蛋白质的SDS-PAGE电泳

β—巯基乙醇（BME）
☺阻止半胱氨酸氧化并打开二硫键
SDS-PAGE测定的是蛋白质亚基的分子量
溴酚蓝 丙三醇
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
☺溴酚蓝是一种染料，能够与
蛋白质结合显示蛋白质的运动轨 迹 ☺丙三醇的密度比水大，使样 品沉淀到加样槽底部
PAGE胶
☺丙烯酰胺（Acr）:形成聚合物链 ☺甲叉双丙烯酰胺（Bis）：交联剂，形
4 “纹理”现象 样品中的不溶性颗粒引起的
解决办法： 增加溶解度 离心除去不溶性颗粒
5 偏斜现象 电极放置不平行或加样位置偏斜 引起
6 带太宽 加样量太多或者加样孔泄露引起
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成纵向桥架 ☺过硫酸铵（AP）：引发剂，产生自由 基 ☺N，N，N，N—四甲基乙二（TEMED）： 催化过硫酸铵产生自由基，加速聚合
孔洞大小决定于
（1）Acr与Bis的总量 （2）Bis的用量：架桥程度
% T = total monomer concentration Acr + Bis X 100% total volume
孔 徑 平 均 大 小
Å
% acrylamide
分离胶 浓缩胶 电泳液
三大特色： ☺PH不连续 ☺凝胶浓度不连续 ☺缓冲液成分不连续
ATTENTION:
☺不同的PH，氯离子，甘氨酸将会
在电泳过程中发挥重要作用
工作原理
蛋白质进入分离胶之前，先堆积成一条细线，使每个分子 起跑点相同，提高解析度
根据样品的处理方式不同： 还原SDS电泳 非还原SDS电泳 带有烷基化作用的还原SDS电泳
根据电泳形式： 圆盘电泳 垂直电泳 水平电泳 平板电泳
目前实验室常用不连续的还原SDS垂直电 泳
垂直电泳装置
不连续电泳 用浓缩胶（上层胶）和分离胶（下层 胶）两种不同浓度，不同PH值的凝胶 灌制凝胶板，通过电荷效应，浓缩效 应，分子筛效应，达到蛋白质高分辨 率的分离
电泳过程中的不正常现象
1 “微笑”现象 指示剂前言呈现两边向上的曲线形，说明 凝胶的不均匀冷却，中间部分冷却不好
2 皱眉现象 由于垂直电泳槽的装置不合适引起的，特别是当明胶 和玻璃板组成的“三明治底部有气泡”或靠近隔片的 凝胶聚合不完全
3 “拖尾”现象 样品溶解不佳引起
解决办法： 加样前离心 选择合适的样品缓冲液和凝胶缓冲液 加增溶试剂 降低凝胶浓度
蛋白质的SDS—PAGE电泳
侯国俊 周希彬 马丽娜 关 欣
目录
1
发展历史，分类
2
3
样品处理 PAGE胶
电泳原理
4
电泳中的不正常现象
发展历史
1. 1967年由Shapiro建立 2. 1969年由Weber和Osborn进一步 完善 3. 目前已成为分子生物学实验中常用 的一项技术
分类
根据缓冲体系和凝胶孔径的不同： 连续电泳 不连续电泳
样品
样品缓冲液应包含以下部分：

SDS（十二烷基磺酸钠） β—巯基乙醇（BME） 溴酚蓝 丙三醇 pH =6.8Tris-glycine
SDS 作用：
☺断裂分子内和分子间氢键，破坏蛋白
质的二级和三级结构，与蛋白质以一定比 例结合，从而使蛋白质带上负电荷并具有 相同的质合比，在电泳时迁移速率仅与分 子量有关
分离胶内的电 泳
按分子量大小进行 分离
检测
☺考马斯亮蓝染色 ☺银染色
考马斯亮蓝
R—250
红蓝色，每个分子含有两个SO3H,偏酸性，结 合在蛋白质的碱性基团上
染色结果
银染色
机制： 将蛋白带上的硝酸银（银离子）还 原成金属银，使银颗粒沉积在蛋白 带上
应用
蛋白质分子量的测定 蛋白质纯度分析 蛋白质浓度测定 蛋白质水解的分析 免疫沉淀蛋白的鉴定 免疫印记第一步 蛋白质修饰的鉴定 分离和浓缩用于产生抗体的抗原 分离放射性标记的蛋白