PCR鉴定目的基因在酵母基因组中的整合标准操作规

PCR鉴定目的基因在酵母基因组中的整合标准操作规程（编号：038）1、目的及适用范围

该SOP用于鉴定线性化重组质粒经过电击转化后是否整合到酵母基因组中，以实现阳性重组子的初步筛选。

2、主要仪器及试剂

PCR仪、凝胶成像仪、琼脂糖凝胶电泳、ddH2O、10xPfu buffer、dNTP mix、Pfu酶、酵母基因组提取试剂盒

3、操作步骤

3.1 利用天根酵母基因组提取试剂盒提取酵母基因组

3.2 PCR步骤：

ddH2O 14μL

10xPfu buffer 2.5μL

dNTP mix 2μL

模板2μL

Pfu酶0.5μL

总体积20μL

反应程序：

94℃ 3min，94℃ 30s，58℃ 30s，72℃ 30s，30cycles，72 10min，结束后取5μL进行凝胶电泳检测。

4、注意事项

提取酵母基因组时要注意破壁完全，否则很难提出基因组。

5、问题向导

5.1提取的基金组非常少？用蜗牛酶消化时间太短，破壁不完全造成的。

5.2 PCR检测，用通用引物和特异引物检测的结果不一致？多次重复，否则结果不可信。

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