菌种保藏的原理和方法
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针穿刺→培养→盖2-3mm无菌液体石蜡 →冰箱保藏 范围：细菌、放线菌、丝状真菌 优点：范围较广，简便实用 缺点：不适用能利用石蜡为碳源的微生物；不同种类，
保藏期差异较大。
二、沙土管干燥保藏法
范围：产孢子的放线菌和丝状真菌，形成芽孢
的细菌。
方法：沙、土分别洗净→烘干、过筛（80-100目）→
1-2 ︰ 1沙土混合、装管1cm→121℃灭菌2-3 次→无 菌检验→烘干备用→孢子或悬液与沙土混匀→真空抽 干→封口（熔封、石蜡封）→干燥器中于冰箱5℃保藏
本章知识结构
斜面保藏法和穿刺保藏法 ★斜面保藏法 穿刺保藏法
★沙土管干燥保藏法 真空冷冻干燥保藏法 液氮保藏法 悬液保藏法 低温保藏法
预习内容ห้องสมุดไป่ตู้微生物的代谢调节
酶活性调节机制； 诱导酶和组成酶； 酶合成调节的机制。
特点：设备简单，方法较繁，效果较好（长，2
年，有长达10年），但范围受限制。
三、真空冷冻干燥保藏法
方法： 1.安瓶管处理：8-10×100-150mm，浸洗、烘干、
盖口；灭菌、干燥（60℃）。
2.保护剂：减少冷冻干燥对微生物的损伤，常用脱脂
牛奶、血清（适当方法灭菌）。
3.菌悬液制备：斜面→加保护剂→ 制悬液→吸入安管 4.冷冻干燥：快冷至-15- -30℃ ，抽真空到66.661Pa，15
特点：
效果好（2-3年，长达9年），方法简单， 保藏对象广泛。
五、菌种复壮
原理与方法
单细胞分离复壮 改变培养条件复壮
六、种子扩大培养
种子(Seed)扩大培养：
将保藏的生产菌种从斜面试管(Tube slant) 接出后，进行摇床(Shaker)培养及种子罐 (Seeding tank)逐级培养以获得一定数量和质 量的纯种的过程，纯种培养物称作种子。
分钟内；达13.3322Pa，可升温至20-30℃ ；真空封口。
5.安瓶管保藏： 4-5 ℃ ，5-10年。（样品含水量1-3％）
四、液氮保藏法
方法： ①浓菌悬液→加保护剂→装安管0.2-1cm →封口
②降温（1℃/min）至-25 ℃，入液氮罐，-150 — -196 ℃保藏。
③取出时，应于温水（38-40 ℃ ）中震荡1-2min。
第四章 菌种保藏的原理和方法
提纲
菌种保藏的目的和意义 菌种保藏的原理和方法
斜面保藏法和穿刺保藏法 沙土管干燥保藏法 真空冷冻干燥保藏法 液氮保藏法 菌种复壮 种子扩大培养
菌种保藏的目的和意义
目的意义：保持优良菌种优良性状的稳 定，满足生产的实际需要。
优良菌种丢失（退化）的原因： 世代短、易变异、易污染、死亡。
1.斜面保藏法：（短期，3-6个月） 范围：细菌、放线菌、酵母、丝状真菌 方法：适宜培养基→适温培养→冰箱保藏
（4-5℃）→到期转种 优点：设备、方法简单 缺点：转代多，易变异；污染机会多
一、斜面保藏法和穿刺保藏法
2.穿刺保藏法：（好气菌，6-12个月） 方法：小试管或螺口管→1﹪琼脂培养基→接种
菌种保藏方法
斜面(Slant)低温保藏法
传代培养，六个月
砂土管保藏法
适用范围广，两年
冷冻干燥(Freez-drying)保藏法 长达十年
液氮超低温保藏法（—130°C） (Liquid nitrogen ultra-low temperature storage)
一、斜面保藏法和穿刺保藏法
六、种子扩大培养
种子扩大培养的级数
二【三】级发酵： 斜面菌种->一级种子摇床培养->二级种子罐培 养【->三级种子罐培养】->发酵罐生产
影响级数的因素
微生物自身的生长特性 发酵罐的生产规模
六、种子扩大培养
影响种子质量的主要因素
培养基(Culture media)中的成分配比 种龄(Cell age)与接种量(Inoculation concentration) 温度 pH值 通气(Ventilation)和搅拌(Stirring) 泡沫(Foam) 染菌(Infection)
菌种保藏机构：世界现有700多家专门机构。 措施：创造条件，使微生物处于休眠状
态，减少变异。
低营养、低温、干燥、缺氧→低代谢、低生长
菌种保藏的原理和方法
菌种保藏(Culture conservation)原理
挑选优良的菌种，最好是休眠体
创造有利于种子休眠的环境（低温、干燥、缺氧、避光、 缺少营养）
保藏期差异较大。
二、沙土管干燥保藏法
范围：产孢子的放线菌和丝状真菌，形成芽孢
的细菌。
方法：沙、土分别洗净→烘干、过筛（80-100目）→
1-2 ︰ 1沙土混合、装管1cm→121℃灭菌2-3 次→无 菌检验→烘干备用→孢子或悬液与沙土混匀→真空抽 干→封口（熔封、石蜡封）→干燥器中于冰箱5℃保藏
本章知识结构
斜面保藏法和穿刺保藏法 ★斜面保藏法 穿刺保藏法
★沙土管干燥保藏法 真空冷冻干燥保藏法 液氮保藏法 悬液保藏法 低温保藏法
预习内容ห้องสมุดไป่ตู้微生物的代谢调节
酶活性调节机制； 诱导酶和组成酶； 酶合成调节的机制。
特点：设备简单，方法较繁，效果较好（长，2
年，有长达10年），但范围受限制。
三、真空冷冻干燥保藏法
方法： 1.安瓶管处理：8-10×100-150mm，浸洗、烘干、
盖口；灭菌、干燥（60℃）。
2.保护剂：减少冷冻干燥对微生物的损伤，常用脱脂
牛奶、血清（适当方法灭菌）。
3.菌悬液制备：斜面→加保护剂→ 制悬液→吸入安管 4.冷冻干燥：快冷至-15- -30℃ ，抽真空到66.661Pa，15
特点：
效果好（2-3年，长达9年），方法简单， 保藏对象广泛。
五、菌种复壮
原理与方法
单细胞分离复壮 改变培养条件复壮
六、种子扩大培养
种子(Seed)扩大培养：
将保藏的生产菌种从斜面试管(Tube slant) 接出后，进行摇床(Shaker)培养及种子罐 (Seeding tank)逐级培养以获得一定数量和质 量的纯种的过程，纯种培养物称作种子。
分钟内；达13.3322Pa，可升温至20-30℃ ；真空封口。
5.安瓶管保藏： 4-5 ℃ ，5-10年。（样品含水量1-3％）
四、液氮保藏法
方法： ①浓菌悬液→加保护剂→装安管0.2-1cm →封口
②降温（1℃/min）至-25 ℃，入液氮罐，-150 — -196 ℃保藏。
③取出时，应于温水（38-40 ℃ ）中震荡1-2min。
第四章 菌种保藏的原理和方法
提纲
菌种保藏的目的和意义 菌种保藏的原理和方法
斜面保藏法和穿刺保藏法 沙土管干燥保藏法 真空冷冻干燥保藏法 液氮保藏法 菌种复壮 种子扩大培养
菌种保藏的目的和意义
目的意义：保持优良菌种优良性状的稳 定，满足生产的实际需要。
优良菌种丢失（退化）的原因： 世代短、易变异、易污染、死亡。
1.斜面保藏法：（短期，3-6个月） 范围：细菌、放线菌、酵母、丝状真菌 方法：适宜培养基→适温培养→冰箱保藏
（4-5℃）→到期转种 优点：设备、方法简单 缺点：转代多，易变异；污染机会多
一、斜面保藏法和穿刺保藏法
2.穿刺保藏法：（好气菌，6-12个月） 方法：小试管或螺口管→1﹪琼脂培养基→接种
菌种保藏方法
斜面(Slant)低温保藏法
传代培养，六个月
砂土管保藏法
适用范围广，两年
冷冻干燥(Freez-drying)保藏法 长达十年
液氮超低温保藏法（—130°C） (Liquid nitrogen ultra-low temperature storage)
一、斜面保藏法和穿刺保藏法
六、种子扩大培养
种子扩大培养的级数
二【三】级发酵： 斜面菌种->一级种子摇床培养->二级种子罐培 养【->三级种子罐培养】->发酵罐生产
影响级数的因素
微生物自身的生长特性 发酵罐的生产规模
六、种子扩大培养
影响种子质量的主要因素
培养基(Culture media)中的成分配比 种龄(Cell age)与接种量(Inoculation concentration) 温度 pH值 通气(Ventilation)和搅拌(Stirring) 泡沫(Foam) 染菌(Infection)
菌种保藏机构：世界现有700多家专门机构。 措施：创造条件，使微生物处于休眠状
态，减少变异。
低营养、低温、干燥、缺氧→低代谢、低生长
菌种保藏的原理和方法
菌种保藏(Culture conservation)原理
挑选优良的菌种，最好是休眠体
创造有利于种子休眠的环境（低温、干燥、缺氧、避光、 缺少营养）