单细胞全基因组扩增试剂盒产品说明书-中

单细胞全基因组扩增试剂盒 v1302.1
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•转基因动物基因分型 •胚胎和干细胞研究 •单精子分型 肿瘤： •体细胞遗传变异分析 •肿瘤进化和发展 •肿瘤干细胞 •循环肿瘤细胞 细菌: •宏基因组学研究 •微生物基因分型
样本要求
样本数量 本试剂盒是针对单细胞的全基因组扩增设计的，同时适用于起始
模板量为单染色体或范围在 0.5pg 级至 1 ng 级的基因组 DNA。 样品收集方式
单细胞全基因组扩增试剂盒 v1302.1
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基本原理
单细胞全基因组扩增试剂盒可实现高度均一的全基因组扩增，其 核心技术为多次退火环状循环扩增（MALBAC）技术[1]，该技术利用 独特的具有链置换活性的 DNA 聚合酶进行准线性的全基因组预扩增， 通过 PCR 进行指数式扩增，为下游分析提供充分的实验材料。
自备材料
PCR 仪 PCR 管 移液器 移液器吸头 制冰机 微型离心机 -20°C 冰箱 漩涡混和仪
单细胞全基因组扩增试剂盒 v1302.1
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紫外分光光度计 无核酸酶水 1X PBS buffer
产品简介
单细胞全基因组扩增试剂盒能够在 4 小时内，从单细胞或者等量 DNA 中有效扩增出 2-4µg 的全基因组 DNA。本试剂盒也可用于其他 DNA 模板量有限的情况，例如，少于百个细胞或低于 ng 级的 DNA。 对于大多数的哺乳动物细胞，例如，单个胚胎分裂球、极体、单细胞、 精子，本试剂盒均可获得 95%以上的基因扩增成功率，并可实现 AT-GC 富集区的成功扩增。本试剂盒可从微量样本中进行高度重复的扩增， qPCR 的 Ct 值经多个单细胞重复反应后均可得到大于 0.9 的相关系 数。本试剂盒能够扩增 90%以上的基因座，产物可用于多个分析平台， 例如实时定量 PCR 和高通量测序。
通过流式分选，缓冲液稀释和显微操作等方式获得的单细胞均可 利用本试剂盒进行全基因组扩增。虽然活细胞扩增的结果较为理想， 但本试剂盒对于经过多聚甲醛固定或激光微切割的样品，同样适用。 样本预处理
为减少细胞准备过程中 DNA 的污染，建议您在实验前对细胞进 行清洗，清洗液为不含 Mg2+和 Ca2+的 1×PBS 溶液，保证带入后该实 验中的 PBS 溶液的体积不得超过 1 µL.
单细胞全基因组扩增试剂盒 v1302.1
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规格成分
本单细胞全基因组扩增试剂盒由 DNA 提取和全基因组扩增试剂 组合而成，可用于 10 次(Cat: YK001A)或 50 次全基因组扩增反应 (Cat: YK001B)。
成分
YK001A （10 次包装）
细胞裂解液（不包含酶）
100 µL
细胞裂解酶
产物=2-4 µg
图 1:单细胞全基因组扩增流程
单细胞全基因组扩增试剂盒 v1302.1
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具体步骤
细胞裂解： 1. 根据反应的数量（N），混合 Cell Lysis Buffer 和 Cell Lysis Enzyme ， 用于准备细胞裂解混合液。
细胞裂解混合液 Cell Lysis Buffer (蓝盖) Cell Lysis Enzyme (蓝盖)
产品特点
•哺乳动物单细胞经扩增后可获得 2-4µg 的 DNA 产物； •单管操作、3 步完成、仅需 4 小时、中间产物无需纯化； •可从流式分选出的细胞或 0.5pg 级 DNA 中扩增出全基因组 DNA，且
成功率达 95%以上； •可在 AT-GC 富集区得到准确、高重复度的连续扩增结果； •仅存在<10%的基因座丢失及等位基因丢失。
建议您利用 30pg 的基因组 DNA 作为阳性对照 •利用无核酸酶水将 DNA 浓存储液稀释为 30pg/μL 的 DNA，作为阳性 对照； •取 30 pg/μL DNA 溶液 1 μL，加入含 4 μL Cell Lysis Buffer 的 PCR 管中。
单细胞全基因组扩增试剂盒 v1302.1
总体积
体积 5µL x N 0.1 µL x N 5.1 µL x N
体积=65 µL
4. 准备预扩增混合液 5. 将 30µL 预扩增混合液加入到上
一步 5µL 的细胞裂解混合液中 6. 在 PCR 仪中完成预扩增过程
7. 准备扩增混合液 8. 将 30µL 指数扩增混合液加入到
上一步 35µL 的预扩增混合液中 9. 在 PCR 仪中完成扩增过程
2-4 µg DNA
YK001A/B
单细胞全基因组扩增试剂盒 产品说明书
快速、可靠、高覆盖率的单细胞全基因组扩增
货号: YK001A/B 版本: 1302.1
目录
规格成分 ........................................................................................... 3 储存方法 ........................................................................................... 3 预期用途 ........................................................................................... 4 安全信息 ........................................................................................... 4 自备材料 ........................................................................................... 4 产品简介 ........................................................................................... 5 产品特点 ........................................................................................... 5 基本原理 ........................................................................................... 5 下游应用 ........................................................................................... 6 研究领域 ........................................................................................... 6 样本要求 ........................................................................................... 7 实验准备 ........................................................................................... 7 操作流程 ........................................................................................... 9 具体步骤 ......................................................................................... 10 扩增产物 ......................................................................................... 12 参考文献 ......................................................................................... 13 问题解决方案 ................................................................................. 14 技术支持 ......................................................................................... 15
单细胞全基因组扩增试剂盒 v1302.1
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需求进行分装，避免反复冻融。
预期用途
单细胞全基因组扩增试剂盒只用于研究目的； 单细胞全基因组扩增试剂盒不得向第三方转让，不得再销售或改 装销售，不得用于商业服务； 未经江苏亿康基因科技有限公司授权，本产品不得用于商业产品 的制造。
安全信息
利用本试剂盒进行实验操作时，请穿着实验服，戴好一次性手套 和防护眼镜，务必做好防护措施。如需更多信息，请查阅材料安全数 据表。
下游应用
经本试剂盒扩增后的 DNA 产物可用于多种下游分析平台： •基因突变检测 •SNP 基因分型 •CNV 全景图和非整倍体检测 •全基因组和外显子测序 •实时定量 PCR •分子克隆 •微阵列比较基因组杂交
研究领域
单细胞全基因组扩增试剂盒的适用范围十分广泛，多种原始材料 和微量样品均可通过该试剂盒进行全基因组扩增，包括基因组 DNA、 新鲜或干燥的血液、新鲜或冷冻的组织、司法痕量物证等材料： 人和动物： •生物标志物研究（CNVs、SNVs） •体外受精胚胎植入前基因测序
单细胞全基因组扩增试剂盒 v1302.1
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实验准备
1.预扩增样品准备区的隔离 •为避免样品受外界因素干扰或 DNA 扩增产物的污染，在扩增前，预 扩增样品的准备过程需在单独隔离的实验室或专门工作区完成，并预 备专用的实验材料和仪器，例如，移液器、移液管、PCR 管、1.5mL 的离心管、离心管架、离心机、漩涡混和仪和实验服等； •请将 DNA 扩增产物与预扩增试剂分开储存；所有的下游分析处理， 如 DNA 纯化、测序前的准备工作，请在另一实验室中进行。 2.移液器吸头