Agilent 1260 基本操作方法
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样品采集方案
单针进样
序列进样
加冲柱.M
数据分析参数(脱机)
调用数据文件
建立合适的积分参数
设置报告格式
数据分析界面
调用数据文件
重叠调用一组数据 调用一个数据
信号窗口
选择最佳测定条件
最高峰满刻度显示
自行规定显示的时 间轴和响应值量程 第二高峰满刻度
检查各溶剂瓶所在管路是否与待运行方法一致。
新换溶剂需滤过、超声。(乙腈最好新配)
流动相含缓冲盐,要打开泵密封垫清洗组件。
打开密封垫清洗组件
流动相含缓冲盐:10%异丙醇水溶液(循环) 流动相为有机相:有机相
设置溶剂瓶填充量
当重新添加流动相后,必须更改该界面 的实际溶剂值。
调出在线信号窗口
6.256
6.256
7
7
7.205
7.205
8 9 min
8 9 min
设置文字标注的字体、样式 在图谱上添加文字标注 在图谱上添加线形标注 移动谱图上所添加的文字标注、线形标注或EMF图形标注 删除谱图上所添加的文字标注、线形标注或EMF图形标注
在图谱上添加EMF格式的图形标注
多张色谱图分开显示或重叠显示的切换键
Agilent 1260 基本操作方法
基本单元
溶剂柜 四元泵 自动进样器 柱温箱
DAD检测器
Agilent 1260 化学工作站
采集参数
数据参数 积分参数 报告参数
泵 自动进样器
DAD检测器
建立文件位置
工作站联机画面
建立新方法
Agilent工作站建立方法是以改写方式建立 建议先调用工作站默认方法DEF_LC.M, 在此基础上进行改写
带宽越小,吸收越大,噪音也大,信/噪小 带宽越大,吸收减小,噪音减小,信/噪大
梯度洗脱,基线漂移,参比波长可减轻漂移
影响色谱图的采集频率 应略小于色谱图上最窄的色谱峰的半峰宽
太快:色谱图毛刺;太慢:数据丢失
通过光谱选条件 进行纯度检测
190~950nm
扫描间隔
每次进样前自动平衡→序列进样
每次进样后自动平衡→手动进样 只有打开才就绪
DAD高级功能
利用等吸收图优化色谱条件
反选后最亮处表示吸收最集中,即最大吸收。 参比波长:选择样品无吸收,且靠近样品吸收处。
DAD高级功能
色谱峰纯度检索
纯色谱峰的纯度因子将高于阈值 不纯峰的纯度因子将低于阈值
④运行时选项表
必选
一般不选
冲柱程序
方法-新建方法→编辑完整方法
编辑完整方法
①方法信息 ww
建议给予注释
②仪器/采集-设置泵
默认:999.99min 色谱柱:4.6mm,5μm 流速:1~2mL/min 一次运行结束后,到第二
样品复杂
次进样前的等候时间 泵输送流动相的初始状态 梯度洗脱 根据预实验确定采集时间
MeOH
H2O
20min
40min
20
40
※直接影响峰面积大小 改动要慎重 不影响峰面积大小 根据需要改动
1
2
3
4
5
6
7
8
9
1.选择工具(选中色谱峰) 2.基线连到此点 3.基线维持 4.拖尾峰撇去
5.“积分”开/关 6.斜率灵敏度 7.最小峰面积
谷底基线
8.固定峰宽
9.“检测肩峰”开/关
基线维持
19项参数
基线连到此点
“积分”开/关
多张色谱图使用同一尺寸显示或各自满量程显示的切换键
是否显示化合物名称的切换键 是否显示化合物保留时间的切换键
是否显示图谱基线的切换键 是否显示图谱标题信息的切换键 是否显示图谱坐标轴的切换键
打印当前窗口中的谱图 将当前窗口中的谱图拷贝到剪贴板中
在图谱上添加文字标注
在图谱上添加线形标注
在图谱上添加EMF格式的图形标注
lampall off(关灯)
pumpall (待机) off(关泵) Standby
另存为:冲柱.M
进样前准备
检查流动相
设置溶剂瓶填充量 泵的初始化 打开检测器 调出在线信号窗口
排气泡 以流动相置换各通道
DAD或VWD至少预热10min
检查流动相
稍微摇动溶剂瓶,检查是否有悬浮物。
程序打开该文件
HTM:将报告以超文本文件形式输出,可以使用IE浏览器
打开该文件
XLS:将报告以EXCEL文件形式输出
mHale Waihona Puke BaiduU
mAU
100
150
200
250
100
150
200
250
50
50
0 0 1
1 0
0
1.327 1.570
1.327 1.570 1.814
2
2
1.814
2.514 2.901
3
2.514
2.901 3.246
3
3.246
4
4
4.027 4.513
4.027
4.513
5
5
5.692
6
6
5.692
设定报告格式
报告格式
需编辑噪音范围
就近计算
PDF:输出可以移植文件格式 TXT:只输出报告的文本内容,以纯文本形式输出
CSV:将报告以逗点分隔数据库文件形式输出,可以用
Excel等程序打开该文件
EMF:将报告以EMF图形文件形式输出
DIF:将报告以数据交换文件形式输出,可以用Excel等
75
50
25
0 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 min
1 2 3 4 5 6 7 1.按照时间参考点进行横轴对齐 2.纵轴对齐 3.谱图复原
8 9 10 11 7.进行谱图积分
8.设置时间参考点 9.移动时间参考点 10.删除时间参考点
11.删除当前显示的谱图
4.进行多张谱图三维模拟显示
5.谱图镜像显示 6.谱图差减显示(扣空白)
※设置基线 ※校正基线
是否自动使用手动积分参数 对所有信号均适用的积分事件初始值
贯穿
无贯穿
是否自动使用手动积分参数 对所有信号均适用的积分事件初始值
设置未达到基线分离的峰积分方式
矮峰峰高 峰谷比= 谷高
峰谷比低于 设定值
峰谷比高于 设定值
基线校正选“高级”峰谷比才生效
是否自动使用手动积分参数 对所有信号均适用的积分事件初始值
mAU
100
150
200
250
50
0 0 1
1.327 1.570 1.814
2
2.514
2.901
3
3.246
4
4.027
4.513
5
5.692
6
6.256
7
7.205
8 9 min
多张色谱图分开显示或重叠显示的切换键
不显示保留时间、基线、图谱标题
归一化 225
200
175
150
125
100
设置时间参考点
按照时间参考点进行横轴对齐
纵轴对齐
进行多张谱图三维模拟显示
谱图镜像显示
谱图差减显示(扣空白)
积分参数设置
积分参数设置
编辑/设置积分事件表 自动积分 积分当前色谱图
查找当前色谱图的 合适积分参数
是否自动使用手动积分参数 对所有信号均适用的积分事件初始值
对前延或拖尾峰进行斜切处理 不校正基线
80
60
60min
80min
40
80
60
20
80′
40′
60′
0′
20′
②仪器/采集-设置进样器
标准:0.1~100μL
前一针样品运行过程中,把 下一针的样品瓶抓取到针座
运行停止前0.5 ~1min 前一针样品运行过程中,把下一 针样品吸入定量环,准备进样
②仪器/采集-设置柱温箱
②仪器/采集-设置检测器