2014 细胞生物学实验课内容(细胞形态观察、细胞器活体染色、细胞骨架观察)

实验三细胞形态的观察

【实验目的】

1. 认识光学显微镜下细胞的形态结构；

2. 掌握临时制片和显微绘图的方法。

【材料、器材和试剂】

材料：人体口腔黏膜上皮细胞、洋葱鳞茎；

器材：显微镜、剪刀、镊子、载玻片、盖玻片、牙签、滤纸；

试剂：1%碘液。

【方法和步骤】

1. 口腔黏膜上皮细胞的制片与观察

口腔黏膜细胞涂片标本的制备：吸取一滴碘液滴在一张洁净的载玻片中央，用一根事先灭菌的牙签伸入自己的口腔内壁轻轻刮取黏膜上皮细胞，然后，将其放入载玻片上的染液中并来回搅动使细胞散开，染色1 min左右后小心加盖玻片（尽量避免产生气泡），用滤纸吸去盖玻片周围的液体。

观察：将自制的口腔黏膜上皮细胞标本装片置于显微镜下观察，先用低倍镜观察较分散的、轮廓清晰的黏膜上皮细胞。由于该细胞体积较小、着色较淡，观察时应稍降低视野亮度以便于较快找到目标（在低倍镜下，用碘液染色的细胞呈黄色，成群或分散分布，形态大小多呈扁平椭圆形）。选择轮廓清晰的细胞移至视野中央，转换至高倍镜下观察。在高倍镜下，可见口腔黏膜上皮细胞外围有一层薄薄的细胞膜，扁圆形的细胞核呈深黄色，细胞质呈浅黄色或浅蓝色，核中央致密的结构为核仁。

2. 洋葱鳞茎内表皮细胞的制片与观察

表皮细胞装片标本的制备：取一干净载玻片，在其中央滴一滴碘液，将洋葱鳞茎用小刀分为几块，取一块肉质鳞叶，用剪刀在内表皮划“田”字形小方格，每一小方格边长3-4mm，然后用镊子轻轻撕下一小方格的膜质表皮，置于载玻片的碘液滴中铺平，取一干净的盖玻片，将其一侧先接触标本旁的碘液，再缓缓地盖上盖玻片，尽量避免产生气泡，用滤纸吸去盖玻片周围的液体。

观察：将制备好的装片标本放到显微镜下，先用低倍镜观察，可见许多长柱状、排列整齐、彼此相连的细胞，选择其中一个典型的细胞移至视野中央，再转换至高倍镜下仔细观察细胞壁、细胞核、细胞质和液泡等结构。

【实验结果】

绘图并进行适当标注：人口腔黏膜上皮细胞和洋葱鳞茎内表皮细胞。

【讨论】

简述观察细胞形态时，制作临时装片和显微镜镜检时的注意事项。

实验四线粒体和液泡系的活体染色

【实验目的】

1. 掌握一些细胞器的超活性染色技术和原理。

2. 观察动物、植物细胞内线粒体和液泡系的形态、数量和分布。

【材料、器材和试剂】

材料：人体口腔黏膜上皮细胞、洋葱；

器材：显微镜、牙签、镊子、剪刀、载玻片、盖玻片；

试剂：Ringer溶液；1/5000詹纳斯绿B溶液；1/3000中性红溶液。

【方法和步骤】

1. 线粒体的超活染色与观察

（1）人体口腔黏膜上皮细胞线粒体的超活染色和观察

①取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上，滴2滴1/5000詹纳斯绿B染液；

②用一根预先灭菌的牙签伸入自己的口腔内壁轻轻刮取黏膜上皮细胞，将刮下的粘液状物放入载玻片的染液滴中，染色10-15min（注意不可使染液干燥，必要时可再加一滴染液），盖上盖玻片，用吸水纸吸去四周溢出的染液，置于显微镜下观察；

③在低倍镜下，选择平展的口腔黏膜上皮细胞，转换高倍镜进行观察。可见扁平状上皮细胞的核周围胞质中，分布着一些被染成蓝绿色的颗粒状或棍棒状的线粒体。

（2）洋葱鳞茎内表皮细胞线粒体的超活染色和观察

①用吸管吸取1/5000詹纳斯绿B染液，滴一滴在干净的载玻片上，然后用镊子撕取洋葱鳞茎内表皮一小块，置于染液中，染色10-15min；

②吸去染液，加一滴Ringer液，注意使内表皮展平，盖上盖玻片，显微镜下观察。在高倍镜下，可见表皮细胞中央被一大液泡所占据，细胞核被挤至旁边，线粒体染成蓝绿色，呈颗粒状或线条状。

2. 液泡系的超活染色和观察

①洋葱鳞茎内表皮一小块，置于1/3000中性红溶液中，染色5-10min；

②吸去染液，加一滴Ringer液，注意使内表皮展平，盖上盖玻片，显微镜下观察，可见被染成砖红色的中央大液泡。

【实验结果】

1. 根据实验观察，绘制洋葱鳞茎内表皮细胞和人体口腔黏膜上皮细胞线粒体分布图。

2. 根据实验观察，绘制洋葱鳞茎表皮细胞指示液泡系的形态和分布。

【讨论】

1. 简述线粒体詹纳斯绿B活体染色和液泡系中性红活体染色的原理；

2. 分析线粒体和液泡系活体染色时需要注意的事项。

3. 细胞内线粒体的形态和分布有何特点？

实验五植物细胞骨架的光学显微镜观察

【实验目的】

了解细胞骨架的结构特征及其样品制备技术。

【材料、器材和试剂】

材料：洋葱鳞茎；

器材：普通光学显微镜、5Oml烧杯、玻璃滴管、容量瓶、试剂瓶、载玻片、盖玻片、镊子、小剪刀、吸水纸、擦镜纸；

试剂：M 缓冲液；6mmol/L（pH 6.8）磷酸缓冲液；1% Triton X-100；0.2%考马斯亮蓝R250；3%戊二醛。

【方法和步骤】

1. 撕取洋葱鳞茎内表皮（约lcm2大小若干片）置于装有pH 6.8磷酸缓冲液的50ml烧杯中，使其下沉；

2. 吸去磷酸缓冲液，用l% Triton X-100处理20-30min；

3. 吸去Triton X-100，用M缓冲液洗3次，每次10min；

4. 3%戊二醛固定O.5-lh；

5. pH

6.8磷酸缓冲液洗3次，每次10min；

6. 0.2%考马斯亮蓝R250染色20-30min；

7. 用蒸馏水洗1或2次，细胞置于载玻片上，加盖玻片，于普通光学显微镜下观察。【实验结果】

绘制洋葱鳞茎表皮细胞微丝束的分布图。

【讨论】

1. 阐述采用考马斯亮蓝R250染色法显示微丝的原理；

2. 分析和论述在光学显微镜下观察到的细胞骨架的形态特征。