微生物革兰染色法

2.固定
常用高温进行固定。即手持载破片一端，标本面朝上，在灯的火焰外侧快 速来回移 动3-4次，共约3-4秒。要求玻片温度不超过60度 , 以玻片背面触及手背皮肤不觉过
烫为宜，放置待冷后染色。
3.染色
4.镜检
革兰染色法步骤
革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、 复染等四个步骤，具体操作方法是： （1）涂片固定。 （2）草酸铵结晶紫染1分钟。 （3）自来水冲洗。 （4）加碘液覆盖涂面染约1分钟。 （5）水洗，用吸水纸吸去水分。 （6）加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色 ，20秒后水洗，吸去水分。 （7）沙黄染色液（稀）染1分钟后，自来水 冲洗。干燥，镜检。
革兰染色法影响因素
二、细菌因素
1、细菌培养时间 细菌的典型形态、染色性是在对数生长期，取这时的细
菌做革兰染色可以反应细菌的真实的染色性。如果细菌培养时间太长，变成 了老龄菌，染色性就会发生变化，可能会使革兰阳性菌染成革兰阴性菌。
2、培养基的成分 一般认为革兰阳性菌体内含有特殊的核蛋白质镁盐与多
糖的复合物，它与碘和结晶紫的复合物结合很牢，不易脱色。但是如果培养 基中缺乏核蛋白质镁盐就不能合成菌体成分的核蛋白质镁盐，细菌与碘和结 晶紫的复合物结合就不牢固，容易脱色，可能会使革兰阳性菌染成革兰阴性 菌。
（3）与致病性的关系
革兰染色法意义
革兰染色法结果
革兰染色法结果
革兰染色法结果
革兰染色法结果
革兰染色法结果
革兰染色法结果
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革兰染色法影响因素
三、染液因素
1、碘液 碘液作为媒染剂能增加染料与被染物的亲和力。如果碘液放置时间
太长，或经日光照射失效，失去媒染剂的作用，就可能使结晶紫与细菌结合 的不牢固，容易被脱色，使革兰阳性菌染成革兰阴性菌。
2、结晶紫 结晶紫的浓度太高，就会使染上的颜色不容易被酒精脱色，可
能会使革兰阴性菌染成革兰阳性菌。
3、固定方法 固定不仅能杀死细菌，改变细菌对染料的通透性，还能使细菌
吸附在玻片上，保持原有的形态结构。固定方法是将干燥后的细菌涂片以中 等速度通过火焰三次，以玻片触及手背皮肤热而不烫为宜。但在实际操作中 有的同学将玻片在火焰上烤的太久，改变了细菌原有的通透性，会使细菌的 染色性发生变化。影响了染色的结果。
革兰染色法影响因素
一、ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ作因素
1、涂片太厚 在涂片时细菌挑的太多，没法分开，在脱色时就不能将第一步
染上的结晶紫的颜色脱去，可能会使革兰阴性菌也出现紫色，误认为革兰阳 性菌。
2、脱色时间 阳性菌透性小，不易被脱色，阴性菌透性大，易脱色；但这是
在固定的时间条件下的结果，如果延长脱色时间，也会使脱色剂渗透进阳性 菌的细胞壁中，使染上的结晶紫脱去颜色，最后染上复红的颜色，变成革兰 阴性菌。而脱色时间太短的话又会使阴性菌染上的结晶紫不能完全脱色，出 现紫色，误认为革兰阳性菌。
革兰染色法
Gram‘s stain
革兰染色法
1.原理。 2.步骤。 3.影响因素。 4.意义。 5.结果判断。
革兰染色法原理
通过结晶紫初染和碘液 媒染后，在细胞壁内形成了 不溶于水的结晶紫与碘的复 合物，革兰氏阳性菌由于其 细胞壁较厚、肽聚糖网层次 较多且交联致密，故遇乙醇 或丙酮脱色处理时，因失水 反而使网孔缩小，再加上它 不含类脂，故乙醇处理不会 出现缝隙，，因此能把结晶 紫与碘复合物牢牢留在壁内 ，使其仍呈紫色；
3、酒精 酒精作为脱色剂，革兰染色的脱色酒精浓度为95% ，在此浓度下革
兰阳性菌染上的结晶紫不易被脱去，保留紫色，革兰阴性菌染上的结晶紫容 易被脱去，最后呈红色。但当酒精的浓度为70% 时，它的脱色能力最强，可 能使革兰阳性菌染上的结晶紫也被脱去，使革兰阳性菌染成革兰阴性菌。
革兰染色法意义
（1）鉴别细菌 （2）选择药物
革兰染色法原理
革兰氏阴性菌因其细胞 壁薄、外膜层类脂含量高、 肽聚糖层薄且交联度差，在 遇脱色剂后，以类脂为主的 外膜迅速溶解，薄而松散的 肽聚糖网不能阻挡结晶紫与 碘复合物的溶出，因此通过 乙醇脱色后仍呈无色，再经 沙黄等红色染料复染，就使 革兰氏阴性菌呈红色。
革兰染色法步骤
1.干燥
涂片后在室温下自然干燥，也可在酒精灯上略加温，使之迅速干燥，但勿靠近火焰。