放线菌的抑菌试验

实验一放线菌的抑菌试验

一、实验目的

1、学习掌握放线菌所产抗生素抗菌谱的测定方法

2、掌握牛津杯法检测抗生素的原理及基本操作

3、掌握微生物实验的基本生物技术，无菌操作技术，培养基无

菌化处理（高温灭菌）、菌种纯化分离技术及纯种培养技术

等。

4、熟悉掌握高压蒸汽灭菌锅、超净工作台、离心机等器材的使

用方法。

5、熟悉各种合成培养基的制备方法，熟练掌握涂平板、在培养

基接种等基本操作步骤。

二、实验原理

放线菌是重要的抗生素产生菌，放线菌所产生得抗生素，能抑制多种细菌的生长，故可用金黄色葡萄球菌（G+）和大

肠杆菌（G-）作指示菌鉴别放线菌，采用牛津杯法检测其所产

抗生素的抑菌活性大小。

三、实验材料及用具

1、菌种：A 放线菌，实验室老师给提供菌种

B指示菌，金黄色葡萄球菌、大肠杆菌

2、用具：试管，平皿，涂棒，牛津杯，玻璃棒，高压蒸汽锅，

恒温摇床，恒温培养箱，镊子，移液器，超净工作台

四、培养基

1、高氏一号培养基：K2HPO4﹒3H2O 0.5g，可溶性淀粉

20g，KNO4 1g, MgSO4﹒7H2O 0.5g，FeSO4﹒7H2O 0.1g，

NaCl 0.5g，H2O 1000ml。

2、种子培养基：葡萄糖5g，淀粉1.5g，酵母粉2.5g，CaC l2

0.1g，KNO3 1g，K2HPO4 0.5g，MgSO4﹒7H2O 0.5g，NaCl

0.5g，FeSO4﹒7H2O 0.01g，H2O 1000ml，pH 7.2-7.4

3、发酵培养基：黄豆饼粉 10.0g，淀粉30g，葡萄糖 50g，

酵母粉5g，玉米浆 15g，CaCl2 3.0g，H2O 1000ml，pH 7.0

4、LB培养基（液体）：蛋白胨10g，酵母粉5g，NaCl 10g，

H2O 1000ml，pH 7.0

5、LB培养基（固体）：蛋白胨10g，酵母粉5g，NaCl 10g，

琼脂 16g，H2O 1000ml，pH 7.0

五、实验步骤

1、配制培养基：按培养基配方比例依次精确地称取各种药品

放入烧杯中，在上述烧杯中先加入少于所需要的水量，用玻

棒搅匀。加足所需的水，调节pH值，将配制好的培养基分

装在锥形瓶和试管中，对锥形瓶及试管封口并放入高压蒸汽灭菌锅进行灭菌。

2、菌种的活化：把放线菌接种到种子培养基，37℃培养2天，

同时把金黄色葡萄球菌和大肠杆菌分别接到LB液体培养基置于37℃培养

3、发酵：将活化的放线菌接种到发酵培养基上，37℃培养3

天

4、抑菌试验：将发酵液离心，得上清。同时，将配置好的LB

固体培养基倒入平皿，待凝固后分别加入150μl金黄色葡萄球菌菌悬液和大肠杆菌菌悬液，用涂棒涂布均匀。用灭过菌的镊子夹取灭过菌的牛津杯放到涂好的平板上，根据画好的区域，每个区域放一个。用移液器往牛津杯中加满离过心放线菌的发酵液，如图一所示。37℃培养24小时。观察实验结果。