血清总胆汁酸TBA测定

血清总胆汁酸TBA测定

1 检验目的

指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。

2 实验原理

胆汁酸被3α-羟甾醇脱氢酶（3α-HSD）以及β-硫代烟酰尿嘧啶二核苷酸氧化型（Thio-NAD）特异性氧化，生成3-酮类固醇以及β-硫代烟酰尿嘧啶二核苷酸还原型（Thio-NADH）。此外，生成的3-酮类固醇在3α-羟甾醇脱氢酶及还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）存在下，生成胆汁酸及氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）。在上述循环酶反应过程中，还原型β-硫代烟酰尿嘧啶二核苷酸（Thio-NADH）的生成量与样本中被放大的微量胆汁酸浓度成正比。通过在405nm处测定固定时间内吸光度的变化值，即可测得样本中总胆汁酸的浓度。

3 标本：

3.1 病人准备：标本以空腹血清为宜，餐后胆汁酸会升高，应注意采血时间。

3.2类型：血清、肝素或EDTA处理的血浆。应使用新鲜标本。标本需避光保存。

3.3 标本存放4℃保存可稳定7天，-20℃保存可稳定3个月。

3.4 标本运输常温条件下避光保存运输。

3.5 标本拒收标准细菌污染的标本。

4 实验材料

4.1 试剂：上海复星长征医学科学有限公司TBA试剂盒（沪食药监械（准）字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014）4.1.1 试剂组成

试剂1（R1）β-硫代烟酰尿嘧啶二

核苷酸（氧化型）

Good，s缓冲液

952.9mg/L

试剂2（R2）β-还原型辅酶I

6.1g/L

3α-羟甾醇脱氢酶 12500U/L

4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。

4.1.3 试剂稳定性与贮存：在2～8℃避光、密封的储存条件下，试剂（盒）自生产之日起有效期为12个月。试剂启用后，在2～10℃避光的条件下可稳定30天。

4.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。

4.1.5 注意事项：不可入口！避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂

4.2 校准品：使用上海复星长征医学科学有限公司提供的TBA校准品对自动分析仪进行校准。

4.3 质控品：使用正常值、病理值复合控制品。

5 仪器

AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪

6 操作步骤

6.1 样品的准备：将标好号的样品离心后放到仪器规定的位置。

6.2 试剂的检测：仪器开机后，检查各种试剂的位置，体积等确认无误后方可进行测定。

6.3 项目基本参数：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪项目测定参数。

6.4仪器操作步骤：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪操作规程。

7 质量控制

在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。

8 计算方法

以TBA复合校准品校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以μmol/L报告。

9 参考值范围

成年人： <10μmol/L

参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。

我室的参考范围:0-10μmol/L

10 临床意义

当患有肝脏疾病和胆酸吸收受阻时，进入血中的胆酸增加。在急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化、肝癌疾病时，总胆汁酸都有不同程度的升高。另外，总胆汁酸升高还见于胆汁淤积、胆管阻塞、胆囊炎等慢性疾病。

11 操作性能

11.1试剂空白吸光度：≤0.60A。

11.2线性范围：200μmol/L±10%，线性相关系数（r）≥0.990。

11.3准确度：用相对偏差（RE%）表示测定结果的不准确度，相对偏差（RE%）≤±10%。

11.4精密度：(1)批内精密度：变异系数（CV%）≤5%；(2)批间精密度：相对极差（%）≤10%。

12 超出范围结果处理

本法的检测范围为1～200μmol/L。当样品测定值超过上限时，应将样品用9g/L氯化钠溶液作1:4稀释，重新测定，结果乘以5。

13 病危报警值的处理

无警告/危急值

14 方法局限性

14.1测定结果的准确性依赖于对所使用分析仪器校准、测定温度和测定时间的控制。

14.2鹅去氧胆酸、熊去氧胆酸、胆酸钠、乳酸脱氢酶等可使测定结果产生假性增高。

14.3胆固醇测定试剂与脂肪酶测定试剂可对测定结果产生干扰，测定过程中应分开。