稳定的小鼠无精子症动物模型构建分析

稳定的小鼠无精子症动物模型构建分析

目的分析稳定的小鼠无精子症动物模型构建的方法。方法选取60只清洁级C5BL/6小鼠，将小鼠按照编号，随机分为两组，化疗组和激素组各30只。分别观察药物注射后，小鼠睾丸生精小管内精子和精子细胞消失情况。结果化疗组小鼠在接受药物注射后第4周，睾丸生精小管内精子及精子细胞消失，化疗后20周仍未产生精子，激素组在经过苯甲酸雌二醇连续注射后，于第4周睾丸生精小管内精子以及精子细胞完全消失，连续注射第20周时，部分小鼠睾丸生精小管内发现了少量的精子细胞与精子存在。两组小鼠睾丸重量存在显著差异性，具备统计学意义（P＜0.05）。结论激素组采用苯甲酸雌二醇注射构建的小鼠无精子症动物模型缺乏稳定性，化疗组经过白消安、环磷酰胺注射后构建的小鼠无精子症模型较为稳定，是构建小鼠无精子症动物模型的首选方法，值得进行推广应用。

[Abstract] Objective To analyze the methods of stable mice azoospermatism animal model building. MethodsSixty mice with clean grade C5BL/6 were randomly divided into the chemotherapy group with 30 mice and the hormone group with 30 mice according to the serial number. The sperm and spermoblast disappearance situation in the mice’s testicular seminiferous tubules after the drug injecti on of the two groups was observed. Results In the chemotherapy group, the mice’s sperm and spermoblast in the testicular seminiferous tubules disappeared in the 4th week of drug injection,and no sperm was produced in the 20th week of chemotherapy. In the h ormone group,after continuous injection of estradiol benzoate,the mice’s sperm and spermoblast in the testicular seminiferous tubules disappeared completely in the 4th week,and in the 20th week of continuous injection,little spermoblast and sperm was found in the mice’s testicular seminiferous tubules. The two groups of mice had significantly different testical weight,with statistical significance(P＜0.05). Conclusion The mice azoospermatism animal model established by injecting estradiol benzoate in the hormone group lacks stability.The mice azoospermatism animal model established by injecting busulfan and cyclophosphamide in the chemotherapy group is relatively stable,which is the first choice of establishing mice azoospermatism animal model and worthy of promotion and application.

[Key words] Mouse;Azoospermatism;Animal model;Effect

近年来，无精子症细胞代替疗法是医学界的研究热点[1-3]，开展无精子症细胞代替疗法研究需要使用大量的无精子症动物模型，构建稳定的小鼠无精子症动物模型对于推动临床研究工作的发展有着积极地促进作用。目前构建小鼠无精子症动物模型的主要方法有两种，即化疗法构建小鼠无精子症动物模型与转基因无精子症动物模型。化疗法构建小鼠无精子症动物模型在研究中已经得到了极为广泛的应用，虽然化疗法操作简单、成本低廉[4-6]，但是小鼠无精子症动物模型缺乏稳定性，转基因法虽

然稳定性较高，但是成本高昂、操作难度大。本研究主要是通过确定有效的化疗注射药物，以期构建稳定的小鼠无精子症动物模型，现根据我院小鼠无精子症动物模型的构建情况进行报道。

1材料与方法

1.1研究设计

选取60只清洁级C5BL/6小鼠，将小鼠按照编号，随机分为两组，化疗组和激素组各30只。化疗组小鼠年龄在4～8周，平均年龄在（6.02±0.35）周，体重在24～28g左右，平均体重为（26.33±0.24）g；激素组小鼠年龄在5～8周，平均年龄为（6.36±0.28）周，体重在24～28g左右，平均体重为（26.09±0.28）g。两组小鼠年龄与体重对比无明显差异，不具备统计学意义（P＞0.05）。

1.2仪器与试剂

（1）英资迈世通（鹤壁）药业有限公司生产的白消安，国药准字H41021975。（2）通化茂祥制药有限公司生产的环磷酰胺，国药准字H22022233。（3）广州白云山明兴制药有限公司生产的苯甲酸雌二醇注射液，国药准字H44022008。（4）浙江济民制药有限公司生产的0.9%生理盐水，国药准字H20046424。

1.3方法

1.3.1化疗组首先，将30只清洁级C5BL/6小鼠随机分为三组，每组10只。每组所有小鼠均接受白消安与环磷酰胺注射。白消安的注射剂量控制在10mg/kg，环磷酰胺注射剂量控制在120mg/kg。三组小鼠根据饲养时间分为4周组、12周组与20周组。在药物注射后，由于出现的免疫抑制反应导致部分小鼠死亡，4周组死亡4只，12周组死亡5只，20周组死亡6只，死亡率为50.00%。存活小鼠能够正常活动与饮食，体重未见明显下降。三组小鼠分别于4、12、20周取出小鼠睾丸组织与附睾组织，称取小鼠睾丸重量，然后将其切片进行病理学分析。

1.3.2激素组首先，将30只清洁级C5BL/6小鼠随机分为三组，每组10只。然后每天给予小鼠苯甲酸雌二醇注射，注射剂量控制在 4.0mg/kg，连续注射2周（14d）。接着停止药物注射并继续饲养三组小鼠。饲养过程中，4周组未出现小鼠死亡，12周组小鼠死亡1只，20周未见小鼠死亡，死亡率为6.67%。存活小鼠生长情况良好，能够进行正常的饮食与活动，体重未见明显变化。于4、12、20周取出小鼠睾丸组织以及附睾组织，称取小鼠睾丸重量，然后将其切片进行病理学分析。

所有小鼠均于睾丸、附睾组织取出后断颈处死。

1.4统计学方法