ELISA方法学验证

112.79
111.48 117.39 118.28 120.52 129.34 93.9 88.38 102.46 98.56 102.528 15.88 116.092 3.82
5
6.467 4.695 4.419 5.123 4.928
5 按示例表列表并计算精密度 。
板内精密度
VEGFR2-Fc
（ng/ml） 1 2 测定值
X S
3 4 5
RSD(%)
20
21.765 17.789
20.301
22.613
20.692
20.632 ±1.83
11.609 ±0.38
8.87
10
11.279 11.148
11.739
11.828
12.052
3.27
5
6.467
4.695
4.419
5.123
4.928
5.126 ±0.79
15.41
板间精密度
VEGFR2 -Fc （ng/ml） 21.764 19.262 21.519 11.278 10.090 12.173 6.476 5.688 6.734 7.789 14.760 15.630 11.148 9.928 11.869 4.695 4.063 4.786 测定值
X S X S
22.612 19.643 22.160 11.828 10.479 12.455 5.123 4.463 5.324 20.692 18.144 20.439 12.052 10.709 12.584 4.928 4.273 5.135 19.302 ±2.39
RSD(%)
20
20.301 16.955 17.862 11.739 10.459 12.558 4.417 3.788 4.493
3 标准曲线制作及结果计算 酶标板放入酶标仪，盖上盖子； 在电脑上打开Microplate Manager 5.2软件 选择450nm波长（参照波长630nm），设置 LAYOUT和报告模式，测定各孔吸收值；

输入标准品各浓度值，以双对数法制备标 准曲线，获取各孔的浓度值，打印标准曲 线图和计算结果。
2.5 2
y = 0.4204Ln(x) + 0.09 2 R = 0.999
Absorbance(OD)
1.5 1 0.5 0 1 10 Conc(ng/ml)
ELISA法标准曲线示意图
100
1000
4 准确度（回收率）计算 按示例表1样式列表并计算回收率。
VEGFR2-Fc (ng/ml) 20
试验方法
1 标准曲线各浓度的配制 用PBS缓冲液将标准品配制成8、4、2、1、 0.5、0.25、0.125、0.0625ng/ml。
2 测定方法
① 设计标准品、质控品及空白分配方案； ② 取出试剂盒中已包被酶标板，取出板条，按 需要重新配制； ③ 在相应孔中加入系列标准品、质控品及空白 对照，每孔50ul； ④ 37℃温育30min，洗板4次； ⑤ 加入酶标抗体，生物素二抗，50 ul/孔； ⑥ 37℃温育30min，洗板4次； ⑦ 加入A、B液,50 ul/孔，37℃温育15分钟。 ⑧ 加入终止液，50 ul/孔。
3 溶液配制 0.01M pH7.4的PBS缓冲液： 称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和 0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中，用HCl 调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容 至1L即可。 质控品： 用PBS缓冲液将标准品配制成6、3、 1.5ng/ml三个质控品，每质控品1ml。
试验材料
1 试剂盒 乙肝表面抗原ELISA法定量分析试剂盒，福州蓝 图生物工程有限公司出品。 2 仪器及酶标板 酶标仪：Bio-Rad 680 ； 洗板机：Bio-Rad 1575； 超纯水系统：Millipore Elix ； 电热恒温培养箱(DNP-9052):上海精宏实验设备有 限公司。
12.38
10
11.423 ±0.91
7.97
5Βιβλιοθήκη Baidu
4.959± 16.737 0.83
6 检测限（LOD）计算： 取空白孔的OD值的均数加2倍标准差。
注意事项

标准品和质控品配制要准确。
实验各个环节都很重要，每步操作都要认 真。
讨论
1.实验背景介绍（目的、采用的方法、检测原 理、方法学验证的基本知识介绍） 2.本实验的设计及实施特点 3.实验结果分析 4.临床应用及分析
乙肝表面抗原的ELISA法 定量分析方法学验证
课程要求
掌握： ①乙肝表面抗原的ELISA法定量检测方法； ②ELISA法方法学评价的方法。 熟悉： ①定量检测的酶标仪操作要领； ②各种缓冲液的配制。 了解： ELISA检测中的影响因素和注意事项。
试验目的

进行乙肝表面抗原ELISA法定量分析的方 法学验证。
测定值(ng/ml) 21.765 17.789 20.301 22.612 20.692
回收率(%) 108.825 88.945 101.505 113.06 103.46
平均回收率 RR(%)
SD(%)
103.159
9.15
10
11.279
11.148 11.739 11.828 12.052
本实验报告要求


按科研论文格式 有摘要和关键词 字数不限 以WORD形式打印，元月18日前集体上交。