第章血细胞分析

三、HGB浓度的测定原理
❖ 比色法：氰化高铁血红蛋白（HiCN）测定法
十二烷基硫酸钠血红蛋白（SDS）测定法
五、血液定量方法
❖ 临床上的细胞计数是指单位体积内的细胞数。 ❖ 通常红细胞、白细胞和血小板的计量均指每
升细胞数量。 ❖ 设被测血量的体积为Y（一般20μl），稀释倍
数为C，计数结果为S，则每升内细胞数X为： X=CS/Y
血液的基本组成
血浆
白细胞和血小板 红细胞
❖ 液体的血浆占50-60% ❖ 血细胞占40-60%（白细胞、血小板、红细胞）。
❖ 白细胞
❖寿命：7天 ❖体积：60~120fl ❖直径：(20 um) ❖功能：抗感染，免疫
红细胞
120天 120~1000fl (6.7~7.7um) 携氧，代谢产物
血小板
白细胞 中性粒细胞比率 淋巴细胞比率 单核细胞比率 嗜酸性粒细胞比率 嗜碱性粒细胞比率 中性粒细胞 淋巴细胞 单核细胞 嗜酸性粒细胞 嗜碱性粒细胞
109/L % % % % %
109/L 109/L 109/L 109/L 109/L
4-10 50-75 20-40
3-8 0-3 0-2 2-7 0.8-4 0.12-1 0-0.3 0-0.2
3、PLT直方图
❖ 仪器在2-36fl范围内分析PLT，正常呈左偏态 分布，主要集中在2-20fl范围内。
正常直方图形态
4、白细胞直方图临床意义
异常白细胞直方图
5、红细胞直方图临床意义
❖ 仪器在25-250fl内分析RBC，正常RBC主要 分布在50-150fl范围内，呈左偏态分布。
❖ 通过观察图形峰的位置，峰底宽度，峰顶 的形状及有无双峰现象来判断贫血的类型。
❖ 标本的处理：此技术首先加入红细胞溶血剂 溶解掉红细胞，然后加入稳定剂来中和红细 胞溶解剂的作用，使白细胞表面、胞浆和细 胞体积保持稳定不变。然后应用鞘流技术将 细胞推进到流动细胞计数池（Flowcell）中， 接受仪器VCS三种技术的检测。
容量、电导、光散射检测技术（VCS） (Volume、conductivity、light scatter)
手工法计数 仪器简单计数 两分群 三分群 五分群 五分群＋网织红
手工法检验的过程
1、细胞计数（红细胞、白细胞、血小板等血细胞的 显微镜下计数）
2、定量血红蛋白 3、白细胞分类（瑞氏染色） 4、其它：血细胞比积、红细胞形态、嗜酸性粒细胞
计数等
血细胞分析仪发展
❖ 50年代~80年代（半自 动）：需将样本经机外稀释 后才能检测，易受干扰，随 机误差也大。
1、采用阻抗、激光散射和荧光染色技术检测法
❖ 主要用于SYSMEX开发的仪器中。
❖XT-1800i
❖XS-1000i
2、电阻抗和射频电导联合检测法
❖ 典型机型如Sysmex SE-9000/SE-9500/XE2100等。
❖ 这类仪器共有四个不同的检测系统，将标本 用特殊细胞染色技术处理后再应用RF和DC 技术对白细胞进行分类和计数。
8天 2~30fl (2~3um) 凝血功能
白细胞的种类
• 中性粒细胞（70%） • 单核细胞（5%） • 淋巴细胞（25%） • 嗜酸性粒细胞 • 嗜碱性粒细胞
•
经过瑞氏染色后的各种白细胞
❖ 血液分析仪器是临床实验室最常用的分析仪器，包括： 血细胞分析仪 血液凝固分析仪 血液流变学分析仪
历史
Sysmex HST530全自动血液分析流水线
血细胞检测基本原理
一、粒子检出原理 1、电阻抗原理（Coulter原理） 2、激光散射光检出原理 3、交流（电阻）检出原理
1、电阻抗原理（Coulter原理）
❖ 库尔特原理：将血液按一定比例稀释于等渗 溶液中，在小孔电极的两侧加一恒流源。在 负压作用下，使稀释的血细胞通过小孔。当 细胞通过截面时会由于电阻增大产生相应的 脉冲，其脉冲的幅度与细胞的体积成正比， 脉冲的频度与细胞的数量成正比。这便是著 名的库尔特原理或称变阻脉冲原理。
量。 ❖ 4） 90°消偏振光散射，基于颗粒可以将垂直角度
的偏振激光消偏振的特性，将酸嗜细胞从中性粒细 胞和其它细胞中分离出来。 ❖ 5） 这四个角度进行测量和分析后，可将白细胞划 分为嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、嗜碱性粒细胞、 淋巴细胞和单核细胞5种。
4、电容、电导、光散射（VCS）白细胞分类法
❖ 这是Beckman-Coulter公司血细胞分析仪的经 典分析方法
细
胞
单核
大 小
淋巴
嗜碱
颗粒复杂程度
中性
嗜酸
80-92 27-31 320-360 11.5-16.5 37-54
3、血小板检测相关项目
PLT MPV
血小板 平均血小板体积
109/L 100-300
fl
5-10
PCT
血小板压积
0.15-0.3
PDW-CV 血小板平均分布宽度CV
%
9-17
P-LCR
大血小板比例
%
19-47
血细胞直方图
❖ 直方图是血细胞分析仪用电阻抗原理对血细胞进行 检测，以细胞体积为横坐标，细胞的相对数量为纵 坐标，表示某一种细胞数量分布情况，可反映细胞 体积大小异质性。
1、WBC正常直方图
❖ 仪器在3-300fl范围内分析WBC采用四条与纵 坐标平行的虚线（P25），划分三个区域来 鉴别小型WBC (定为淋巴细胞)，中型WBC (定为单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细 胞)、大型WBC (定为中性粒细胞)。
2、RBC直方图
❖ 仪器在25-250fl内分析RBC，正常RBC主要 分布在50-150fl范围内，呈左偏态分布。
2、红细胞检测相关项目
RBC HGB HCT MCV MCH MCHC RDW-CV RDW-SD
红细胞
1012/L
血红蛋白
g/L
红细胞压积
红细胞平均体积
fl
平均红细胞血红蛋白量
pg
平均红细胞血红蛋白浓度 g/L
红细胞分布宽度变异系数
%
红细胞分布宽度标准差
fl
3.5-5.5 110-160 0.37-0.50
3、多角度激光偏振光散射检测法
❖ 美国雅培公司（ABBOTT）推出的血细胞分 析仪，在白细胞分类中采用独特的多角度偏 振光散射（MAPSS）技术。
❖ 1） 0°为前向角散射光，可粗略地测定细胞大小； ❖ 2） 10°为狭角散射光，可测细胞结构及其复杂性
的相对特征； ❖ 3） 90°垂直光散射，主要对细胞内部颗粒进行测
1、样品旋转阀SRV：
❖ 优点：故障率低.血液 吸引管内的一点点堵塞 不影响定量，由于取的 是中段血，血液定量很 稳定。
分阀血
❖ 缺点：血液样品有浪费， 需要血液量较多，制作 成本高。
标本分配技术： SRV阀(SYSMEX 专利)
前片
中片(旋转片)
进样针
后片
恒定的、精确的体积
SRV中有高精度的小孔，阀门中片的全血(或稀释血)传输 至检测器，在每次检测后，SRV阀对内部小孔进行清洗
2、激光散射光检出原理
明确两个概念： 什么是激光？ 什么是散射？
鞘流技术
❖ 为了能够更好的从物理上最大限度地减少重 合现象，开发了鞘流法。
❖ 具体方法为：用一毛细管对准小孔管，细胞 单纯悬液从毛细管喷嘴喷出，同时与四周流 出的鞘液一起流过敏感区，保证细胞悬液在 中间形成单个排列的细胞液，四周被鞘液包 绕。
F820血细胞分析仪（两分群）
血细胞分析仪发展
❖ 80年代后（全自 动）：血液直接被 吸入血液细胞分析 仪后，在机内自动 稀释、自动加溶血 素、定时检测，有 较高的精确度和准 确性。
Sysmex XS-1000i五分类血细胞分析仪
血细胞分析仪发展
❖ 近年（联合型血液细胞分析系统）：将血细胞分析、 涂片机、染片机、网织红细胞计数仪串联在一起。 自动加样系统和真空采血管的应用，避免实验室的 随机误差，提高工作效率，成为仪器发展和使用的 潮流。
1、手工检测----毛细血管离心法
❖ 包括温氏法（Wintrobe法）、微量法：是将 抗凝血置于孔径统一的温氏管或毛细玻管中， 以一定转速离心一定时间后，计算红细胞层 占全血的体积比。
❖ HCT值=（RBC总体积/血液总体积）X100%
2、血细胞分析仪检测法
❖ 原理是当细胞通过计数小孔时，形成相应大 小的脉冲，脉冲的多少即为细胞数量，脉冲 高度为细胞体积，通过红细胞平均体积 （MCV）和红细胞计数（RBC）即求得血细 胞比容： HCT=MCV×RBC
血液的功能
❖通过循环系统与全身各个组织器官密切联系。 ❖参与机体呼吸：携氧和排出二氧化碳。 ❖运输：将营养物质运送到器官组织，将体内代谢 废物运往肾、肺等器官排出体外。 ❖防御：血液中白细胞和抗体参与机体抗感染和其 他免疫反应。 ❖调节：调节体液渗透压、酸碱平衡和体温平衡。
❖ 将正常血液抗凝离心后得到沉淀的血液。
2Байду номын сангаас注射式
❖ 优点：马达转速控制简单，流速、定量都 可改变，用于微量血液定量，需要血液量 较少，成本低。
❖ 缺点：密封问题较难解决，2-3年需更换密 封装置。
注射器式
气泡或残留物
由于全血标本粘度比血清高，当注射器 针筒中有气泡或残留物时，其分血精度 不准确。
3、薄膜泵(DP方式)
❖ 优点：耐用，稳定，4-5年也不需更换； ❖ 缺点：不容易控制容积，需正、负压，成本
医疗检验仪器 原理、应用及维修
白云区第二人民医院检验科 周振华
第一章 血细胞分析
内容提要
❖ 血液的常识 ❖ 仪器原理 ❖ 临床应用 ❖ 常见故障及维修
血液概况
❖ 理化特征： 红色（血红蛋白）不透明，含量占体
重的7-9%，约5L。 PH值为7.35~7.45 比重为1.05~1.06 相对粘度为4~5 渗透压为2.6~3.9kPa
鞘流技术示意图
前鞘流
检测窗
后鞘流
鞘流技术示意图
3、交流（电阻）检出原理
❖ 也叫射频检测原理
细胞壁不能使低频电流通过，能通过高频电
流。细胞核的大小和密度不同，它们对高频 电流的阻抗也不同，因此可以用来区分白细 胞。
二、HCT体积测定原理
❖ 血细胞比容（红细胞压积）（Hct、Ht、HCT 或PCV）是指在一定条件下，经离心沉淀压 紧的红细胞在全血样本中所占比值。
1987年 美国BECKMAN COULTER 公司发明VCS技术。
电阻抗
电导性
光散射
第三节 血细胞分析临床应用
❖ WBC、RBC、PLT相关项目(P20) ❖ WBC、RBC、PLT直方图(P24)
1、白细胞检测相关项目
WBC NE% LY% MO% EO% BA% NE# LY# MO# EO# BA#
较高。
薄膜泵绝对定量
真空
正压
通常状态
吸液状态
排液状态
标本计数的体积不会因为小孔的半堵塞而 发生变化。
五分类血细胞分析仪检测方法
1、阻抗、激光散射和荧光染色检测法 2、电阻抗和射频电导联合检测法 3、多角度激光偏振光散射检测法 4、电容、电导、光散射（VCS）白细胞分类
法。 5、激光散射和细胞化学染色技术
贫血分类（P21）
❖ 1、Wintrobe分类法（MCV、MCH、MCHC）
❖ 2、Bessman分类法（MCV/RDW）
❖ 3、贫血病因学分类（生成减少、破坏过多、 外在异常、丢失）
6、血小板直方图临床意义。
仪器在2-36fl范围内分析PLT，正常呈左偏态 分布，主要集中在2-20fl范围内。