肾活检病理组织切片 PAM

肾活检病理组织切片 PAM —Masson染色法改良尹忠① 师锁柱① 张雪光① 谢院生① 陈香美①

PAM—Masson染色能在同一切片上既显示。肾小球基底膜，又可观察免疫复合物的沉积，因此 PAM —Masson染色是肾

活检病理组织切片染色中最为重要的染色之一。然而长期以

来 PAM 染色耗时长，Masson复染着色不良，给肾活检病理诊

断带来不利影响。我们通过实践摸索，在常规的染色方法基础

上进行改良，获得较好效果，现介绍如下。

材料与方法

1 材料将临床住院患者肾活检组织经 10％福尔马林

固定，常规脱水、透明、包埋，取 8块肾活检病理诊断剩下的石

蜡块，每块连续切2tan切片 2张，分别采用常规 PAM～Mas—son染色和改良法染色。

2 染液配制六胺银染液配制：取 3％ 6次甲基四胺25n1l，5％硝酸银 2．5ml，蒸馏水 22．5ml，5％硼砂 4．5ml，混

合过滤，72℃预热 20 min以上。Masson染液配制：磷钨酸

0．8g，冰醋酸 1．0rnl，蒸馏水 100rnl，变色酸 2R0．6g，亮绿 SF 0．4g混匀溶解即成。铬化液配制：10％重铬酸钾水溶液与10％三氯醋酸水溶液等量混合。

3 染色步骤

3．1 I组常规法：(1)常规切片脱蜡入水；(2)人 1％过碘酸水溶液 l5～20min，水洗；(3)入六胺银染液(72℃)40～60rain，镜下观察；(4)入 1％氯化金水溶液 1～2min，镜下观察；(5)入 5％硫代硫酸钠水溶液 1～2min，水洗，1％醋酸水洗；

(6)复染 Masson液 10min，1％醋酸水洗；(7)入 1％亮绿 1～2min，1％醋酸水洗；(8)脱水、透明、封片。

3．2 Ⅱ组改良法：(1)常规切片脱蜡入水；(2)入铬化液30rain；

(3)入 1％过碘酸水溶液 15～20min，水洗；(4)入 0．5％

氨基硫脲水溶液 5～10 min，水洗；(5)入六胺银染液(72℃)l0～20min，镜下观察；(6)人 1％氯化金水溶液 1～

2ainr，镜下观察；(7)人 5％硫代硫酸钠水溶液 1～2min，水洗，1％醋酸水洗；(8)复染 Masson液 10min，1％醋酸水洗；(9)入1％亮绿 1-2min，1％醋酸水洗；(10)脱水、透明、封片。

结果

常规法所染的切片背景较暗，Masson着色不良；经改良法

所染的切片基底膜、网状纤维为黑色，免疫复合物红色，红细胞鲜红色，胞浆粉红色，胶原纤维绿色，背景清晰，对比鲜明。

讨论

PAM —Masson染色方法实际是六胺银和马松三色两种染

色方法的叠加染色，由于基底膜可清楚显现，所以免疫复合物的定位更为精确I】J，但常规方法仅72℃六胺银染一步就需耗

时 60min左右，组织长时间在高温条件下极易从切片脱落，基

底膜显示亦不清晰，背景灰暗，复染 Masson着色不良，给肾活检病理诊断工作造成极大影响。我们经多次实验，反复摸索，

在组织切片入六胺银染液前加染氨基硫脲水溶液 5～10min，

大大加速了银离子对基底膜等的染色力，使银染时间缩短

40min左右，即由原来的 60min减至 20min左右，同时也改善

了背景的色调，减弱了六胺银液对细胞核的着染。另外在组织切片脱蜡入水后，我们用强酸酸化的重铬酸钾水溶液铬化处理

30ainr，使组织切片能够很好的对酸性染料着色l2]，为复染Masson 液提供了有利条件，获得了组织结构清晰、对比鲜明、直

观的染色结果。

参考文献

1．邹万忠．肾活检病理学．北京：北京大学医学出版社，2006．252．2．龚志锦，詹铬洲．病理组织制片和染色技术．上海：上海科学

技术出版社，1994．9．(收稿：2008—07—18)

① 解放军总医院肾科，全军肾脏病研究所暨重点实验室 (北京 100853)