治疗性抗体
01-治疗性抗体研发的进展和关键技术
01-治疗性抗体研发的进展和关键技术治疗性抗体是一种通过靶向特定分子或细胞表面分子来治疗疾病的生物药物。
近年来，随着生物技术和基因工程技术的进步，治疗性抗体研发取得了显著的进展。
本文将介绍治疗性抗体研发的进展和关键技术。
一、治疗性抗体研发的进展治疗性抗体研发的进展主要体现在以下几个方面。
1.抗体工程技术的发展抗体工程技术是治疗性抗体研发的核心技术，它包括人源化抗体、重链抗体、单链抗体等多种技术。
人源化抗体通过将小鼠抗体人源化，使其更适合在人体内使用。
重链抗体通过只表达重链而不表达轻链来减小分子的体积，提高肿瘤渗透性。
单链抗体则通过将两个链的抗原结合位点连接成一个链来提高抗体药物的渗透性和稳定性。
2.靶向治疗策略的发展单一抗体治疗已经不能满足临床需求，因此，针对不同靶点同时应用多种治疗性抗体的组合治疗策略逐渐被采用。
此外，还出现了针对癌症干细胞、免疫抑制分子等新靶点的治疗性抗体。
3.抗体药物研发的快速发展抗体药物的研发速度逐渐提高，成功开发出多种治疗性抗体，如临床上已经应用的西妥昔单抗、曲妥珠单抗等。
此外，抗体药物的研发不仅局限于单一的治疗领域，还涉及到多种疾病的治疗。
二、治疗性抗体研发的关键技术治疗性抗体研发的关键技术是保证其临床应用效果的重要因素。
1.高通量筛选技术高通量筛选技术是寻找高活性和高亲和力的抗体的关键技术。
通过结合自动化设备和大规模结果分析，可以快速筛选出具有良好生物学活性和亲和力的抗体药物候选物。
2.重组蛋白质表达技术重组蛋白质表达技术是治疗性抗体研发的核心技术之一、通过重组DNA技术可以在大规模中表达抗体的重链和轻链，从而获得一定量的治疗性抗体。
3.稳定性改进技术抗体药物的稳定性是影响其临床应用效果的关键因素之一、因此，开发稳定性改进技术是治疗性抗体研发中的关键问题。
目前，已经出现了多种稳定性改进技术，如PEG化、Fc片段工程等。
4.靶向破坏靶标技术靶向破坏靶标技术是治疗性抗体研发的重要技术之一、通过研发针对不同分子靶标的治疗性抗体，可以实现对特定细胞或分子的靶向杀灭，从而达到治疗的目的。
抗体的基本结构和功能
抗体的基本结构和功能介绍抗体（又称免疫球蛋白）是一种由免疫细胞产生的蛋白质，广泛存在于人体的血液和组织液中。
抗体在人体的免疫系统中起着至关重要的作用，能够识别和中和病原体、调节免疫反应、参与细胞间信号传导等。
本文将详细介绍抗体的基本结构和功能，以便更好地理解免疫过程和临床应用。
一、抗体的结构1.1 Fab和Fc区域抗体由两个相同的轻链（light chain）和两个相同的重链（heavy chain）组成。
每条轻链和重链都由一系列氨基酸残基连接而成，形成抗体的基本结构。
在抗体分子中，Fab（antigen binding fragment）区域负责与抗原结合，Fc（fragment crystallizable）区域则负责与免疫细胞相互作用。
1.2 IGH和IGL基因抗体的结构由基因编码决定，人体中有数百个IGH（immunoglobulin heavy chain）和IGL（immunoglobulin light chain）基因，它们通过基因重排和突变形成多样的抗体。
IGH基因编码重链的变量（V）区域、多样（D）区域、连接（J）区域和常规（C）区域，而IGL基因编码轻链的V区域和C区域。
1.3 亲和力成熟抗体的变量区域包含了可以识别和结合抗原的亲和力决定区（CDR, complementarity-determining region）序列，这些序列的组合能够使抗体与多种抗原结合并启动免疫反应。
亲和力的形成是通过基因突变和选择过程中的变异和筛选完成的，亲和力成熟是个体免疫系统应对病原体进化的重要机制。
二、抗体的功能2.1 识别和中和病原体抗体通过其变量区域与抗原结合，从而识别和中和潜在的致病病原体。
当抗体与抗原结合时，可以阻止病原体侵入宿主细胞、中和细菌毒素、聚集病毒颗粒等。
这一过程对于防御感染和预防疾病的发生起着重要作用。
2.2 调节免疫反应抗体不仅能够识别和中和病原体，还能够调节免疫反应的进程。
抗体疗法的治疗与应用
抗体疗法的治疗与应用抗体疗法是一种针对特定疾病的治疗方法，是通过注射或静脉输液等方式给患者提供特定抗体，以帮助患者克服疾病。
随着科技的不断进步，抗体疗法在临床中得到了广泛的应用。
一、抗体疗法的原理抗体疗法的原理就是通过提供特定的抗体来帮助患者对抗疾病。
抗体是一种具有高度特异性的蛋白质，它能够识别并结合到病人体内的外来物质，从而有特异性地清除这些病原体。
二、抗体疗法的种类抗体疗法分为单克隆抗体和多克隆抗体两种。
单克隆抗体是指针对一种特定的病原体制备的抗体。
单克隆抗体可以将病原体识别得更准确，对治疗某些疾病具有重要的作用。
多克隆抗体由多种抗体组成，它可以用于识别不同的抗原，对某些疾病的治疗也具有重要的作用。
三、抗体疗法的应用抗体疗法在临床治疗中得到了广泛的应用。
以下是抗体疗法主要应用的几个方面：1、癌症治疗。
抗体疗法在癌症治疗中具有重要作用。
依据癌细胞的表面特征，可以制备出对癌细胞特异性的抗体，通过把这些抗体注射到人体内，可保持相对高水平的药物浓度，从而杀死癌细胞。
2、感染性疾病治疗。
抗体疗法可以在感染疾病的早期接种时，促使机体产生所需的抗体，从而控制疾病的发展。
3、自身免疫疾病治疗。
自身免疫疾病是由机体自身免疫系统异常引起的疾病，抗体疗法在这种情况下可以使用对机体的免疫系统进行调节的抗体来治疗。
4、器官移植。
抗体疗法可以用于器官移植患者，通过给予抗体来预防或减轻移植物排斥反应。
四、抗体疗法的优点相对于传统的治疗方法，抗体疗法具有以下优点：1、专一性。
抗体疗法可以专门针对某些抗原，达到局部治疗的效果。
2、安全性。
抗体疗法的安全性较高，相对于药物治疗来说，抗体疗法的副作用要小得多。
3、长效性。
抗体疗法常常可以提供长效的治疗效果，减少患者再次发病的概率。
五、抗体疗法的局限性虽然抗体疗法在临床治疗中表现出许多优点，但是它也有局限性。
以下是几个常见的局限：1、生产成本较高。
抗体疗法的生产成本较高，这可能会限制它的应用范围。
CD20抗原及治疗性抗CD20抗体
CD20抗原及治疗性抗CD20抗体!肿瘤生物治疗杂志2oo5Mar;12(1):76～79ChinJCancerBiother'[文章编号]1007—385X(2005)01-0076-04CD20抗原及治疗性抗CD20抗体王玉刚综述;沈倍奋审阅(军事医学科学院基础医学研究所分子免疫室,北京100850)[摘要]CD20是人类B淋巴细胞表面特有的标识.它高表达于所有正常B细胞和多数恶性B细胞表面,不会发生明显的内化和脱落,是治疗非霍奇金淋巴瘤(non.Hodgkin~lymphoma,NHL)理想的靶抗原.其胞外区由43个氨基酸残基组成,但组成的抗原表位却异常多样.目前,已经有多种针对CD20抗原的抗体被FDA批准上市,用于B细胞非霍奇金淋巴瘤的治疗,都显示出良好的效果.[关键词]CD20;抗原表位;抗CD20单克隆抗体[中图分类号]R392.11[文献标识码]A1免疫治疗理想的靶抗原:CD202抗CD20单克隆抗体识别的抗原表位在治疗B细胞淋巴瘤时,CD20分子是理想的靶抗原.它由297个氨基酸组成,分子量为33kD,34～36kD属于非糖基化磷蛋白"】,表达于95%以上正常或恶化的B细胞表面.它起始表达于pre—B细胞阶段,到B细胞终端分化成浆细胞时结束,一直被认为是B系细胞表面特有的标识.单核细胞,静息以及激活的T细胞,裸细胞以及非淋巴细胞都不表达CD20分子.CD20分子有4个跨膜区,氨基端和羧基端都位于细胞质膜内侧,在第三跨膜区和第四跨膜区之间,有一个由43个氨基酸残基组成的环区,构成其主要的抗原表位.CD20抗原分子比较暴露,易于接近.CD20与抗CD20抗体结合后内化现象不明显,因此细胞表面CD20分子数量并不因为与抗体结合而大量减少. CD20也不会发生明显细胞表面脱落的现象,在人体血清中无游离的CD20存在.虽然CD20的功能仍没有完全阐述清楚,但越来越多的证据表明它具有钙离子通道功能,是调节B细胞增殖,分化信号途径的组分.CD20位于细胞膜上的脂斑区(1ipidrafts).脂斑区是细胞膜上一个流动而有序的细胞膜微区,富含鞘磷脂和胆固醇,被认为是一个信号传导的平台.CD20与脂斑区Src家族的激酶成员(Lyn,Fyn和Lek)以及PAG(p75/85)相连,PAG将Csk招集到脂斑区,从而使Lyn,Fyn和Lck保持失活状态.当CD20在抗体的作用下相互靠近,发生交联甚至超交联时形成的多聚体发挥钙离子通道的功能,使细胞外钙离子流入细胞内;另外,src家族的酪氨酸蛋白激酶由于靠近而相互激活,启动信号传导途径,动员内源钙库.这两者导致细胞内钙离子浓度的升高,从而对细胞周期的~--仃A--厂,土影~响,调节细胞增殖与分化,甚至导致细胞凋亡的发生剖.早期实验结果表明,CD20细胞外43个氨基酸残基序列组成了2个相互重叠的细胞外抗原表位,一个被绝大多数抗CD20抗体所识别,另一个被具有独特激活效应的抗体1F5所识别.但是后来Polyak等发现,虽然CD20胞外区很小,但是抗CD20抗体识别的精细抗原表位却异常多样,而不是简单的分为两个抗原表位.人源CD20胞外区与鼠源CD20胞外区43个氨基酸残基中约有16氨基酸不同.他们以鼠源CD20胞外区为模板,分别将其与人源CD20胞外区序列中不同的氨基酸突变成人源CD20序列中相应的氨基酸,证实了不同抗CD20抗体所识别的抗原表位具有细微区别(表1中B～I模式).并证实了170位Ala和172位Pro在CD20胞外区抗原表位二级结构的维持上起着关键性作用,它们的改变常会导致抗体识别的抗原表位完全丧失(表1中A模式).其结果如表1所示.CD20胞外区小环不能够使之具有如此之多细微抗原表位的差异.实验结果表明CD20可以复合体的形式存在,一个CD20复合体由几个CD20分子和一个或一些附加成分组成.有些抗体识别的是由几个CD20分子构成的空间表位,如2H7识别的抗原表位比B1识别的抗原表位更加依赖于CD20多聚体的存在.1F5,B1和2H7都不能够通过免疫印迹的方式与CD20抗原结合,表明这些抗体识别的抗原表位是一个空间表位.3治疗性抗CD20抗体近年来,NHL发病率逐渐攀升,严重危害着人类健康.以前的治疗方法无法治愈,患者最终因淋巴瘸的复发而死亡.研究新型药物用于NHL的治疗成为一种必然趋势.抗CD20单克隆抗体是一个新的有效抑制肿瘤细胞增长中国肿瘤生物治疗杂志2oo5Max;12(1).77▲:引自文献[4];}:本列中A—I为不同的CD20模式;V本列中大写字母代表人源CD20序列,小写字母代表鼠源CD20序列,横杠代表鼠源CIY20氨基酸序列与人源CIY20氨基酸序列相同的部分;的所有列中反应强度从弱阳性(+/.)到强阳性(}H{);△:NT表明没有测试3.1Ⅱ)EC?C2B8IDEC—C2B8,又名Rituximab,商品名为美罗华,1997年由FDA批准上市.它是一个人鼠嵌合抗体,包含鼠源抗CD20单克隆抗体2B8(Ibritumomab)的可变区和人源IgG1重链及K链的恒定区,用于B细胞淋巴瘤的治疗.美罗华与其亲本抗体具有相似的亲和力和人组织反应活性,在人体内具有更长的半衰期,更小的免疫原性J,基本上不会诱发机体产生HAMA反应.由于人源Fc比鼠源Fc能更好与人源补体及效应细胞相互作用,美罗华补体介导的细胞溶解作用(CDC) 和抗体介导的细胞毒作用(ADCC)都得到了提高,从而提高了抗体的反应率,延长了反应时间.3.2ZEVAⅡN2002年2月,FDA批准了第一个放射性免疫治疗药物——zevalin.该药由IDEC制药公司生产,通用名Ibritu—momabTiuxetan.FDA批准此药用于治疗复发性或难治性低恶性度/滤泡性或转化的B细胞NHL,其中包括美罗华难治性的滤泡性NHL.该产品由小鼠IgG1一K单克隆抗体2B8 (Ibritumomab)连接同位素如Y用于肿瘤治疗.其单抗部分对CD20具有极高的特异亲和性J.Y是一个高能量的单纯释放p射线的放射性同位素(2.3MeV),约90%的能力集中在5mm以内,不仅可以杀伤与抗体接合的细胞,还可以杀伤直径范围12咖以内的恶性细胞.Y的半衰期(64h)与抗体在体内的生物半衰期一致,因此尿液中Y的很少,可以忽略不计7j.Zevalin在肿瘤部位的分布相当于在正常器官分布的850倍;正常细胞不受射线危害,对正常器官的放射性在可接受安全值之下J.不需要对病人和医务人员进行保护性隔离J.Zevalin与其天然抗体具有相似的高的抗原特异性,人组织反应性,潜伏期安全性,在体外,体内的稳定性良好.3.3BEXXAR2003年6月27日,FDA批准Bexxar(Tositumomab和I Tositumomab)用于治疗癌细胞已经或未发生转移,对美罗华有耐药性,化疗后又复发的CD20,滤泡性NHL.它由鼠源单克隆抗体——抗Bl单克隆抗体(Tositumomab,IgG2a一)与放射性同位素"I共价偶联而成."I同时释放治疗性的B射线和高穿透性的^,射线:低能量的p射线(0.6MeV)可以杀伤直径2mm以内的恶性细胞,^,射线用于精确剂量测定和生物分布研究.根据剂量测定结果可以确定针对个体的抗体用量,最大限度减少血液系统的毒性.Bexxar是第一个根据患者个体不同来确定用药剂量的抗体制剂.由于".I-tosi. tumomab和"I在体内的清除速率存在个体差异,在对病人用药之前确定个体用药量是必要的.接受Bexxar治疗的患者需要在实施放射性保护的房间内进行治疗7.1o].在对复发低恶性度转移的NHL患者的治疗中,Bexxar比其冷抗体形式(anti—B1mAb)有更高的反应率,更长的反应持续时间. 目前上市的这三种抗体都可以通过CDC,ADCC,诱导中国肿瘤生物治疗杂志2005Mar;12(1)CD20细胞发生凋亡或直接抑制恶性B细胞的增殖来发挥其治疗效果.不同的是Zevalin和Bexxar通过抗体介导放射性同位素到肿瘤部分,发挥放射性细胞毒直接杀伤肿瘤细胞,克服了放疗不能全身给药的缺点;与单纯免疫治疗相比, 表现出更强杀伤邻近肿瘤细胞的能力.多中心临床试验结果表明:目前上市的这三种抗体单独使用都获得了很好疗效.其中美罗华与化疗药物CHOP(环磷酰胺,多柔比星,长春新碱,泼尼松)联合使用治疗低恶性度或滤泡性NHL,效果要好于单独使用的效果.Bexxar与化疗药物联合使用有协同的治疗效果.Zevalin和Bexxar 用来治疗对美罗华治疗有抗性的患者有良好效果'.4治疗NHL中存在问题对美罗华治疗有反应的B细胞NHL患者中,复发患者对使用美罗华再次治疗的反应率小于50%.患者抵抗使用美罗华二次治疗的原因可能是其经过治疗之后,造成了细胞表面CD20抗原的丢失,或者亚克隆选择了CD20.的B淋巴瘤细胞.不同研究团体都发现了靶细胞表面CD20抗原丧失表达的现象.由于许多在经过抗CD20抗体治疗后复发的患者没有经过生物活检以确定肿瘤细胞下调表达CD20抗原的程度,不能够确定这种现象实际发生的频率".鉴于CD20抗原表达的变动性,Haidar等指出:在使用美罗华治疗B细胞淋巴瘤之前确定CD20分子在恶性B淋巴细胞表面表达是必要的.5展望使用抗CD20抗体治疗NHL的费用高,部分患者还发生了HAMA和HACA的反应,如何使治疗方案更加完善,还需要进一步的探索.AME一133是在美罗华基础上应用分子进化的方法构建出的人源化抗CD20抗体.它的免疫原性更低,亲和力更高,介导ADCC的能力更强,临床应用前景更好.Da~es等人将鼠源糖基化酶基因转入到表达人鼠嵌合抗体的CHO细胞,表达出的糖基化抗体以10—20倍低的浓度就可达到与其亲本相同杀伤CD20靶细胞的效果.IMMU一106是一种改型抗体,进一步降低了鼠源性,可以通过ADCC,CDC和诱导凋亡机制来发挥其抑瘤效果.抗CD20.抗CD3双特异抗体,保持了亲本抗CD3单克隆抗体刺激PBL增殖的能力,并可以交联人的T淋巴细胞和肿瘤细胞,从而促进T淋巴细胞对瘤细胞的杀伤作用,第一次用实验结果支持双特异抗体具有用于治疗CD20的B淋巴瘤的潜能.抗CD20.抗CD89双特异抗体可以招集嗜中性粒细胞作为效应细胞去裂解CD20的肿瘤细胞.KunMa等发现:在体外,低剂量照射能够大大并稳定提高CD20抗原的表达.Huang和Roberts等则探索调动自身免疫系统的治疗方案.他们将CD20抗原与人源IgG的Fc或钥孔戚蓝蛋白相连,注入小鼠体内,诱导其产生针对自身抗原的反应"】.Hmsma等人进行了抗体定向的酶.前药治疗方案的探索.他们构建了ScFv和人B一葡萄糖苷酸酶的融合蛋白.该融合蛋白保留了其亲本抗体1H4的亲合力和结合特异性以及酶的催化活性.当融合蛋白与Daudi细胞结合后,前药显示了与其药物形式阿霉素相近的抑制肿瘤细胞增长的活性.上述这些探索都为以后治疗NHL提供了良好的思路.[参考文献][1]TedderTF,MclntyreG,SchlossmanSF.HeterogeneityintheB1(CD20)cellsulfacemoleculeexpressedbyhumanB—lymphocytes 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治疗性抗体的改造
医学分子生物学杂志,2006,3(4):245 249 JM ed M o lB io,l2006,3(4):245 249院士述评治疗性抗体的改造沈倍奋军事医学科学院基础医学研究所北京市,100850沈倍奋,中国工程院院士,军事医学科学院基础医学研究所研究员,博士生导师。
中国人民解放军分子免疫学重点实验室主任。
现任中华医学会副会长,中国发明家学会副理事长。
从事单克隆抗体和基因工程抗体的研究和应用多年,近年来与不同学科的专家合作致力于基于抗原-抗体相互作用的立体结构信息设计新功能分子的研究。
在国内外学术期刊上发表论文200余篇,主编专著4部。
【摘要】 市场上已有18个被FDA批准的单克隆抗体,它们用于治疗如肿瘤、移植排斥、自身免疫病、病毒感染等人类疾病。
治疗性抗体代表了生物制药业发展最快的领域之一。
随着技术的发展,各种形式的工程抗体被构建来改善它们的特性和效能,包括:鼠抗体人源化,提高生物学活性,如亲和力成熟,改进效应功能,改善药代动力学。
文章评述了这一领域的最新进展,同时也讨论了工程抗体的免疫原性和亲和力。
【关键词】 单克隆抗体;治疗性抗体;基因工程抗体;抗体人源化【中图分类号】 R392 116I mprove m ent of Therapeutic Anti bodiesSHEN B eifenInstitute of BasicM edical Sciences,Acade my of M ilit a ry M edical S ciences,B eijing,100850,China 【Abstract】 I n the m ar ke,t t h ere are eighteen m onoclonal anti b od i e s approved by the FDA They have been used to trea t hum an d i s ease,such as cancer,transplan t rejection,auto i m m udisease,an ti v ira l prophy lax is and so on The therapeu tic antibod ies represent one of the fastest gro w ing areas o f t h e b i o phar m aceutical industr y W ith the techno logy develop m en,t a diversity of eng i n eered anti b ody for m s have been created to i m prove their characteriza ti o n and efficacy,i n clud i n g hum anization o f m uri n e anti b odies,enhanc i n g t h e ir b i o log ical activities such as affi n ity m aturation,i m prove m ent o f effector functions,and alteri n g phar m acokinetics This revie w summ arized recent deve lopm ents i n t h is fie l d,also discussed t h e i m munogen icity and affi n ity of engineered anti b od i e s【K ey w ords】 monoclona l antibody;therapeutic anti b ody;eng i n eered an ti b ody;hum an ized anti body治疗性抗体是可以用来治疗疾病的抗体,因此也称它们为抗体药物。
治疗性单克隆抗体
治疗性单克隆抗体
史久华
【期刊名称】《国际生物制品学杂志》
【年(卷),期】2001(024)001
【摘要】20世纪70年代中期杂交瘤技术发明后不久就认识到单克隆抗体(mAb)的治疗效能.现已可用基因工程方法制备嵌合的人源化mAb和完全人源化mAb.所有研制中的生物技术药物中约有1/4为mAb,约有30种制品已付诸应用或处于研究中新药阶段.现有的获准制品用于抑制同种免疫和自身免疫反应性以及抗肿瘤、抗血小板或抗病毒治疗.mAb治疗的短期副作用可以耐受,但长期安全性尚待阐明.【总页数】5页(P19-23)
【作者】史久华
【作者单位】无
【正文语种】中文
【中图分类】R9
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治疗性单克隆抗体电荷异质性分析方法比较
治疗性单克隆抗体电荷异质性分析方法比较*王文波，武刚，于传飞，张峰，刘春雨，李萌，陈伟，郭莎，高凯，王兰**（中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室，卫生部生物技术产品检定及标准化重点实验室，北京100050）摘要 目的：对4种常用的单抗电荷异质性分析方法进行比对研究。
方法：以重组抗TNFα全人源单克隆抗体为例，分别利用离子交换色谱（IEC）、毛细管区带电泳（CZE）、毛细管等电聚焦电泳（CIEF）和成像毛细管等电聚焦电泳（iCIEF）4种方法对该抗体的电荷异质性进行分析；利用CIEF和iCIEF 2种方法对抗体主峰等电点（pI）进行分析。
结果：4种方法能够对重组抗TNFα全人源单克隆抗体的电荷异构体进行有效的分离和定量，其中IEC和CZE 2种方法检测的电荷异构体峰面积百分比（酸性峰、主峰和碱性峰）较为一致，4种方法检测的碱性峰比例较一致，CIEF和iCIEF检测的主峰与酸性峰比例较其他方法偏高。
CIEF和iCIEF检测抗体主峰等电点具有一定差异，其中，聚焦时间长短和pI Marker的选择是影响单抗pI 值检测的主要因素。
结论：通过抗体电荷异质性分析方法的比较研究可见，在单抗电荷异构体比例和主峰pI测定上4种方法具有一定的差异。
对单抗的质控应结合产品特性和表征研究，合理选择电荷异质性分析方法。
关键词：单克隆抗体；电荷异质性；等电点；质量控制；毛细管电泳；离子交换色谱中图分类号：R 917 文献标识码：A 文章编号：0254-1793（2017）08-1384-06doi：10.16155/j.0254-1793.2017.08.06Comparative study of different analytical methods for thecharge heterogeneity analysis of therapeutic antibody*WANG Wen-bo，WU Gang，YU Chuan-fei，ZHANG Feng，LIU Chun-yu，LI Meng，CHEN Wei，GUO Sha，GAO Kai，WANG Lan**（National Institutes for Food and Drug Control，Key Laboratory of the Ministry of Health for Research onQuality and Standardization of Biotech Products，Beijing 100050，China）Abstract Objective：To analyze charge heterogeneity of monoclonal antibody by four widely used analytical methods．Methods：Ion exchange chromatography （IEC），capillary zone ectrophoresis （CZE），capillary isoelectric focusing （CIEF） and imaged capillary isoelectric focusing （iCIEF） were used to analyze the charge heterogeneity of the recombinant anti-TNFα fully human monoclonal antibody．The electronic point （pI） value of the main peak was also analyzed by CIEF and iCIEF．Results：The four methods in this study can efficiently isolate and quantitate charge isomers of recombinant humanized anti-TNFα mAb．The main peak and acidic/basic peak area percentage * 国家“重大新药创制”科技重大专项资助项目（2014ZX09304311-001，2012ZX09304010） 通信作者 Tel：（010）67095707；E-mail：iamouran@ 第一作者 Tel：（010）67095963；E-mail：qinghaiminhe@analyzed by IEC and CZE were similar. The basic peak percentage analyzed by four methods was consistent. Themain peak and acidic peak area percentage analyzed by CIEF and iCIEF were higher than the two other methods ，and pI value of main peak was different between CIEF and iCIEF. The focusing time and pI marker affect the pI value calculation in this study. Conclusion ：By comparing the methods of antibody charge heterogeneity analysis ，we can see that there are some differences among the four analytical methods in the determination of antibody charge isomer ratio and pI peak. The appropriate method should be chosen for quality control based on the specificity and characterization of mAb.Keywords ：monoclonal antibody ；charge heterogeneity ；isoelectric point ；quality control ；capillary electrophoresis ；ion exchange chromatography 1 材料和方法1.1 材料 抗TNF α全人源单克隆抗体样品，由本室保存，置换缓冲液为20 mmol ·L -1的Tris 缓冲液，pH.0。
治疗性抗体工程_Therap_部分106
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治疗性抗体的制备和应用
治疗性抗体的制备和应用治疗性抗体，又称抗体药物，是指具有特异性结合和生物学效应的天然或人工合成的抗体，具有治疗或预防疾病的作用。
自20世纪80年代开始，治疗性抗体已成为新一代生物技术药物的重要组成部分，广泛用于癌症、自身免疫病、传染病和心血管疾病等领域的治疗和预防。
治疗性抗体的制备治疗性抗体的制备一般包括以下几个步骤：抗原制备、免疫、细胞融合、筛选和生产等。
其中，免疫和细胞融合是制备治疗性抗体的关键环节。
免疫是指将特定的抗原注射入动物体内，使其产生特异性抗体。
在免疫过程中，要选择合适的抗原、动物种类和免疫方案，以提高特异性和亲和力。
细胞融合是指将已获得特异性抗体的B细胞和骨髓瘤细胞进行融合，得到杂交瘤细胞，该细胞具有长寿命、稳定产生抗体的特点。
筛选是指对所得杂交瘤进行特异性筛选，得到具有理想药效和生物学特性的治疗性抗体。
生产是指对所得治疗性抗体进行大规模生产和纯化，以满足临床需求。
治疗性抗体的应用治疗性抗体作为新一代生物技术药物，具有诸多优点，如特异性、高亲和力、生物相容性和低毒性等，因此被广泛应用于临床。
目前，在癌症、自身免疫病和传染病等领域，治疗性抗体已经成为有效的治疗手段。
癌症治疗方面，治疗性抗体可以选择性地结合癌症细胞表面的相应抗原，激活免疫细胞，促进癌症的免疫治疗。
其中，经典的治疗性抗体药物便是使用一种由小鼠免疫细胞获得的抗原。
自身免疫病治疗方面，治疗性抗体可以选择性地结合导致疾病的自身抗体、细胞因子和细胞受体，中和其生物学活性或远离靶标。
在传染病领域，治疗性抗体可用于中和病毒、细菌和毒素等生物物质，减轻或预防疾病的发病和病情的恶化。
治疗性抗体在心血管疾病治疗方面同样具有良好的应用前景。
例如，心肌梗死早期应用抗体可以中和血管损伤后释放的细胞因子，减轻心肌损伤。
总之，治疗性抗体具有广泛的应用前景和发展前途，可以为人类带来更多的医学福祉。
治疗性抗体的新研究进展和临床应用
治疗性抗体的新研究进展和临床应用近年来，随着生物技术和医学科技的不断发展，治疗性抗体作为新型生物制品展现出巨大的潜力，成为肿瘤、自身免疫性疾病、心血管、神经科学等领域的研究热点。
治疗性抗体是指通过生物技术手段制备的具有特异性、高亲和力和高效性的抗体分子，用于治疗疾病的药物或治疗方法。
本文将从治疗性抗体的分类、研究进展、临床应用等方面进行探讨。
一、治疗性抗体的分类治疗性抗体可分为单克隆抗体（mAb）、多肽抗体、抗体药物复合物、双特异性抗体、F(ab')2、Fab、Fc、人源抗体等几种类型。
其中，单克隆抗体由于具有良好的特异性和亲和力，被广泛应用于抗癌、抗炎症、免疫疾病等方面的治疗研究。
多肽抗体的结构相比单克隆抗体更为简单，具有良好的组织渗透性和低的免疫原性，也是近年来研究的热点之一。
抗体药物复合物是指将抗体和药物结合成一个复合物，共同作用于疾病靶点，可提高药物的治疗效果。
双特异性抗体由两个不同的抗体片段结合而成，可同时结合两个不同的靶点，具有治疗肿瘤、自身免疫性疾病等方面的潜力。
F(ab')2和Fab是指抗体分子去除Fc片段后的两种结构，具有更高的组织渗透性和更低的免疫原性，常用于对全抗体不良反应的替代。
人源抗体是指来源于人体、被人体免疫系统识别的抗体，避免了异种抗体引起的免疫原性反应和潜在的安全问题。
二、治疗性抗体的研究进展随着技术的不断革新和临床应用的推广，治疗性抗体的研究也取得了长足的进展。
首先，在靶点选择和抗体设计方面，越来越多的靶点被发现和开发，同时设计和改造抗体分子的技术也不断更新，如全人化/人源化抗体的生产技术、Fc片段的改性、多肽抗体的构建等，不断提升着治疗性抗体的特异性和亲和力。
其次，在生产和纯化技术方面，也出现了越来越多的新兴技术，如单细胞测序技术、代谢工程技术、微生物系统工程技术等，使得治疗性抗体的生产和纯化变得更加高效和精准。
此外，许多在生物制药方面有丰富经验的制药公司和科研机构也加入了治疗性抗体研究的领域，使得该领域的创新性和市场前景更为可观。
治疗性抗体的研究
治疗性抗体的研究治疗性抗体是一种通过抗体技术制备的药物，具有针对特定分子靶点的高度选择性和亲和力。
它可以通过多种机制来治疗疾病，如中和病原体、诱导细胞毒性、调节免疫反应等。
由于其高度特异性和广泛的可调控性，治疗性抗体已成为当今药物研究领域的热点之一治疗性抗体的研究起源于20世纪70年代，当时科学家发现一些抗体具有抗肿瘤活性。
随着生物技术的发展，人们开始利用基因工程技术制备具有特定功能的抗体，从而满足医学上的各种需求。
目前，已经有多种治疗性抗体被成功开发并应用于临床实践。
1.抗原鉴定和选择：治疗性抗体的研究首先需要选择合适的抗原。
一般来说，抗原应具有高度特异性，且在疾病发生发展中起到关键作用。
通过生物信息学和分子生物学技术，研究人员可以从基因组、蛋白质组等海量数据中挑选出具有潜在治疗价值的抗原。
2.抗体制备和优化：在确定了合适的抗原后，研究人员需要通过基因工程技术制备出对应的抗体。
这一过程包括克隆、表达、纯化等步骤，要求制备出高纯度和高亲和力的抗体。
此外，为了提高治疗效果和降低副作用，研究人员还需要对抗体进行优化，如改变抗体的结构、调节免疫活性等。
3.抗体的生物学功能研究：为了理解治疗性抗体的作用机制，研究人员需要深入研究抗体的生物学功能。
这涉及到从细胞水平、分子水平等多个层面来解析抗体的影响机制。
通过使用体外实验和动物模型等方法，研究人员可以评估治疗性抗体的疗效和安全性。
4.临床试验和应用推广：一旦治疗性抗体的疗效和安全性得到初步验证，研究人员就可以将其进一步应用于临床试验。
这包括三个阶段的临床试验，以评估治疗性抗体在人体中的疗效、安全性和耐受性。
通过积累临床试验数据，研究人员可以进一步优化治疗方案，并推广治疗性抗体的临床应用。
总体来说，治疗性抗体的研究包括抗原鉴定、抗体制备和优化、生物学功能研究以及临床试验和应用推广等多个方面。
随着科学技术的不断进步，人们对治疗性抗体的研究也不断深入，相信在不久的将来，治疗性抗体将会为临床医学的各个领域带来更多的新希望。
治疗性单克隆抗体类制品质量控制标准的思考_张峰
同参比品一致 ｂ 同参比品一致 ｂ 电泳图谱同参比品一致，且样品主峰迁移时间应位于规定范围内 酸性区、主峰、碱性区峰面积百分比位于规定范围内 阳性（同参考图谱比较，有所有 ／ 部分特定色谱峰，且无明显新峰） 同理到期，如：赫塞汀 （曲妥珠单抗）、美罗华（利妥昔单抗）、爱必妥（西 妥昔单抗）和类克（英利西单抗）等，许多医药企业 通过生物仿制药的方式加入到单抗制品的开发和 生产中。随之而来的问题是，由于缺乏对单抗结构 与其安全性和有效性间关系的深入了解，新加入 企业和生物仿制药企业在单抗制品的质量控制方
总体上看，单抗的质量控制项目（见表 １）主 要包括一般项目、理化检测、含量、鉴别、纯度、活 性 、安 全 性 等 几 个 方 面［５］，其 中 安 全 性 方 面 检 测 包 括 ：ＤＮＡ 残 留 、宿 主 细 胞 蛋 白 残 留 、生 产 过 程 相 关 外源因子和异常毒性检测。 作为对纯化工艺去除 外 源 因 子 能 力 的 验 证 ， 宿 主 细 胞 ＤＮＡ、 宿 主 细 胞 蛋白残留和生产过程相关外源因子的检测主要在 注册阶段的原液样品中进行，考虑到最适样本的 问题，这些项目在成品检测中可以不检测。在产品 质量标准设定和检测方法选择的过程中，应根据 制品的具体情况选择合适的检测方法，并根据工 艺的稳定性、产品的安全性和有效性以及方法本 身的变异情况设定合适的质量标准。 由于对结构 与功能间关系认识的不断深入和检测技术的不断 发展，产品的检定方法和质量标准是一个不断发 展提高的过程，下面就当前单抗制品的检测方法 和质量标准进行说明和论述。 ３ 单抗质量方法研究现状及其标准制定的注意事项
从表 １ 可以看出，对于一个质量控制项目可 能会采用不同的方法，从不同的侧面反映单抗的 质量，特别是近年来一些新技术应用于单抗的质 量控制，对单抗制品的质量控制提供了更高的保 障。 但同时也需考虑到，对于单抗，表 １ 中所列出 的项目只是一个较为普遍的原则，但并不是所有 的检测方法都适用于每一种单抗制品，表中所规 定的标准也并非适用于所有的制品，针对于某一 个特定单抗来说， 都会有一些特殊的因素需要考 虑， 下面就不同检测方法在单抗质量控制中的作 用及其标准制定时需要考虑的问题作简单分析。
人源化单克隆抗体技术路线
人源化单克隆抗体技术路线
人源化单克隆抗体技术是一种用于制备治疗性抗体的方法，其基本技术路线如下：
1. 抗原选择：选择目标抗原，即希望产生抗体针对的特定蛋白质或分子。
2. 免疫动物：给动物（通常是小鼠）注射目标抗原，以诱导免疫反应。
3. 杂交瘤技术：从免疫动物的脾脏中分离出 B 淋巴细胞，并与骨髓瘤细胞进行融合，形成杂交瘤细胞。
4. 抗体筛选：对杂交瘤细胞进行筛选，以找到能够产生针对目标抗原的特异性抗体的细胞株。
5. 抗体人源化：通过基因工程技术，将鼠源抗体的互补决定区（CDR）移植到人源抗体的框架区，从而构建出人源化抗体。
6. 表达和纯化：将人源化抗体基因导入适当的表达系统（如哺乳动物细胞、酵母或细菌）中进行表达，并通过纯化步骤获得高纯度的人源化单克隆抗体。
7. 功能和质量评估：对人源化单克隆抗体进行生物学活性、亲和力、特异性等方面的评估，以及进行质量控制和安全性测试。
8. 临床试验和批准：经过临床前研究后，将人源化单克隆抗体进行临床试验，以评估其安全性和有效性。
如果试验结果良好，该抗体可能获得监管机构的批准，用于临床治疗。
人源化单克隆抗体技术的发展使得治疗性抗体能够更好地应用于人类疾病的治疗，减少了免疫原性反应的风险，并提高了抗体的治疗效果。
这一技术在肿瘤治疗、自身免疫疾病治疗等领域具有重要的应用价值。
治疗性抗体的研究
治疗性抗体的研究治疗性抗体是一类具有非常广泛应用前景的药物。
它们通过特异性地识别和结合特定分子，从而发挥疗效。
治疗性抗体的研究已经取得了巨大的进展，并且已经被广泛应用于临床治疗中。
本文将对治疗性抗体的研究进行详细讨论。
首先，我们将对治疗性抗体的基本原理进行介绍。
治疗性抗体是一种通过模拟或增强体内天然免疫应答来发挥疗效的抗体。
它们可以通过绑定癌细胞上的肿瘤抗原，诱导免疫细胞对癌细胞进行杀伤；也可以通过结合细胞表面受体，干扰信号转导通路，从而阻止疾病的发展。
由于其高度的特异性和亲和性，治疗性抗体可以实现精确的药物输送，从而降低毒副作用和提高疗效。
近年来，治疗性抗体在抗癌治疗中取得了巨大成功。
许多抗体药物，如赫赛汀、三峡和帕鲁班等，已被FDA批准用于治疗多种类型的癌症。
这些药物通过不同的机制抑制癌细胞的增殖、促进肿瘤细胞的自杀或激发免疫细胞对癌细胞的攻击。
此外，一些治疗性抗体还可以与化疗药物联用，从而增强药效并降低毒副作用。
除了抗癌治疗外，治疗性抗体还具有广泛应用于其他疾病治疗的潜力。
例如，一种叫做托珠单抗的抗体药物已被批准用于治疗风湿性关节炎和类风湿性关节炎等自身免疫性疾病。
此外，治疗性抗体还被研究用于治疗心血管疾病、感染性疾病和神经退行性疾病等。
这些研究旨在发现和开发新的治疗性抗体药物，以满足患者不同疾病的需求。
在治疗性抗体的研究中，生物工程技术起着关键的作用。
通过克隆体技术和重组蛋白技术，研究人员可以导入人体抗体基因序列，从而大量合成抗体药物。
此外，还可以通过改造一些抗体的结构和功能，使其更加适用于特定疾病的治疗。
这些技术的发展为治疗性抗体的研究和开发提供了有力的支持。
然而，尽管治疗性抗体在临床治疗中取得了巨大成功，但仍然存在一些挑战。
首先，抗体药物的生产成本较高，限制了其广泛应用。
其次，一些抗体可能会引发免疫反应，限制了其长期使用。
此外，抗体药物的治疗效果也会受到个体差异的影响，需要进一步研究以实现个体化治疗。
治疗性抗体的研究
治疗性抗体的研究
摘要：
1.引言
2.治疗性抗体的分类
根据抗体的类型，治疗性抗体可以分为全抗体、单抗体和抗体片段。
全抗体是一种能够结合抗原的完整抗体分子，包括IgG、IgA、IgM等亚类。
单抗体由单个单克隆抗体分子组成，具有更好的特异性和较短的体内半衰期。
抗体片段是抗体分子的一部分，包括Fab, F(ab')2, scFv等。
3.治疗性抗体的制备
治疗性抗体的制备包括抗原选择、抗体库构建、抗体筛选和表达纯化
等步骤。
抗原选择是关键的一步，通常选择与治疗靶标高度相关的抗原进
行制备。
构建抗体库是将大量的抗体序列克隆到合适的载体中，以便后续
的筛选。
抗体筛选主要通过体外或体内的方法，筛选出具有高亲和力和特
异性的抗体。
表达纯化是将筛选出的抗体进行大规模的生产和提纯，以满
足临床应用的需求。
4.治疗性抗体的应用
治疗性抗体在临床上有广泛的应用，目前已有多个治疗性抗体获得了
上市批准并用于临床治疗。
治疗性抗体可以用于治疗癌症、自身免疫性疾病、传染病等多种疾病。
它们可以通过不同的机制发挥治疗效应，如抵御
肿瘤生长、激活免疫反应、靶向病毒等。
5.治疗性抗体的挑战和展望
尽管治疗性抗体在临床治疗中取得了一些重要的突破，但仍然存在一些挑战。
例如，抗体药物的生产和成本较高，副作用和免疫原性等问题也需要解决。
未来，我们可以通过改进抗体工程技术、研发新的靶标分子等途径来克服这些挑战，推动治疗性抗体的发展。
结论：。
治疗性单克隆抗体概述
治疗性单克隆抗体药物生物技术是当今世界高技术发展最快的领域之一。
作为生物技术领域之一的单克隆抗体药物，近些年，在不断地提高患者健康水平和生活质量的同时，也取得了瞩目的市场业绩。
另外，新药研发不断增加投入的同时，重磅炸弹级创新药物却在明显减少，且目前众多重磅炸弹级小分子药物还面临着专利悬崖的威胁。
所以，为了寻求新的增长点，能进一步促进企业自身的盈利能力，众多制药企业尤其是生物技术制药公司，逐渐进入单克隆抗体药物研发领域，我国也有部分企业涉足单克隆抗体药物领域。
一、单克隆抗体及其相关概念抗原(antigen)：指能刺激机体的免疫系统使之发生免疫反应,产生抗体或致敏淋巴细胞,并能与相应的抗体或致敏淋巴细胞在体内或体外发生特异性结合的物质。
它通常（但也不一定）是一种产生免疫反应的外来物质。
抗体（antibody）：由机体免疫系统与外来物质或抗原发生反应而产生的一种免疫球蛋白。
它能特异性地与特殊物质和这种物质上的特别结合点或抗原决定簇结合。
是主要有B 细胞产生的一种大分子Y型免疫球蛋白。
一种抗体只能与其相应的抗原呈特异性结合，这是抗体与其他免疫球蛋白和血清中正常球蛋白的根本区别。
B 细胞（B cells）：或叫B淋巴细胞，是两类淋巴细胞中的一种，是由淋巴组织产生的一种白细胞，负责产生抗体。
单克隆抗体的发现：1975年，德国科学家G.Kohler与英国科学家stein发现单克隆抗体的杂交瘤（Hybridoma）生产技术。
其通过将一个B淋巴细胞和一种骨髓瘤（癌）细胞通过细胞融合技术产生一种杂合细胞，这种杂合细胞就被成为“杂交瘤”。
这种杂交瘤包含两种母细胞的特性，既可无限生长，又可无休止产生抗体。
当这种杂交瘤细胞在体内或体外培养时，它就会产生具有B母细胞相同特征的抗体。
那群遗传上相同的后代中的一个被称为一个纯种细胞系，由此单个杂交瘤纯种细胞产生的抗体就叫单克隆抗体（monoclonal antibody，mAb），简称单抗。
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★需要多次重复使用，并且应用剂量
较大。人源化抗体往往达不到原来鼠单抗 的结合能力。
全球治疗性抗体上市情况列表
差距
★1.原创性不足
我国抗体药物的原创性不足，具有自主知识
产权的抗体药物很少，很多抗体药物都只是在实
验室的研究阶段，距离产业化还有相当大的距离， 另外，动物细胞规模化培养技术与国外相比差距 也很大
原理
首先从杂交瘤或免疫脾细胞、外周血淋巴细胞等 中提取mRNA，逆转录成cDNA，再经PCR分别 扩增出抗体的重链及轻链基因，利用DNA重组技
术将两者连接克隆到表达载体中，并在适当的细
胞(如大肠杆菌、CHO细胞、酵母细胞、植物细 胞及昆虫细胞等)中表达并折叠成有功能的抗体分 子，筛选出高表达的细胞株，再用亲和层析等手 段纯化抗体片段。
原理
这种技术保留了完整的鼠单抗可变区序列，
其亲和力和特异性都得到了保证，但也保留了鼠 可变区的异源性，仍可能诱导产生HAMA。
制备方法流程
主要步骤包括鼠抗体可变区基因的克
隆、人抗体恒定区基因的钓取、鼠抗体可
变区基因及人抗体恒定区基因的拼接以及
高效表达载体和宿主细胞的构建，筛选阳
性细胞和表达产物的鉴定。
★2.规模小
从规模上来看，我国在研究生产抗体药物上 与国外发达国家相比规模小，技术落后，研发规 模也不大，而且药企对抗体药物这部分的投入不 是很大，在人才方面，我国专门做抗体药物研究 的人才也寥寥无几，这都对我国的抗体药物研发 带来不利的影响。
★参考文献： 《医学免疫学》第五版 《医学生物制品学》第二版
1、鼠抗体可变区基因的克隆
酶切法：杂交瘤细胞株 限制性内切酶
Southern印迹法
PCR技术：RT-PCR 扩增 逆转录 cDNA
模板 引物 琼脂糖凝胶电泳 RACE-PCR法：反转录 引物 扩增
2、人抗体恒定区基因的钓取
通常以 mRNA 为模板，RT-PCR 扩增抗体恒定区 CH1 ～ CH3 之间的序列。
泌型的骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞，再进一步克隆
化，这种克隆化的杂交瘤细胞是既具有瘤的无限生长的 能力，又具有产生特异性抗体的B淋巴细胞的能力，将这 种克隆化的杂交瘤细胞进行培养或注入小鼠体内即可获 得大量的高效价、单一的特异性抗体。这种技术即称为
单克隆抗体技术。
制备方法流程
用抗原免疫小鼠，刺激机体诱生抗原 特异性B细胞。取该免疫小鼠脾细胞 （含有B细胞）与非分泌性小鼠骨髓瘤 细胞在PEG作用下进行细胞融合。由 于哺乳类细胞的DNA合成分为从头 （donovo)合成和补救（salvage）合成 两条途径，加入HAT选择培养基后， 未融合的骨髓瘤细胞死亡，未融合的B 细胞因不能在体外长期培养也发生死 亡，只有融合后形成的杂交瘤细胞可 在HAT选择培养基中存活和繁殖，其 既有骨髓瘤细胞大量扩张和永生的特 性，又具有免疫B细胞合成和分泌特异 性抗体的能力。由于每个杂交瘤细胞 由一个B细胞融合而成，而每个B细胞 克隆仅识别一种抗原表位，故经筛选 和克隆后的杂交瘤细胞仅能合成及分 泌一种均一的抗体，即为单克隆抗体
原理
二次反应产生的抗体主要是高亲和力的IgG。
机体再次受同一抗原刺激后，对该抗原特
异性的记忆B细胞迅速增殖分化为浆细胞，
产生特异性抗体。Th的记忆细胞也加快反 应的进行，在抗原作用1到2天后，抗体浓度 迅速上升。抗体合成率为初次反应的几倍 到几十倍。
制备流程
纯化的抗原→与弗氏佐剂一起充分乳化→
抗体的治疗机制
（3）竞争性抑制作用/拮抗作用(Competitive inhibition) 与体内产生或体外进入的物质结合，阻止其与靶分 子作用产生毒性损害。
（4）抗体依赖性细胞介导的细胞毒效应（Ab dependent cell-mediated cytotoxicity, ADCC） 及补体依赖性细胞溶解作用（Complementarity dependent cytolysis, CDC）。
人源化抗体（humanized antibody ）
人源化抗体的概念
人源化抗体产生原理
人源化抗体制备方法流程
人源化抗体特点
概念
★将小鼠抗体分子的互补决定区序列移植到
人抗体可变区框架中而制成的抗体。此抗 体可明显降低由鼠源单克隆抗体所致的人
抗鼠抗体反应。
原理及制备过程
★人源化抗体包括嵌合抗体、改型抗体 和全人源化抗体等几类 ★嵌合抗体是利用DNA重组技术，将异源单抗的轻、
重链可变区基因插入含有人抗体恒定区的表达载 体中，转化哺乳动物细胞表达出嵌合抗体，这样 表达的抗体分子中轻重链的V区是异源的，而C区 是人源的，这样整个抗体分子的近2／3部分都是 人源的。
★改型抗体
也称CDR植入抗体(CDRgraftingantibody)，抗体 可变区的CDR是抗体识别和结合抗原的区域，直接 决定抗体的特异性。将鼠源单抗的CDR移植至人源 抗体可变区，替代人源抗体CDR，使人源抗体获得 鼠源单抗的抗原结合特异性，同时减少其异源性
注射动物体内（剂量，次数，途径等均要 适宜）→测定效价（如效价高，则不必加
强免疫）→1周后经动脉放血→分离血清→
纯化抗血清备用
特点
优点：作用全面，具有中和抗原、免疫调
理、介导补体依赖的细胞毒作用（CDC）、
ADCC等重要作用，来源广泛，制备容易。
缺点：特异性不高易发生交叉反应，也不 易大量制备，从而应用受限。
目录
嵌合抗体（chimeric antibody ）
嵌合抗体的概念
嵌合抗体产生原理
嵌合抗体制备方法流程
嵌合抗体特点
概念
广义上讲：嵌合抗体指不同物种来源的免 疫球蛋白的V基因和C基因重组后所编码的 抗体。 狭义上讲：由于目前嵌合抗体的研究以人 鼠嵌合抗体为主，故嵌合抗体又指利用 DNA重组技术将鼠单抗的轻、重链可变区 基因插入含有人抗体恒定区的表达载体中， 转化哺乳动物细胞表达出人鼠嵌合的抗体。
的应用受到了限制：
如：（1）可诱导鼠抗人抗体的生成 （2）鼠源性抗体Fc段不能有效地发挥人源 性Fc段的功能 （3)鼠源性抗体的生物半衰期很短。
抗体的治疗机制 （Cure mechanism of Ab）
（1）中和作用(Neutrilization) 用于感染性疾病，使病原体或其产生 的毒素丧失致病力。 （2）示踪或导向作用（Tracer or targeted effect） 使与其相连的功能性分子特异性地激 活或封闭、破坏靶细胞或靶分子。
原理
初次反应的抗体持续时间较短，亲和力也较低。
机体初次接触抗原后，激发体液免疫应答反应。在巨噬细 胞和Th细胞的作用下，B细胞被激活，增殖分化为浆细胞 和记忆B细胞。浆细胞产生特异性抗体。由于初次反应时， 只有少量对该抗原特异的免疫活性细胞被诱导 而增生分 化为浆细胞。随着抗原的消耗，抑制T细胞的激活和循环 抗体的反馈抑制作用，浆细胞减少，抗体浓度 很快下降。
（5）通过内影像作用模拟抗原，使疫苗更具安全性及 广泛性。
治疗性抗体的应用
（1）抗肿瘤作用(Anti-tumor)
（2）抗感染作用(Anti-infection)
（3）抗器官移植排斥反应(Anti-repelling （4） 抗血栓形成(Anti-formation of thrombus ) （5）解毒(Detoxicating) （6）构建抗独特型抗体疫苗(Constuction of antiidiotype vaccine) （7）在自身免疫性疾病及变态反应性疾病中的应用（apply to immunity disease and abnormality reaction）
◆多克隆抗体 治疗性抗体 ◆单克隆抗体
◆嵌合抗体
◆人源化抗体
多克隆抗体（polyclonal antibody）
多克隆抗体的概念 多克隆抗体产生原理 多克隆抗体制备方法流程 多克隆抗体特点
概念
在含有多种抗原决定簇的抗原刺激下，体 内多个B细胞克隆被激活并产生针对多种不 同表位的单克隆抗体，其混合物为多克隆 抗体。机体内所产生多克隆免疫血清实质 上是由多种抗体组成的混合物，又称多克 隆抗体。
目录
单克隆抗体（monoclonal antibody; McAb; mAb ）
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单克隆抗体的概念
单克隆抗体产生原理 单克隆抗体制备方法流程 单克隆抗体特点
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概念
高度均质性的特异性抗体，由一个识别单 一抗原表位的B细胞克隆所分泌。一般来自杂 交瘤细胞。
原理
B淋巴细胞在抗原的刺激下，能够分化、增殖形成具 有针对这种抗原分泌特异性抗体的能力。B细胞的这种能 力和量是有限的，不可能持续分化增殖下去，因此产生 免疫球蛋白的能力也是极其微小的。将这种B细胞与非分
特点
优点 ： • 在体外“永久”地存活并传代 • 用相对不纯的抗原，获得大量高度特异的、均一的抗 体。适用于以标记抗体为特点的免疫学分析方法 • 可用于体内的放射免疫显像和免疫导向治疗
缺点 ： • 固有的亲和性和局限的生物活性限制了它的应用范围
• • 反应强度不如多克隆抗体 制备技术复杂、费时费工、价格较高
治疗性抗体的概述
◆ 1890年Behring和北里柴三郎发现了可特 异中和外毒素的血清组合白喉抗毒素。 ◆ 20世纪70年代德国学者Konler和英国学者 Milstein研制了杂交瘤单克隆抗体（mAb）。 ◆ 抗体被认为是理想的癌症和传染病的治疗 分子。
治疗性抗体的概述
然而，鼠源mAb作为异源性蛋白在人体内