TBE-300B型高速逆流色谱分离仪讲解
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我国还是继美国、日本之后最早开展逆流色谱应用的国家, 也是世界上高速 逆流色谱仪生产国之一。HSCCC被北京新技术应用研究所的张天佑教授和上 海同田生化技术有公司的邓秋云先生进一步改进。
引用文献： 姚舜, 柳仁民, 黄雪峰,等. 高速逆流色谱在天然产物分离中的方法学 研究[J]. 中国天然药物, 2008, 6(1) : 13-19.
引用文献
牛丹丹, 刘彩霞, 刘绣华,等. 高速逆流色谱法分离制备花生壳中的黄酮类化合物[J]. 天然 产物研究与开发, 2011, 23 : 110-113,158.
溶剂体系的选择
溶剂体系的选择原则 (1 ) 溶剂系统不会造成样品的分解或变性; (2) 足够高的样品溶解度; (3) 溶剂系统不会干扰样品的检测。 (4) 各个组分在其两相的分配系数在 0 .5 ~ 5 之间, 且有一定的差值。 (5) 溶剂系统的分相时间不超过 30 s。 (6) 尽量采用沸点低的溶剂, 以方便后续处理。 (7)尽量避免使用毒性大的溶剂
高速逆流色谱应用
目前，应用高速逆流色谱法在提取分离天然产物中的黄酮、生物碱、香豆素、 萜类、木脂素、皂苷、多酚类和蒽醌类衍生物等有效成分方面已获得满意结 果。
➢ 柳仁民等采用高速逆流色谱分离纯化秦皮中香豆素成分，以正丁醇-甲醇0.5%乙酸（5：1.5：5，v/v）为两相溶剂系统，经过单次分离，从150mg秦 皮粗提物中分离得到14.3mg的秦皮苷(fraxin)、26.5mg的秦皮甲素(f aesculin) 、5.8mg的秦皮素(fraxetin)、32.4mg的秦皮乙素(aesculetin)，纯度分别为 97.6%、99.5%、97.2%、98.7%
高速逆流色谱原理
➢ 高速逆流色谱(high-speed counter-current chromatography, HSCCC）是一种连续高效的液 - 液分配色谱技术。由于不需要固体支 撑体, 物质的分离依据其在互不相溶的两相液体中的分配系数的差异 而实现, 因而避免了固体固定相不可逆吸附而引起的样品损失、 失 活、 变性等问题, 样品回收率高, 回收的样品更能反映其本来的特 性, 特别适合于天然产物中有效成分的分离。
引用文献：刘宁宁, 李爱峰, 柳仁民. 高速逆流色谱在分离纯化中草药黄酮类 成分中的应用[J]. 化学试剂, 2008, 30(5) : 346-350.源自溶剂体系的选择原则如下表所示
分离成分的溶解特性
适宜溶剂体系
强极性或水溶性成分
正丁醇-乙酸-水、正丁醇-甲醇-水、正丁醇-乙酸乙酯-水、乙酸乙酯-水
➢ 牛丹丹等应用高速逆流色谱法首次从花生壳中分离制备了3种黄 酮类化合物。以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水-冰醋酸( 5: 3: 3. 5: 5: 0. 25, v /v)为两相溶剂系统, 在主机转速800 r /m in、流速2 mL /m in、检测波长275 nm 条件下进行分离制备, 纯度用HPLC 法 测定, 各化合物结构经质谱和核磁共振氢谱、碳谱鉴定。结果表 明, 100 min内从70 mg 花生壳粗提物中一步分离制备得到木犀 草素11.0 mg, 香叶木素2.2 mg, 5, 7-二羟基色原酮5.2 mg, 其纯 度均达96. 0% 以上。
中等极性或氯仿提取 成分
氯仿-甲醇-水、乙酸乙酯-甲醇-水、正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水、石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水
弱极性成分
正己烷-乙腈、正己烷-甲醇-水、正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水、石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水
引用文献：曹学丽.高速逆流色谱技术及应用［M］.北京: 化学工业出版社， 2004: 44.
溶剂体系的选择方法
溶剂体系的选择方法有多种, 如参比已知的溶剂体系、 HPLC 法、测定分配系数、薄层色谱法( TLC) 、 生物活性物质分配 比率法、 分析型HSCCC法等。目前较为常用的方法为 HPLC 法 和 TLC 法。
引用文献：Renmin Liu , Qinghua Sun, Ailing Sun,等. Isolation and purification ofcoumarin compounds from Cortex fraxinusby high-speed counter-current chromatography.Journal of Chromatography A, 1072 (2005) 195–199.
➢高速逆流色谱仪器的装置如图 1 所示, 它的公转轴水平设置, 螺旋管柱 距公转轴 R 处安装, 两轴线平行。通过齿轮传动, 使螺旋管柱实现在绕仪 器中心轴线公转的同时, 绕自转轴作相同方向相同角速度的自转。
引用文献：李爱峰, 刘宁宁, 柳仁民. 高速逆流色谱原理及其在天然产物化学 成分分离中的应用研究进展[J]. 理化检验-化学分册, 2008, 44(5) : 481-489.
➢ 利用螺旋柱在行星运动时产生的离心力，使互不相溶的两相不断混合 ，同时保留其中的一相（固定相），利用恒流泵连续输入另一相（流 动相），此时在螺旋柱中任何一部分, 两相溶剂反复进行着混合和静 置的分配过程，流动相不断穿过固定相, 随流动相进入螺旋柱的溶质 在两相之间反复分配，按分配系数的大小次序，被依次洗脱
TBE-300B型高速逆流色谱分离仪 2015.01.06
目录
高速逆流色谱发展历程 高速逆流色谱原理及应用 溶剂体系的选择 系统组成及流路连接 仪器的操作 常见问题及解决方法 定期清洗维护
高速逆流色谱发展历程
高速逆流色谱 ( high -speed counter -current chromatography , HSCCC ) 是由美国国立卫生研究院 (National Institute of Health, NIH ) 的 Yoichiro Ito博士于20世纪80年代发明的一种基于液-液分配机理的新型色 谱分离纯化技术。高速逆流色谱用于天然药物化学成分的分离始于1985年, 到1988年、1989年达到一个高潮, 期间发表了大量的文章。经过几十年的实 验研究, 特别是近十多年高速逆流色谱的发展, 使得它在生物工程、 医药 、生化、植化、农业、化工、环境、海洋科学 、无机化学等广泛领域显现 出越来越高的实用价值。
引用文献： 姚舜, 柳仁民, 黄雪峰,等. 高速逆流色谱在天然产物分离中的方法学 研究[J]. 中国天然药物, 2008, 6(1) : 13-19.
引用文献
牛丹丹, 刘彩霞, 刘绣华,等. 高速逆流色谱法分离制备花生壳中的黄酮类化合物[J]. 天然 产物研究与开发, 2011, 23 : 110-113,158.
溶剂体系的选择
溶剂体系的选择原则 (1 ) 溶剂系统不会造成样品的分解或变性; (2) 足够高的样品溶解度; (3) 溶剂系统不会干扰样品的检测。 (4) 各个组分在其两相的分配系数在 0 .5 ~ 5 之间, 且有一定的差值。 (5) 溶剂系统的分相时间不超过 30 s。 (6) 尽量采用沸点低的溶剂, 以方便后续处理。 (7)尽量避免使用毒性大的溶剂
高速逆流色谱应用
目前，应用高速逆流色谱法在提取分离天然产物中的黄酮、生物碱、香豆素、 萜类、木脂素、皂苷、多酚类和蒽醌类衍生物等有效成分方面已获得满意结 果。
➢ 柳仁民等采用高速逆流色谱分离纯化秦皮中香豆素成分，以正丁醇-甲醇0.5%乙酸（5：1.5：5，v/v）为两相溶剂系统，经过单次分离，从150mg秦 皮粗提物中分离得到14.3mg的秦皮苷(fraxin)、26.5mg的秦皮甲素(f aesculin) 、5.8mg的秦皮素(fraxetin)、32.4mg的秦皮乙素(aesculetin)，纯度分别为 97.6%、99.5%、97.2%、98.7%
高速逆流色谱原理
➢ 高速逆流色谱(high-speed counter-current chromatography, HSCCC）是一种连续高效的液 - 液分配色谱技术。由于不需要固体支 撑体, 物质的分离依据其在互不相溶的两相液体中的分配系数的差异 而实现, 因而避免了固体固定相不可逆吸附而引起的样品损失、 失 活、 变性等问题, 样品回收率高, 回收的样品更能反映其本来的特 性, 特别适合于天然产物中有效成分的分离。
引用文献：刘宁宁, 李爱峰, 柳仁民. 高速逆流色谱在分离纯化中草药黄酮类 成分中的应用[J]. 化学试剂, 2008, 30(5) : 346-350.源自溶剂体系的选择原则如下表所示
分离成分的溶解特性
适宜溶剂体系
强极性或水溶性成分
正丁醇-乙酸-水、正丁醇-甲醇-水、正丁醇-乙酸乙酯-水、乙酸乙酯-水
➢ 牛丹丹等应用高速逆流色谱法首次从花生壳中分离制备了3种黄 酮类化合物。以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水-冰醋酸( 5: 3: 3. 5: 5: 0. 25, v /v)为两相溶剂系统, 在主机转速800 r /m in、流速2 mL /m in、检测波长275 nm 条件下进行分离制备, 纯度用HPLC 法 测定, 各化合物结构经质谱和核磁共振氢谱、碳谱鉴定。结果表 明, 100 min内从70 mg 花生壳粗提物中一步分离制备得到木犀 草素11.0 mg, 香叶木素2.2 mg, 5, 7-二羟基色原酮5.2 mg, 其纯 度均达96. 0% 以上。
中等极性或氯仿提取 成分
氯仿-甲醇-水、乙酸乙酯-甲醇-水、正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水、石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水
弱极性成分
正己烷-乙腈、正己烷-甲醇-水、正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水、石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水
引用文献：曹学丽.高速逆流色谱技术及应用［M］.北京: 化学工业出版社， 2004: 44.
溶剂体系的选择方法
溶剂体系的选择方法有多种, 如参比已知的溶剂体系、 HPLC 法、测定分配系数、薄层色谱法( TLC) 、 生物活性物质分配 比率法、 分析型HSCCC法等。目前较为常用的方法为 HPLC 法 和 TLC 法。
引用文献：Renmin Liu , Qinghua Sun, Ailing Sun,等. Isolation and purification ofcoumarin compounds from Cortex fraxinusby high-speed counter-current chromatography.Journal of Chromatography A, 1072 (2005) 195–199.
➢高速逆流色谱仪器的装置如图 1 所示, 它的公转轴水平设置, 螺旋管柱 距公转轴 R 处安装, 两轴线平行。通过齿轮传动, 使螺旋管柱实现在绕仪 器中心轴线公转的同时, 绕自转轴作相同方向相同角速度的自转。
引用文献：李爱峰, 刘宁宁, 柳仁民. 高速逆流色谱原理及其在天然产物化学 成分分离中的应用研究进展[J]. 理化检验-化学分册, 2008, 44(5) : 481-489.
➢ 利用螺旋柱在行星运动时产生的离心力，使互不相溶的两相不断混合 ，同时保留其中的一相（固定相），利用恒流泵连续输入另一相（流 动相），此时在螺旋柱中任何一部分, 两相溶剂反复进行着混合和静 置的分配过程，流动相不断穿过固定相, 随流动相进入螺旋柱的溶质 在两相之间反复分配，按分配系数的大小次序，被依次洗脱
TBE-300B型高速逆流色谱分离仪 2015.01.06
目录
高速逆流色谱发展历程 高速逆流色谱原理及应用 溶剂体系的选择 系统组成及流路连接 仪器的操作 常见问题及解决方法 定期清洗维护
高速逆流色谱发展历程
高速逆流色谱 ( high -speed counter -current chromatography , HSCCC ) 是由美国国立卫生研究院 (National Institute of Health, NIH ) 的 Yoichiro Ito博士于20世纪80年代发明的一种基于液-液分配机理的新型色 谱分离纯化技术。高速逆流色谱用于天然药物化学成分的分离始于1985年, 到1988年、1989年达到一个高潮, 期间发表了大量的文章。经过几十年的实 验研究, 特别是近十多年高速逆流色谱的发展, 使得它在生物工程、 医药 、生化、植化、农业、化工、环境、海洋科学 、无机化学等广泛领域显现 出越来越高的实用价值。