血红蛋白测定

十二烷基硫酸钠血红蛋白（SDS-Hb）法： SDS
作为一种阴离子表面活性剂，具有轻度氧化作用。血液中除 SHb以外的所有血红蛋白均可与低浓度的SDS作用，亚铁血 红素被氧化成稳定的棕红色高铁血红素样复合物（SDSHb），最大吸收峰在538nm。
（二）操作步骤
1、氰化高铁血红蛋白测定法（直接定量测定法）
高铁氰化钾氧化为高铁离子（Fe3+），血红蛋白转化成高铁 血红蛋白（Hi）。Hi与氰化钾（KCN）中的氰离子反应生 成HiCN。HiCN最大吸收波峰为540nm，波谷为504nm。在 特定条件下，HiCN毫摩尔消光系数为44L/（mmol•cm）。 HiCN在540nm处的吸光度与浓度成正比，根据测得吸光度 可求得血红蛋白浓度。
ü 准备转化液：取一试管，加入5mlHiCN转化液。 ü 采血与转化：采集全血20μl，加到盛有转化液的
试管底部，与转化液充分混匀，静置5min。 ü 测定吸光度：用符合WHO标准的分光光度计，在
波长540nm处、光径为1.000cm、以HiCN试剂调 零，测定标本的吸光度（A）。 ü 计算 ： Hb(g / L) A 64458 251 A 367.7
（五）参考区间
成年：男性 120～160 g/L， 女性 110～150 g/L。
新生儿：170～200 g/L。
（六）临床意义
与红细胞计数相似，但判断贫血程度优于红细胞计数。 根据Hb浓度可将贫血分为4度：
轻度贫血：Hb＜120g/L（女性Hb＜110g/L）； 中度贫血：Hb＜90g/L； 重度贫血：Hb＜60g/L； 极重度贫血：Hb＜30g/L。 当RBC＜1.5×1012/L，Hb＜45g/L时，应考虑输血。
（三）方法学评价
HiCN测定法是WHO和国际血液学标准 化委员会ICSH推荐的参考方法，由于HiCN 试剂含有剧毒的氰化钾，各国均相继研发出 不含氰化钾的血红蛋白测定方法，有的测定 法已用于血液分析仪，但其标准应溯源到 HiCN量值。
血红蛋白测定的方法学评价
HiCN转化液的作用与评价
（四）质量保证
在某些贫血时，特别是某些红细胞内血红蛋白浓 度改变的贫血，红细胞和血红蛋白减少程度可不 一致。如缺铁性贫血，红细胞与血红蛋白降低的 程度常不平行，血红蛋白的降低比红细胞明显。 因此，同时测定红细胞和血红蛋白，对诊断更有 意义。
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2．十二烷基硫酸钠血红蛋白测定法 ü制备标准曲线：取4份不同浓度抗凝血分别用
HiCN 法及本法测定每份血液的血红蛋白浓度和吸 光度，以 HiCN 法测得的血红蛋白浓度为横坐标， 本法测得的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。 ü 测定：取应用液5ml于试管中，加入全血20μl充分 混匀。5min后置538nm下以应用液调零，测定其吸 光度，查标准曲线即可得出血红蛋白浓度。
二、血红蛋白测定（Hb，HGB）
血红蛋白是在人体有核红细胞及网织红细胞内合成 的一种含色素辅源自文库的结合蛋白质，是红细胞内的运 输蛋白。
每个Hb分子含有4条珠蛋白 肽链，每条肽链结合1个亚 铁血红素，形成具有四级空 间结构的四聚体，以利于结 合O2和CO2。
（一）检测原理
HiCN法：血红蛋白（SHb除外）中的亚铁离子（Fe2+）被