液相色谱仪操作规程

1 目得

规范Waters e2695液相色谱仪得操作规程,正确使用本仪器,保证检测工作顺利进行以及操作人员、设备、周围环境得安全。

2 适用范围

本指导书适用于Waters e2695液相色谱仪、2489紫外检测器及随机工作站。

3 职责

3、1操作人员按本规程操作仪器,对仪器进行日常维护,作使用登记。

3、2保管人员负责监督仪器操作就是否符合规程,对仪器进行定期维护,保养。

3、3科室负责人负责对仪器综合管理。

4 仪器性能指标

4、1、Alliance e2695系统

4.1.1 泵/溶剂管理系统:相互独立控制得线性双柱塞驱动装置,双压力传感器反馈回路, 无脉动, 无需混合器与阻尼器。

4.1.1、1溶剂数:4

4.1.1、2流速范围:0、001--10、000ml/min, 以0、001ml为增量

4.1.1、3流速精度:±0、075%RSD

4.1.1、4流速准确度:±1、0%RSD

4.1.1、5操作压力:0-6000psi(0-410bar) ,可设上,下限

4.1.1、6混合范围:0、0~100、0%,以1% 增量

4.1.1、7梯度准确度:±0、5%,不随反压变化

4.1.1、8梯度精度:±0、15%,不随反压变化

4.1.1、9压缩补偿:自动,连续

4.1.1、10梯度曲线:多种梯度曲线: 线性, 凸线与凹线等11种

4.1.1、11系统体积:< 650μL, 不随反压变化

4.1.2 自动进样器/样品管理系统:

4.1.2、1样品盘数:120位,分5个样品盘,每个样品盘可放置24个2ml样品瓶

4.1.2、2进样次数:每个样品可进样1到99次

4.1.2、3进样精度:<0、5%RSD

4.1.2、4样品污染度:<0、1%

4.1.2、5进样准确度:±1 uL

4.1.2、6进样体积:0、1 to 100 uL

4.1.2、7进样线性度:> 0、999 coefficient of deviation

4.1.3 在线柱塞清洗装置:

可在线清洗柱塞杆,可防止因缓冲盐溶液结晶而造成得堵塞,延长密封圈得使用寿命。

4.1.4 在线脱气装置:

4.1.5柱温箱:

4.1.5、1温度设定范围:室温至65℃

4.1.5、2温度稳定性:±0.15℃

4.1.5、3柱容量:4根7、8X300柱

4、2检测器:

4、2、1 2489双波长紫外检测器

双通道紫外检测器,可进行双波长同时测定;最新专利梯形狭缝池设计,确保低噪音,高灵敏度,宽线性范围;Maxplot,Ratioplot优化灵敏度,检测共流出物杂质,可作简单峰纯度鉴定。

4.2.1、1波长范围:190-700nm

4.2.1、2 灯:氘灯,具有灯优化软件,可以延长灯得使用寿命,可编程控制灯得开关

4.2.1、3波长准确度:±1、0nm

4.2.1、4波长重现性:±0、1nm

4.2.1、5光谱带宽:5nm

4.2.1、6噪音:5 X 10-6AU

4.2.1、7漂移:≤1 X 10-4AU/hr

4.2.1、8线性范围:< 5% at 2、5 AU

4.2.1、9流通池:池长10mm,池体积10ul

4.2.1、10 采集速率:80Hz

5 操作规程

5、1操作前准备

5.1.1色谱柱得检查与安装首先打开柱温箱门瞧就是否就是所需用得色谱柱,若不就是则旋下色谱柱螺母,卸下色谱柱,马上用死堵堵上。取出所需色谱柱,两端用螺母旋紧,固定在卡槽上,注意色谱柱得方向,不能装反。

5.1.2 溶剂得准备。

5.1.2、1 甲醇或乙腈必须用HPLC纯,其她无机试剂也最好用HPLC纯,且需经过0、45µm 滤膜溶剂过滤装置过滤。试剂得纯净非常重要。必须要采用超纯水,可以用哇哈哈纯净水

替代。

5、2 主机操作

5.2.1灌装及清洗系统

5.2.1、1当真空脱气机第一次使用或当真空管就是空得,或当改变溶剂,且当前溶剂与真空管中溶剂不相溶时,应当灌装清洗系统。

5.2.1、2如果使用易挥发得混合溶剂或改变溶剂时,若系统长时间关机(比如,隔夜)灌装系统推荐将泵得流速控制在高水平(3-5ml/min)。

5.2.1、3使用注射器灌装系统(干灌装):点击仪器面板上“Menu/status”按钮,选择“Direct Function”,然后点击“dry prime”选择欲灌装得通道并逆时针方向旋开灌装/排放阀,将专用注射器插入灌装/排放阀入口内,拉动注射器活塞吸入大约10毫升灌装液或直到管路中不在有气泡为止。灌装完成后顺时针方向拧紧灌装/排放阀。

5.2.1、4首次灌装系统时,使用干灌装并使用异丙醇、甲醇、乙醇作为灌装溶剂。

5.2.1、5置换管路中得流动相,使用湿灌装:点击仪器面板“Menu/status”按钮,选择“Direct Function”,然后点击“wet prime”选择欲灌装得通道。

5.2.1、6如果当前管路中溶剂就是有机得或水而当前流动相也为有机溶剂或为水,在能互相溶解得情况下,用流动相作为灌装溶剂。

5.2.1、7如果当前管路中溶剂就是有机得或水而当前流动相也为有机溶剂或为水,但不能互相溶解得情况下,使用异丙醇灌装系统。

5.2.1、8如果管路中溶剂为有机得而当前流动相为缓冲盐或管路中为缓冲盐而流动相为有机溶剂时,使用10%异丙醇、甲醇、乙醇灌装系统。

5、3优化泵得性能

5.3.1总就是把存放溶剂瓶得溶剂瓶架放在泵得顶部(或在相对于泵较高得位置)。

5、3、2当使用盐溶液得时候,常需要用水冲洗所有流路。这样就可以将阀门端口得沉淀得盐冲洗掉。在运行泵之前,用至少两倍体积(30ml)得水冲洗真空脱气机,特别就是当泵关闭较长时间时或者通道中使用易挥发混合溶剂时。

5.3.3当基线长时间不能处于稳定状态时,通常情况下应考虑溶剂进口过滤器就是否堵塞。当溶剂过滤器堵塞时,应将其从溶剂瓶中取出并将其放入30%硝酸溶液中超声清洗30min。在将其重新装入溶剂瓶之前,必须用MillQ水对其进行彻底得清洗。长期处于水或缓冲液中得过滤器常因为溶剂中藻类等微生物得生长,造成过滤器得堵塞。因此建议在使用完此类流动相后,用50%乙腈清洗溶剂过滤器。

5.3.4当使用缓冲溶液时,在关闭系统前必须将通道中得溶剂置换成50%乙腈,以防止藻类等微生物得生长。

5、4使用Empower色谱工作站

5.4.1双击电脑桌面上得Empower快捷图标,出现Empower登陆窗口。输入用户名与密码,默认账号为“system”,密码为“manager”,点击“OK”进入Empower工作站。单击高级键, 选择用户类型与QuickStart 界面。

5.4.2.选择QuickStart 界面,点击“确定”,然后选择待选定得操作项目以及色谱系统(仅查瞧数据可选择色谱系统中得"没有系统"),单击“确定”。

5.4.3编辑仪器方法与方法组

5.4.3、1监视区单击方法组编辑向导

5.4.3、2选择新建按钮,弹出仪器方法编辑器。