免疫学检测技术PPT课件

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医学免疫学免疫学检测技术ppt课件

医学免疫学免疫学检测技术ppt课件
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双抗体夹心法、间接法ELISA
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间接法ELISA
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ELISA操作图
可调移液器
8孔道可调移液器 17
3. 放射免疫测定(RIA)
常用 125I,测定微量物质 4. 化学发光免疫分析
常用 鲁米诺,测定超微量物质 5. 免疫印迹法(Western Blotting)
先做凝胶电泳将蛋白质分区 再将蛋白质转移至固相载体 后用酶免疫、放射免疫等技术加以测定
1. 免疫荧光法(IFA )
荧光素可双色;使免疫复合物呈荧光;可定性、定位
(1)直接荧光法 荧光素一抗 对每种抗体作标记 特异 测Ag
(2)间接荧光法: 荧光素二抗 不必标记每种抗体 敏感 测Ag/Ab
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免疫荧光法
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2. 酶免疫测定(EIA): ELISA与酶免疫组化
(1)双抗体夹心法ELISA:查抗原
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II ) Precipitation (二)沉淀反应
可溶性抗原 + 相应抗体肉眼可见的沉淀物 使用半固体琼脂凝胶为介质——琼脂扩散/免疫扩散
1. 单向免疫扩散:抗原 的定量(Ig、C3 )
2. 双向免疫扩散:抗原/抗体的定性、组成及Ag相关性分析 3. 免疫电泳: 电泳 + 双向免疫扩散 (抗原分析)
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3. 细胞因子检测
(1)免疫学检测法—— 夹心法ELISA FCM
(2)生物学检测法—— 细胞增殖(或细胞增殖抑制)试验 细胞毒(或细胞毒抑制)试验
(3) 分子生物学检测法 RT-PCR测定mRNA
4. 皮肤试验: 测试IV型超敏反应能力
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(二)B细胞功能测定
1. B细胞增殖试验 小鼠:LPS 人: SPA;抗IgM

临床免疫学检验技术PPT(共64页)

临床免疫学检验技术PPT(共64页)
临床免疫学检验技术
• 江西省胸科医院:熊国亮
一、概述
• 免疫学检验是研究免疫学技术及其在医学 检验领域应用的一门学科。免疫检验技术 则重点阐述各类免疫学技术的基本原理、 方法类型和临床应用。19世纪末相继建立 了凝集试验、沉淀试验和补体结合试验等 三大经典血清学试验,用于检测病原微生 物的抗原或抗体对传染病的诊断起到重要 作用。
三、酶联免疫吸附试验(enzy发展,放射 免疫技术、荧光免疫技术、酶免疫技术、 化学发光免疫技术、流式细胞免疫分析技 术等免疫标记技术应用于临床免疫学检验, 加快了免疫学检验的自动化、标准化进程, 极大地提高了免疫学检验的灵敏度,拓展 了免疫学检测范围,从检测免疫相关物质 (抗原、抗体、补体、免疫活性细胞和细 胞因子等)到检测体液中的微量物质(激 素、酶、血浆微量蛋白、血药浓度、微量 元素等)。
三、酶联免疫吸附试验(enzymelinked immunosorbent assay,ELISA)
• 此法常用多孔聚苯乙烯反应板作为固相载 体,读取结果需用酶标仪。标记抗原或抗 体所用的酶常选择辣根过氧化物酶(HRP)、 碱性磷酸酶(AP)等,HRP常用的底物有 邻苯二胺(OPD)或四甲基联苯胺 (TMB),碱性磷酸酶一般采用对硝基苯 磷酸酯(P-NPP)作为底物,产物为黄色的 对硝基酚,在405nm波长处有最高吸收峰。
二、免疫检验技术在临床免疫学 检验的应用
• 3.免疫球蛋白、循环免疫复合物和补体的测 定 包括测定五类免疫球蛋白的含量、血清 总补体活性及补体成分的含量和在多种疾 病时血清中升高的循环免疫复合物。
二、免疫检验技术在临床免疫学 检验的应用
• 4. 细胞免疫相关指标测定 检测淋巴细胞亚 群和淋巴细胞的功能以及白细胞介素—2等 多种细胞因子,用于判断机体细胞免疫功 能状况。

免疫检测法PPT课件

免疫检测法PPT课件
质。
缺点
01
02
03
04
交叉反应
有时会出现交叉反应,导致假 阳性结果。
抗体依赖
免疫检测法依赖于抗体的质量 和特异性,因此抗体制备的难
度和成本较高。
样品处理要求高
对于某些生物样品,需要进行 复杂的预处理才能进行检测。
检测时间较长
相对于一些快速检测方法,免 疫检测法可能需要更长时间才
能获得结果。
改进方向
分类
根据检测原理和应用领域,免疫 检测法可分为酶联免疫吸附试验 、放射免疫分析、荧光免疫分析 、化学发光免疫分析等。
免疫检测法的应用领域
01
02
03
医学诊断
用于检测人体内的肿瘤标 志物、激素、病毒抗原、 药物残留等,辅助医生进 行疾病诊断和病情监测。
食品安全
用于检测食品中的农药残 留、兽药残留、毒素等有 害物质,保障食品安全。
情监测。
激素水平检测
性激素检测
通过检测性激素水平,有助于评估男性和女性的生殖健康状况,如 睾酮、雌二醇、孕酮等激素的检测。
甲状腺激素检测
甲状腺激素对人体的新陈代谢和生长发育具有重要作用,通过检测 甲状腺激素水平,有助于甲状腺功能亢进和减退的诊断和治疗。
肾上腺激素检测
肾上腺激素与人体应激反应、免疫功能等方面密切相关,通过检测肾 上腺激素水平,有助于相关疾病的诊断和治疗。Fra bibliotek传染病检测
结核病检测
性病检测
通过检测结核病抗体,有助于早期发 现和诊断结核病,为预防和治疗提供 依据。
免疫检测法在性病检测中发挥着重要 作用,如梅毒、淋病、尖锐湿疣等, 通过检测相关抗体和抗原,及时发现 和治疗性病。
肝炎检测

自身免疫性疾病的免疫学检验ppt课件

自身免疫性疾病的免疫学检验ppt课件
SLE、RA、PSS、慢性肝病
斑点型
核内颗粒状荧光
抗ENA
MCTD、SLE、PSS、SS、PM
核仁型
核仁有荧光
抗核仁抗体
PSS、雷诺现象、SLE
着丝点型
核浆细小相同颗粒荧光
抗着丝点
PSS、CREST综合征
34
均质型
抗核抗体核型
着丝点型
核仁型
斑点型
35
例:间接免疫荧光法(IIF法) 测定抗dsDNA抗体
36
用ELISA间接法检测抗dsDNA抗体、抗组蛋白抗体和抗核小体抗体。
2. ELISA法
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SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳
待检血清
按分子大小分开不同区带
分离
转印
NC膜上
抗ENA与膜上相应抗原带结合
抗人IgG·HRP
NC—ENA—抗ENA—抗人IgG·HRP—显色
3. IBT法
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类风湿因子(rheumatoid factor,RF): 是抗变性IgG的 自身抗体,为19S的IgM,也可见7S的IgG和IgA。 与人变性IgG结合,不与正常IgG发生凝集反应。 RF出现在类风湿性关节炎(RA)患者中,约70%~ 90%的血清中和约60%的滑膜液中可检出IgG类RF;
对SLE有高特异性;SLSLE活动期增高
药物疗效
抗dsDNA抗体
抗DNA抗体
26
抗组蛋白抗体(anti-histonic antibody,AHA): 由H1、H2A、H2B、H3和H4五个亚单位,各自都 有特异性抗体;
AHA
检出百分率
抗dsDNA
50
70
90
100
药物诱导性狼疮只能检出此

免疫实验诊断PPT课件

免疫实验诊断PPT课件

局限性
尽管免疫实验诊断在许多方面具有重要价值, 但仍存在一定的局限性。例如,某些疾病可 能无法通过免疫实验诊断确诊;实验结果可 能受到多种因素干扰,如试剂质量、操作误 差等;此外,部分免疫实验诊断方法可能存 在一定的假阳性或假阴性风险。
THANKS
感谢观看
通过检测肿瘤标志物、细胞因子等, 有助于肿瘤的早期发现、疗效监测和 预后评估。
移植免疫诊断
通过检测供、受体的免疫状态,有助 于提高移植成功率,预防排斥反应。
02
免疫实验诊断技术
抗原抗体反应技术
抗原抗体反应技术是利用抗原 和抗体特异性结合的原理,通 过检测抗原抗体反应来诊断疾 病的一种技术。
常见的抗原抗体反应技术包括 沉淀反应、凝集反应、补体结 合试验等。
抗原抗体反应技术具有操作简 便、敏感性高、特异性强等优 点,在临床诊断中广泛应用。
酶联免疫吸附试验
酶联免疫吸附试验是一种常用的免疫 学检测方法,通过酶标记的抗体或抗 原与特异性抗原或抗体结合,再加入 底物显色,达到检测目的。
酶联免疫吸附试验具有灵敏度高、特 异性强、操作简便等优点,适用于大 量样品的快速检测。
04
免疫实验诊断的临床意义
感染性疾病的诊断
细菌性疾病
01
通过检测病原体抗原、抗体或细胞因子等,有助于诊断和鉴别
常见的细菌感染,如肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌等。
病毒性疾病
02
检测病毒抗原、抗体或病毒核酸等,有助于诊断和监测病毒感
染,如流感病毒、乙型肝炎病毒等。
寄生虫感染
03
检测寄生虫抗原、抗体或细胞因子等,有助于诊断和鉴别寄生
肿瘤的早期诊断与监测
肿瘤标志物检测
通过检测肿瘤标志物,如癌胚抗 原、甲胎蛋白等,有助于早期发 现和监测肿瘤的生长和扩散。

临床免疫检验的质量保证PPT医学课件

临床免疫检验的质量保证PPT医学课件
Pm=
Pm<5%为失控。此时,阴性标本可以发出报告,所有阳 性标本在查清原因后重做。
根据二项式分布的概率计算
如果一个实验室检测HBsAg,平常病人结果的阳性率为 10%,即p=0.1, 在某一次检测19个样本出现5个阳性结果, 14个阴性结果,则检测过程中是否存在污染的可能性可通 过下述方法计算。即计算在19个样本中出现至少5个阳性结 果的概率,此时的概率为1-(获得0个或1个或2个或3个或4 个阳性结果的概率)即:
本章小结
分析前质量保证包括检验项目的申请、患者的准 备、标本的采集、运送、接收和保存等。
分析中的质量保证包括实验室环境条件、仪器设 备维护校准、试剂方法的性能验证、标准操作程序的 建立、人员培训、标本前处理、室内质量控制、室间 质量评价和实验室间比对等,其中室内质量控制和室 间质量评价是质量保证的重要方面。
本章小结
临床上绝大部分开展的免疫学检验,都是仅能作为 筛查试验或诊断试验,阳性结果仅代表在检测中发生了 抗原抗体的阳性反应,但阳性反应可能是真阳性,也可 能是假阳性,也就是说存在一定比例的假阳性可能。由 于免疫检验方法学的这一局限性,在免疫检验的分析前 、分析中和分析后质量保证中,都涉及到与其他检验项 目不同的特点,突出表现在检验项目的申请(分析前) 和结果的报告与解释(分析后)两个方面。
是对实验室操作和实验方法的回顾性评价,而不是用 来决定实时的测定结果的可接受性。
通过参与EQA,实验室可对自己的实验操作进行纠正, 从而起到自我教育的作用。
第五节 分析后的质量保证
重点提示
结果的报告与解释 检验后标本的保存与处理 咨询服务
结果的报告
基本信息 ①患者的姓名、性别、年龄; ②送检科室或单位名称; ③标本采集时间和实验室接收标本时间;④标本的编号或 条码;⑤检测项目;⑥标本类型;⑦检测方法和主要设备 等。
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抗原 (Antigen)
抗原概念 凡能刺激机体产生特异性抗体和致敏淋巴细胞,
并能与相应抗体或致敏淋巴细胞在体内或体外发生 反应的物质。
抗原性(Antigenicity):包括免疫原性和反应原性
二个方面 • 免疫原性:抗原能刺激机体产生抗体和致敏淋巴细
胞的性能。 • 反应原性:抗原与特异性抗体或致敏淋巴细胞在体
多克隆抗体与单克隆抗体
多克隆抗体与单克隆抗体的制备
单克隆抗体的制备
骨髓瘤细胞
脾脏淋巴细胞
( HGPRT-TK- )
(HGPRT+TK+)
在HAT中不能生长
体外培养过程中死亡
↓←PEG
杂交瘤细胞
(HGPRT+、TK+)

在HAT中大量长期繁殖

克隆化

产生单抗
第一节 免疫学检测技术原理
• 抗原或抗体检测原理:
浆细胞而产生的能与抗原发生特异性反应 的免疫球蛋白(Immunoglobulin, Ig)
抗体(Antibody)
一、概念
二、免疫球蛋白的基本结构 免疫球蛋白:在人和动物血液、组织液及其
他分泌液中的一类结构相似的球蛋白。 1. 由4 条肽链组成: 2 条重链, 2 条轻链 2. 一个抗体单分子: 2 个抗原结合位点
免疫球蛋白的功能
抗体(Antibody) 的产生与功能
抗体产生的主要过程
抗体
抗体的制备
注射
抗原(如类毒素)
抗体? 抗原?
血清
抗体的制备 • 抗血清:指抗原人工免疫实验动物,获得含
特异性抗体的血清。 • 多克隆抗体 (PAb): 多个抗原决定簇免疫机体
所产生的多种抗体的混合物。 • 单克隆抗体(monoclonal antibody,MAb) : 只针对某一特定的抗原决定簇,纯度高的抗体。
抗菌、抗病毒、抗真菌、抗寄生虫免疫
2. 自身稳定(Homeostasis):机体在新陈代谢过 程中,产生大量的衰老死亡细胞,免疫的第二个功能 就是清除这些细胞,维持机体的生理平衡。
3. 免 疫监视(Immunological surveillance):机 体细胞会因物理、化学和病毒等生物因素的影响,使 细胞发生癌变,形成肿瘤等,机体可识别、清除这些 细胞,这是免疫系统的第三个功能。当这一功能低下 或失调时,会导致肿瘤或癌症。
第十四章 免疫学检测技术
抗原和抗体可以发生高度专一性的结合
抗原和抗体可以发生高度专一性的结合
抗原和抗体可以发生高度专一性的结合
抗原和抗体可以发生高度专一性的结合
• 抗原或抗体检测原理: 借助抗原和抗体在体外特异结合后出现的
各种现象,对标本中的抗原或抗体进行定 性或定量的检测。
Equivalence – Lattice formation
一、凝聚反应(Agglutination) 二、沉淀反应
1、溶液中的沉淀反应 2、凝胶扩散沉淀 3、免疫电泳
血清免疫电泳 火箭电泳 对流免疫电泳
三、补体参与的反应 四、免疫标记的抗原抗体技术
酶联免疫吸附(ELISA)
一、凝集反应
凝集反应是指颗粒抗原与相应抗体结合 反应出现的可见性现象。颗粒抗原如完整 的细菌、红细胞等与相应抗体相混合,在 一定条件下出现凝集。凝集反应中抗原称 为凝集原,抗体称为凝集素。
根据抗原的化学性质分: • 天然抗原:微生物及其产物抗原如 • 菌体抗原(O 抗原) • 鞭毛抗原(H 抗原) • 表面抗原(如大肠杆菌的K 抗原) • 细菌的毒素抗原 • 病毒抗原(V 抗原) • 人工抗原:人工合成多肽、蛋白等
抗体(Antibody)
一、概念 是抗原刺激B淋巴细胞, 使之增殖分化成
3. 具有复杂的立体结构或空间构象.
如明胶分子量何被识别
抗原的特异性
抗原决定簇:抗原分子表面具有免疫活 性的化学基因,是抗原与抗体结合的部位。
抗原分子中抗原的特异性由抗原决定簇
决定。
一种细菌可以刺激多少种抗体产生?
抗原
一种细菌可以刺激多少种抗体产生?
内或体外发生反 应的性能。
抗原 (Antigen)
构成抗原的条件 1. 异物性:机体免疫细胞能识别自身和异己物质,只
有外源性的物质才具有免疫原性,产生免疫反应。 亲缘关系越远,差异越大,抗原性越强。 自身抗原:自身组织发生异常变异、免疫功能紊乱、眼球晶体
蛋白、精子蛋白、甲状腺蛋白
2. 大分子胶体:一般在10 kD以上 。
抗原或抗体检测原理
• 免疫学(Immunology): 是研究抗原性物质、免疫系统、免疫应
答的规律及免疫应答的调节的一门科学。
• 免疫的定义(Immunity):免疫是机体识 别自我与非自我的过程。排除异己,维护 自身稳定的生理反应。
免疫的功能: 1. 抵抗感染(Defense):机体能抵抗病原微生物 侵袭的能力。又称免疫防御。
抗原抗体的结合具有高度专一性 借助抗原和抗体在体外特异结合后出现的各种
现象,对标本中的抗原或抗体进行定性或定量的 检测。
对抗原或抗体进行定性或定量的检测的原理
Ab excess
Ag excess
Equivalence – Lattice formation
对抗原或抗体进行定性或定量检测的原理
根据抗原抗体形成的免疫复合物的浓度进 行定量检测。 P 312
抗体(Antibody)
抗体(Antibody,Ab)
• 免疫球蛋白的双重性 免疫球蛋白是一种蛋白质,是抗体
( Ab1 );同时又可引起机体产生抗体(抗抗
体,Ab2 ),所以既是抗体又是抗原。
Ag
Ab1
Ab2
抗体(Antibody,Ab)
• 免疫球蛋白的双重性 • 免疫球蛋白的功能
1. 与抗原结合 2. 激活补体 3. 组织结合 4. 调理作用 5. 抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(ADCC)
一、凝集反应
凝集反应是指颗粒抗原与相应抗体结合 反应出现的可见性现象。颗粒抗原如完整 的细菌、红细胞等与相应抗体相混合,在 一定条件下出现凝集。
第一节 免疫学检测技术原理
可作为抗原进行检查的物质:
微生物及其大分子产物 人和动物细胞 人和动物体内的各种大分子 各种半抗原
抗原或抗体检测原理
较早的抗原抗体反应检测方法
1、凝集反应 (Agglutination) 2、沉淀反应 (Precipitation) 3、补体结合试验 (Complement fixation test ) 4、中和试验 (Neutralization test)
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