甲基绿和吡罗红

∙为什么不能用甲基绿鉴定提纯的DNA？

原因可能是甲基绿易与聚合程度高的DNA结合呈现绿色，而且是在常温下进行的反应，对于聚合程度低的DNA则不容易结合；而二苯胺与DNA相遇会变成蓝色的原理是：DNA在酸性条件下加热，其嘌呤碱与脱氧核糖间的糖苷键断裂，生成嘌呤碱、脱氧核糖和脱氧嘧啶核苷酸，而2-脱氧核糖在酸性环境中加热脱水生成ω-羟基-γ-酮基戊糖，与二苯胺试剂反应生成蓝色物质，这一反应的条件是在沸水浴环境下进行的。显然甲基绿和二苯胺与DNA进行的颜色反应的原理和反应的条件是不一样的，而对于提纯了的DNA，更适合用二苯胺在沸水浴条件下进行检测。

∙为什么甲基绿和吡罗红要混合使用，且要现配现用？

原因是甲基绿—吡罗红为碱性染料，它们分别能与细胞内的DNA、RNA结合呈现不同颜色。当甲基绿与吡罗红作为混合染料时，甲基绿与染色质中DNA 选择性结合显示绿色或蓝色；吡罗红与核仁、细胞质中的RNA选择性结合显示红色。这两种染料在混合染液中有竞争作用，两种核酸分子都是多聚体，只是聚合程度有所不同。甲基绿易与聚合程度高的DNA结合呈现绿色，而吡罗红则与聚合程度较低的RNA结合呈现红色（但解聚的DNA也能和吡罗红结合呈现红色）。即RNA对吡罗红亲和力大，被染成红色，而DNA对甲基绿亲和力大，被染成绿色。用甲基绿、吡罗红的混合染色剂将细胞染色，可同时显示DNA和RNA在细胞中的分布。

配制好的吡罗红甲基绿溶液易氧化，且在光照下氧化加剧，所以最好现配现用。若是配制完用不了，应避光保存，故在棕色试剂瓶中保存。

∙二苯胺与甲基绿能否混用

这是用于鉴定DNA的存在的两种试剂，二苯胺加热法中，呈现蓝色反应。用甲基绿溶液直接滴在有DNA丝状物的载玻片或玻棒上，用水充分冲洗掉浮色后再观察，呈蓝绿色反应。只用一种即可，不混合用。前者要加热，后者不加热。

两者都可以和DNA反应，应该怎样区分它们呢

甲基绿甲基绿是碱性染料。它是绿色粉末状，能溶于水(溶解度8%)和酒精(溶解度3%)。甲基绿是最有价值的细胞和染色剂，细胞学上常用来染染色质，跟酸性品红一起可作植物木质部的染色剂

甲基绿与二苯胺对于鉴定DNA的区别

DNA粗提取与鉴定这个实验，DNA鉴定则换成用二苯胺，在这个DNA粗提取过程中，用改变氯化钠浓度办法将蛋白质与DNA分开，用冷酒精处理进一步将DNA与RNA、蛋白质分开。一系列的操作就是要获得纯度较高的DNA，最后获得的纯度较高的DNA不能排除有RNA，所以此时用甲基绿鉴定DNA、RNA都被染成绿色，所以不能说绿色一定是DNA。而改用二苯胺就不一样了，DNA和二苯胺反应的产物成蓝色，RNA则没有这种颜色反应，所以用二苯胺鉴定呈蓝色的一定是DNA，并且蓝色深浅与DNA含量高低有关。