsa/ 磷酸缓冲液染色 30min, 流水冲洗, 自然晾干。
结果判定: 油镜下记数巨噬细胞, 每片200 个按下式计算
巨噬细胞吞噬百分率和吞噬指数[ 5] 。
参考文献: [ 1] 徐远义, 黄允宁, 常 越, 等. 多抗甲素诱 导小鼠腹腔巨 噬细胞对癌
细胞杀伤增 强机 制的 研究[ J] . 免疫 学杂志, 2006, 22 ( 4) : 396398 [ 2] 黄琼, 李志, 杨杏芬, 等. 流式细胞术检 测小鼠腹腔巨 噬细胞吞噬 功能[ J ] . 中国药理学与毒理学杂志, 2007, 21( 2) : 140- 146 [ 3] 张华, 钟英英, 方廖 琼, 等. 羊胎盘免疫 调节因子对小 鼠腹腔巨噬 细胞免疫 功能的影响[ J ] . 中国生化 药物杂志, 2005, 26( 2 ) : 70-
二氧化碳培养箱( T hermo 公司 ) , 倒置显微镜( 上海光学 仪 器厂, 37XB) , 低温 高速 离心机 ( Hit achi CR21) , 光学 显微 镜( 上海光学仪器六厂) 。 1. 3 试验动物
BA L B/ c 健康 小鼠, 体重 18～22g , 哈 尔滨医科大 学实验 动物中心提供。成年公鸡: 市场采购。 1. 4 小鼠腹腔巨噬细胞体外分离培养
72 [ 4] 尹美珍, 李世普, 袁 琳, 等. 小鼠腹腔巨 噬细胞的分离 培养与鉴定
[ J ] . 武汉大学学报( 医学版) , 2006, 27( 2) : 203- 205 [ 5] 张均田. 现代药理实验方法[ M ] . 北 京: 北京医科大学中国协和医
科大学联合出版社, 1998, 729- 740 [ 6] 高鹏, 石 磊, 张润玲. 小鼠腹腔 巨噬细 胞的提 取与鉴 别方法 探讨
断标准的325 例( 男 186 例、女139 例) 胆源性胰腺炎患者为研 0. 871A 3 + 1. 21A 4 + 2. 05A 5 + 2. 97A 6) ] 。式中 Px 为胆源
究对象。按 1: 1 配比, 选择性别、年龄、居住地 、受教育程度匹 性胰腺炎的发生概率。
配的正常人为对照组, 通过条件 L og istic 回归多因素分析, 筛
图 2 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞形态( ×400, ×1000)
3 讨论
本实验采用 0. 5% 淀粉生理盐水刺激小鼠 腹腔产生了大 量 的巨噬 细胞, 其形态 特征典 型, 活 力高。巨噬 细胞在 培养 0. 5h 左右就 已经贴壁 , 随 着培养 时间延长, 星 状细胞 的数量 逐渐增多, 出现单层星 状和椭圆形贴壁细胞 , 紧密度高, 铺展 良好, 细胞纯度高, 与文献报道一致[ 6] 。巨噬细胞吞噬鸡红细 胞实验常用于免 疫增强药物活性的 评价, 本实 验获得小鼠腹 腔巨噬细胞吞噬 鸡红细胞的吞噬百 分率和吞噬指数, 与其他 文献的报道基本 一致, 建立 了一种简易而经济 的小鼠腹腔巨 噬细胞提取方法 , 为巨噬细 胞相关研究提供了 切实可行的实 验手段。
表 1 胆源性胰 腺炎危险因素 L og istic 多因素回 归分析结果
因素
偏回归系数
标准误
W al d
P值
OR 值
OR95. 0% 可信限
下限
上限
A1
- 0. 851
0. 1981
14. 785
0. 001
0. 365
0. 256
0. 571
A2
0. 799
0.பைடு நூலகம்220
13. 542
0. 0002
1
53
102
26. 5
0. 26
2
46
104
23
0. 26
3
59
123
29. 5
0. 31
4
51
107
25. 5
0. 27
5
56
108
28
0. 27
6
48
114
24
0. 29
小鼠腹腔巨 噬细胞和红细胞形 态轮廓清晰, 巨噬细胞吞 噬红 细胞数 从一个到 多个不 等, 大部分红 细胞被 吞噬, 少部 分红 细胞粘 附在巨噬 细胞外 围, 未被吞噬 或将要 被吞噬, 见 图 2。
选取 18～22g BAL B/ c 小鼠, 实验前小鼠腹腔注射 0. 5% 淀粉生理盐 水 0. 5mL , 2d 后颈 椎脱臼处死小 鼠, 浸 入 75% 的 酒精中 1min, 取出沥干, 小鼠腹腔注射 D- Hank's 液 5mL , 反
复抽吸 数次, 吸出腹腔液, T r is- N H4Cl 溶液 溶血, 收 集腹腔 悬液, 2000r / m in 离心 5min, 洗涤细 胞, 台 酚蓝排斥法 检测活 细胞率及细胞计数, R PM I - 1640 调细胞浓度5×105/ mL 。将
摘要: 目的: 研究胆源性胰腺炎的危险因素, 以更好预防和治疗。方法: 采取病例对照 研究方法, 通过条件 L og istic 回归多
因素分析我院普外科和消化科收治的325 例胆源性胰腺炎患者。结果: 文化程度、饮酒、血脂等6 种因素系胆源性胰腺炎的危险
因素, 需引起我们高度重视。
关键词: 胆源性胰腺炎; 条件 L o gist ic 回归多因素分析
[ J] . 中国医学检验杂志, 2004, 5( 5) : 400- 402 ( 收稿日期: 2007- 09- 07)
作者简介: 张华( 1979～) 男, 湖北荆州人, 硕士, 主要研究方向为生物制药。
( 下转第 10 页)
· 1 0· 黑龙江医药科学 2007 年 10 月第 30 卷第 5 期
域; !民族; ∀ 结缔组织病; #收入; ∃ 胃肠息肉。
3 讨论
本研究提示 的危险因素中饮酒 频繁、血脂高 的致病机制
在《内科学》及《外科 学》中已 经有深 刻的 阐述, 但是, 关 于文 化程度、植物神经功能紊 乱以及家族史尚无 细致研究。笔者
中图分类号: R576 文献 标识码: B 文章编号: 1008- 0104( 2007) 05- 0010- 01
急性胰腺炎 是多种 病因导 致胰酶 在胰腺 内被激活 后引 选出疾病的危险因素, 并据此建立患病危险因素模型[ 3] 。
起胰腺组 织自身消化、水肿、出血 甚至坏死的 炎症反应。[1] 急 性 胰 腺炎 有 多种 致 病危 险 因 素, 国内 以 胆 道疾 病 为 主, 占 50% 以上, 称胆源性胰腺炎 。[2] 胆石 症、胆 道感染或胆 道蛔虫 等均可以引起急性胰腺炎, 其中, 胆石症最为常见 。为了更好 地研 究胆源性 胰腺炎 的预防、治疗 以及维 持提供 科学依 据, 我们进行了该病危险因素的研究。
胆源性胰腺炎危险因素的病例对照研究
黄 朔1, 李明振1, 金 琦2 , 刘秀哲3 , 胡明明4
( 1. 佳木斯大学附属第一医院普外三科, 黑龙江 佳木斯 154002; 2. 佳木斯大学附属第一医院消化二科, 黑龙江 佳木斯 154002; 3. 佳木斯大 学 2006 级临床医学院研究生, 黑龙江 佳木斯 154002; 4. 佳木斯大学 2007 级临床医学本科生, 黑龙江 佳木斯 154002)
2. 2 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能测定
小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能测定结 果见表 1。平均吞噬 百分率是 26% , 吞噬指数是 0. 28。
图 1 倒置显微镜下小鼠腹腔巨噬细胞形态( ×100) 表 1 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能测定结果
组别 吞噬巨噬细胞数 被吞噬鸡红细胞 吞噬率( % ) 吞噬指数
研究对象, 建立巨噬细胞体 外分离培养和吞噬功 能的测定方 法。
1 材料与方法
1. 1 主要试剂
RP M I- 1640 培养( Sig ma) , 小 牛血清 ( 上 海普龙 ) , 台酚 蓝色素 ( 天 津化 学 试剂 一 厂) , Giemsa 色 素 ( 成都 化 学试 剂 厂) 。 1. 2 主要仪器
摘要: 目的: 建立小鼠腹腔巨噬细胞体外分离 培养的方法, 并测定其体内吞噬功能。方法: 0. 5% 淀粉生理盐水诱导小鼠腹 腔产生巨噬细胞, 体外分离培养并观察细胞形态; 体内吞噬5% 鸡红细胞悬液, 测定细胞吞噬百分数和吞噬指数。结果: 小鼠腹 腔巨噬细胞活率> 95% , 形态典型, 形成 良好细胞单层; 平均吞噬百分率和吞噬指数分别为26% 和0. 28。结 论: 本方法可用于小 鼠腹腔巨噬细胞培养研究。
A6
3. 002
0. 594
17. 247
本研究结 果显示, 胆 源性胰腺 炎的危 险因素 有: 文化
程度低; 饮酒频繁; 每日食用肉制 品超过 100g ; !血脂高
( 随机检查 空腹血脂 高于正常) ; ∀ 植物神经功 能紊乱 超过 1
年; #家 族史。与下 列因素 无关: 体育 锻炼; 职 业; 地
HEIL O N GJIA N G M EDI CI NE A N D PHA RM ACY Oct . 2007, V ol. 30 N o . 5 · 9·
小鼠腹腔巨噬细胞的分离培养与吞噬功能测定
张 华, 曲震寰, 王 莹, 阮洪生, 葛文中, 秦学功
( 黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院, 黑龙江 大庆 163319)