紫外-可见分光光度计的使用 实验一 紫外

J I A N G S U U N I V E R S I T Y

实

验

报

告

系别：药学院

班级：制药0901

姓名：张丽琴

学号：3090902007

实验二紫外-可见分光光度计的使用

一、试验目的

1、了解紫外-可见分光光度计的基本结构与特点，掌握仪器的使用

方法。

2、熟悉测绘吸收曲线的一般方法

3、掌握紫外-可见分光光度法定量的方法

4、熟悉平行原则的应用

二、试验原理

电子跃迁原理

三、实验步骤

（一）仪器的使用方法

1、接通电源，打开样品室盖，预热20min

2、比色皿的使用：比色皿不用时浸泡于醇溶液中；使用时手拿比色皿的毛玻璃面，将比色皿用蒸馏水冲洗几遍，然后用待测溶液冲洗两次，然后将待测溶液加入比色皿中，加入溶液体积约为比色皿的2/3或3/4；将比色皿外壁用卷纸擦干，并且保持透光面洁净，不能有影响光透过的纸屑或痕迹。将比色皿放入光路中，注意比色皿在光路中的方向最好始终保持一致；

3、选择波长，比色皿中置空白溶液，打开样品室盖调节使T读数为零，关上样品室盖调节使T 为100%，反复调节几次，直至读数稳定。(注：改变波长时均需重新调0和100%)

4、比色皿配对。将其他比色皿盛放相同的空白溶液，测定其他比色皿与刚才调0，调100%的比色皿的吸光度差值，并且记录。选择吸收值小的比色皿作为对照皿；记录其他比色皿与对照比色皿的差值。测定时顺序勿颠倒。

5、测定物质吸光度。测定时溶液浓度从稀到浓测定。每次荡洗比色皿1~2次。注意勿将溶液洒于样品室，否则须立即擦干。

6、记录吸光度值。

7、测定完毕洗净比色皿，置于醇溶液中，关闭电源。

（二）标准曲线的制作样品溶液的测定：

1.配置浓度为0.5000mg/ml的标准苯甲酸钠储备液100ml。

2.标准溶液的配置分别吸取标准苯甲酸钠储备液1.00ml、2.00ml、

3.00ml、

4.00ml、

5.00ml至5只100ml量瓶中，用0.1mol/L HCl

溶液（9→1000）稀释至刻度，定容，得系列浓度的标准苯甲酸钠溶液。（预先已经配好）

3.标准曲线的制作以0.1mol/L HCl溶液为参比，分别测定各溶液

在240nm处的吸收度A值，以A为y轴，进行线性回归，得工作曲线和相关系数r。

4.样品溶液测定：精密吸取样品溶液2.0ml至100ml容量瓶，用0.1M

HCl稀释至刻度。

5.计算样品液的浓度。

6、数据记录：

（三）实验结束

1、测定完毕将台面清理干净。

2、绘制标准曲线，求待测溶液浓度。

，则结果为：

每次测量后的结果需减去0.008

当A=0.496时，带入y=0.0233x+0.0522得：x=19, 即：待测液浓度为19(μg/ml).

四、注意事项

1、吸收池配对。

2、注意比色皿每次测定时的方向。

3、比色皿要保持清洁，池壁上液滴应用绸布或擦镜纸擦干，不能

用手拿透光玻璃面。

4、测定吸光度，溶液由稀至浓进行测定。

5、遵守平行原则（加试剂的量、顺序、时间尽量一致）

6、测定样品前应检查所用溶剂在测定样品所用波长附近是否有吸

收，要求不得有干扰吸收峰。

7、样品溶液浓度应适当，一般应使测得的吸收度控制在0.2~0.7。

8、操作结束后，应仔细检查样品室内是否有溶液溢出，若有溢出，

必须及时用吸水纸吸干，否则会引起测量误差或影响仪器使用

寿命。

9、仪器各部存放有干燥剂，发现干燥剂变色立即更换或烘干在用。

10、仪器每次使用完毕后，请用防尘罩罩住。

五、思考题

一、使用分光光度计时，待测溶液的吸光度数值应控制在什么范围？为什么？如何控制？

答：待测液的吸光度数值应控制在0.2-0.8之间，因为在这一吸光度范围内测量时读数误差最小；如果被测液的吸光度比较大，那应该稀释后再测量，如果待测液的吸光度比较小，则可以取待测液被稀释之前的适宜浓度时再次测量。

二、苯甲酸钠紫外吸收属于何种分子跃迁？

答：（1）n→π*（2）π→π*

实验心得

在学习了几周的紫外-可见分光光度计理论课程之后，终于有机会在实验室亲自设计和操作分光光度计了，这对我来说，无疑是一次很大的挑战。实验一开始，实验老师为我们细致地讲解了这次实验的目的、原理、过程和注意事项，为了让大家理解的更全面，老师还专门为大家讲解了石英比色皿的外形和用法。实验老师的讲解井井有条，同学们也听得绘声绘色。

听完了老师的讲解之后，带着好奇，带着激动，我们开始了紧张的实验操作，八名同学一组，进行了简单的任务分工之后，我们都投入了这次试验中。可是，天有不测风云，我们组选的那一台仪器，仪器零点飘忽不定，有同学说可能是因为调整零点的电位器接触不良，也有可能是仪器时间用久了，不管怎样，我们都要解决这些问题，我们请来了老师，老师建议我们重新换一台机器。为了得到准确的实验数据，我们重新换了一台仪器，这台仪器比起前边那台稳定多了，这极大地鼓舞我们每个人的信心。接下来就要进行比色皿配对了，按照老师的讲解，如果测量值小于0.002，那就认为比色皿配对，可以忽略比色皿不同而带来的误差，可是问题又出现了，我们组使用的比色皿，不管怎么调，读数都在0.008左右，后来老师告诉我们，如果大于0.002，那在最后的实验数据里，减去0.008就好。接下来，我们顺利地测完了每组溶液的吸光度，并记录了相关数据，并整理了试验台。

这次紫外-可见分光光度计的实验，使我学到了不少实用的知识,更重要的是,做实验的过程，思考问题的方法,这与做其他的是通用的,真正使我们受益匪浅. 我们必须要坚持理论联系实际的思想，以实践