ABO亚型鉴定及案例分析

标本的基本情况1、2、5、7、8号为健康无 偿献血者(2号检测出存在抗．M)，3号为急 性单核细胞白血病(AML)M5患者，4号为1名 持续发烧原因待查的患者，6号为自身免疫 性溶血性贫血、乙型肝炎、Goombs’试验呈 阳性，9号为肝癌患者；


提取DNA 扩增引物 PCR扩增 PCR扩增产物的检测 取扩增后标本在含 0．5gg的溴化乙锭(EB)的2％琼脂糖凝胶中 电泳15-20min，观察结果；根据是否产生 扩增片段以及片段的长度确定ABO基因型 (同时扩增出6和7特异性片段确定A2基因)。

该个体可能是哪种血型？
病例分析
患者男,20岁,临床诊断为急性单核细胞白血病 (M5a),血液检果:WBC100.17×109/L,PLT9×109/L, 申请输注红细胞及血小板制品。 输血前进行血型鉴定为Rh(D)阳性,ABO血型正 反定型(室温)不相符,正定型红细胞与抗A、抗B 均不凝集,反定型血浆与A、O型红细胞不凝集,与 B型红细胞强凝集。
PCR—SSP方法用于ABO疑难血型检定

样品来源：2001年7月-2002年6月河南各地 血站及省血液中心血清学方法检测ABO血型 正反定型不符的血样共30份。选出本实验 室再次血清学检测仍正反定型不符或仍存 在疑问的9例作ABO基因检测；另挑选A、B、 O、AB型正常样品各2例抽提DNA扩增ABO基 因作为对照。

该献血者可能是哪种血型？
该患者作为献血者，其红细胞和血浆可以 输给哪种血型的受血者？
病例分析

在河北省血液中心2002年1月15日组织的一
次无偿献血中,检验科遇到1份正反定型不
符标本送血型参比实验室检测。
抗A 4+
正定型 抗B 抗H 抗A1 抗AB A — 2+mf 2+ 4+ +
反定型 B O — W+
2+mf 2+mf Wkmf wkmf 0/w+ 1~2+ 0 0 0 0
200(只有10%细 无 胞产生凝集) 4 0.2~1.9 0.1~1.4 几乎全部 无 经常
一些ABO亚型病例分析
病例分析

献血者,男, 23岁。在献血时检测血型发现 正反定型不一致,即送本院血型室鉴定。

H物质测定 用抗H与献血者红细胞反应 并同时采用其他正常成人新鲜Bc、Oc做平 行对照。各红细胞与抗H凝集强度为Oc >献 血者红细胞>Bc。抗H呈增强反应。
ABO亚型共66例(不包括A2,A2B和类孟买)。其
中,A亚型22例,B亚型41例:AxB11例,AelB3
例,Ax3例,Ael2例,Amh2例,A31例,Bx11例,B39
例,ABx7例,AB35例,Bel3例,Bm2例,ABel1
例,ABend1例,ABm1例,Bend1例;另检出B(A)型1
例、CisAB型2例。
抗AB 微弱凝集,与抗H 均明显凝集;
2. 血浆与标准A 型红细胞及O 型筛检红细胞均不凝集,与标准B 型红细胞强凝集;
3. 红细胞吸收人源抗A血清后的放散液与A型红细胞有明显凝集;
4. 唾液中检出H 及A 血型物质,未检出B 血型物质
1、该患者是何血型？ 2、该患者该如何进行输血？ 3、该实验室做法是否正确？有何补充之处？
当反定型的反应条件在37℃时,A细胞侧 凝集消失,证明是冷凝集素所致,而B细胞侧 仍存在弱凝集。

唾液物质测定 唾液中只分泌H 物质。 用最佳稀释度的抗-A、抗-B 血清对唾液进 行测定,没有发现A、B 物质。

该个体可能是哪种血型？
家系血型遗传图

家族中其它cisAB 型者大部分为非分泌型, 即使是分泌型也仅分泌H 物质。仅发现1 名(先证者之父) 分泌A 及H 物质
思考
该做哪些实验确定ABO血型？
实验方法
1、红细胞ABH抗原检测:采用试管法在室温
及4 ℃,使被检者红细胞分别与抗-A、抗-A1、 抗-B、抗-AB 和抗-H单抗反应 ,鉴定其ABH 抗原。
2、血浆 ABO 血型抗体及不规则抗体检测: 采用试管法,使血浆与标准 A、B 型红细胞 反应。 检测ABO血型系统抗体;采用微柱凝胶抗球 蛋白试验 ,使血浆与3 人份O型筛检红细胞 反应 ,检测ABO血型系统以外的不规则抗体。
行手工复检。
由于A2及A2B亚型通常正反定型相符,所以
对筛选中检出的A2、A2B未加统计,而另用抗 H和抗A1分别对随机选取的2693份A型和869 份AB型健康献血者血样进行筛选,对筛选岀 的血样重复正反定型以及抗H、抗A1检测,并 检测血清中的可能存在的抗A1。
结果 从440617份健康献血者血样中,筛选出的
ABO亚型分布的不平衡性
根据对上海献血者
同期随机抽样调查,AB型和A型人数的比例
为:AB/A=11.0%/29.9%=0.368。如果A亚型
完全符合孟德尔遗传规律遗传,则在AB型和
A型中检出亚型的概率相同,因此
A2B/A2=AB/A。
但在AB型中检出A2B的几率 远高于A型中检出A2的几率。其 它“A亚型B”的检出率也远高于 A亚型的检出率

吸收放散试验：取献血者红细胞与效价为 256的人源抗-A血清混合冷吸收后进行放散, 释放液与A型试剂红细胞反应出现凝集,说 明其红细胞上确有A抗原存在。


唾液中血型物质测定：唾液中未检出血 型物质,该献血者为非分泌型。 抗AB反应强度试验：用抗AB效价为4和抗 B效价为16血清分别与献血者红细胞反应, 抗AB、抗B凝集强度分别为3 +、2 + ,由上 可得出抗AB增强。
从2693份A型和869份AB型血样中,检出A214例 (0.520%);A2B亚型35例(4.03%)。对1695例上海献
血者同期随机抽样调查:A型占29.9%,B型占
28.6%,AB型占11.0%。结合本次筛选的A2和A2B结果
推算岀:

A2占总人群的比例为为29.9 % ×0. 520 % = 0. 156 % A2B占总人群的比例为11. 0 % ×4. 03 % = 0. 443 %。
ABO亚型
ABO亚型简介
根据血型血清学试验所表现的抗原性强弱程度的 分级量化等血清学特征，可鉴别出各种ABO亚型 A抗原亚型较多：主要是A1（占80%）和A2亚型 （占20%） ，其它的A亚型（A3、Am、Ax、Aint、 Ael、Ay等）较少见或罕见 B抗原的亚型比A亚型少，较常见的有B1、B3、Bm、 Bx、Bel等亚型 O型血型中，常把孟买型、类孟买型和一些H缺失 型、Hm表型等归类为H抗原的亚型
其它A亚型——Ａx（Ao）型：

血清中存在抗A1
分泌型体液及红细胞上有H抗原
与抗H的凝集增强
Am亚型：

更加罕见
主要特征：Am型红细胞在常规试验中 不与抗-Ａ、抗-B和抗-Ａ，Ｂ反应， 但其血清反定型时出现正反定型不一 致，只有抗B，缺乏抗-Ａ
Ael

仅能通过吸收放散试验才能证明红细胞上 有A抗原存在的个体



可以根据以下原则区分A亚型
1. 2. 3.
4.
5.
红细胞与抗A及抗A1的凝集强度； 红细胞上与抗A，B的凝集强度； 红细胞上H抗原强弱 血清中是否存在抗A1; 分泌型人唾液中A及H物质的存在
A1 和 A2 亚型区别：A1和A2是血型血清学方法
确定的最重要的A型红细胞亚型。

有两种A型抗原：A和A1 A1亚型的红细胞上具有A1和A抗原，其血清中 含有抗B抗体；A2亚型的红细胞上只有A抗原， 其血清中除含抗B抗体外，还可能有少量抗A1 抗体。
Ａ３型：

很罕见的亚型（1／1000）
主要特征：与抗-Ａ和抗-Ａ,Ｂ均反应呈现混合 凝集现象 即A3细胞与抗-A和大多数抗-A，B孵育后出现一些 由数个红细胞形成的小凝集块，并被绝大多数游 离的非凝集红细胞包围。

无A1抗原
Ａ３型：

大多数人血清中无抗A1,偶见有抗A1；
有较强H物质
讨论
根据血清反应格局，1(有冷抗体影响)、2、5、 7号判断为亚型，其中5、7号未能检测出B抗原， 检出的基因型证实了相应基因的存在并最终确定 血型；3号是由于疾病使血型抗原减弱，4号可能 因疾病使抗体减弱，6号产生自身抗体使血型判断 困难，8号因血清中有较强的冷抗体影响了反定型， 9号可能是抗B减弱，此5例均通过AB0基因的检测 确定了血型。患者经基因检测确定血型，给予同 型血输注治疗均取得满意的效果。
样进一步作血清学以及分子生物学分析,并分类。
另外,使用抗H和抗A1,筛选A2、A2B亚型。
ABO亚型初筛 用抗A,抗B做正定型,用Ac,Bc、Oc做反定型。使
用96孔板,用Vivace型自动加样仪每份血样加
后,650g离心30s,放置10min,用判读仪比色并以肉眼
判断。凡正反定型不符或凝集明显较弱的血样,均进
病例分析

献血者屠某，女，36岁，原定为B型，与B 型白血病患者徐某主、次测配血均配合， 而与另一个体陆某血清在盐水介质中弱凝 集。

红细胞吸收放散试验：以效价128的抗A、 抗B试剂分别与屠某红细胞、A1B型红细胞在 4℃吸收1h，吸收后抗A效价64，抗B效价 0.A1B红细胞吸收后，抗A、抗B效价均为0. 经56℃放散，屠某红细胞放散液中抗A效价 为32，抗B为2，A1B型红细胞放散液中抗A、 抗B效价均为2.
3、红细胞吸收放散试验:在压积红细胞中 加入2 倍体积人源抗-A血清 ,混匀 ,37 ℃ 吸收30 min后转入4 ℃过夜 ,离心去血清 , 将吸收后的红细胞用 4 ℃生理盐水洗涤 5 次(末次洗液留作对照) ,56 ℃放散10 min ,离心取放散液 ,采用试管法 ,在室温 及 4 ℃分别与A型红细胞反应 ,检测红细 胞弱A抗原。
果未用抗-Ａ，Ｂ进行检测，则Ax表型易被误 定为Ｏ型。
其它A亚型——Ａx（Ao）型：

Ax型红细胞与B型血清（抗A抗体）不发生 凝集或弱凝集 与O型血清可发生程度不一的凝集，这可能 是因为O型血中抗A效价比B型血抗A效价高 及0型血清中有抗A、B抗体


故现做ABO血型鉴定时，应加O型血清（内 含抗A、抗B及抗AB），以防将Ax型误定为O 型。
如上所示,A亚型中,A亚型B的检出率明显较高,
和非亚型数据比较,检出率分别高出倍为:
(A2B/A2)/(AB/A)=2.84/0.368=7.72倍;
(AxB/Ax)/(AB/A)=3.67/0.368=9.97倍; (AelB/Ael)/(AB/A)=1.5/0.368=4.08倍。
血型
正定型试验 抗A 抗AB 抗H 抗A1
血型 物质
抗原数／细胞 （×103）
血清中抗－A1
A1
A2 A3 Aend Ax Am Ael
4+
4+
4+
4+
w+
2+ 3+ 3+ 4+ 4+ 4+
4+
0 0 0 0 0 0
A,H
A,H A,H H H A,H H
810~1170
240~290 35
无
少 很少
向东，刘曦，郭忠慧等，上海地区中国人群
中ABO亚型的研究，中国输血杂志，2006，19 （1）：25-27

目的 研究中国人群中各种ABO亚型分布的特点, 以及在A、B亚型中不规则ABO抗体的发生率。


方法 用常规方法对本中心2003～2004年的献血者
血样共440617份进行筛选,对于正反定型不符的血
容易被误认为O型；
白血病可引起抗原减弱，显现于A3类似的反
应
Ａend型：

与A3类似；
与一些抗A、抗A,B出现混合视野凝集；
但Ａend型个体唾液中只含H抗原，不含A物
质
其它A亚型——Ａx（Ao）型：

更罕见的亚型
主要特征：Ａ抗原十分弱，仅仅只能通过抗-
Ａ，Ｂ检测，通常其血清中存在抗-Ａ１。如
4、唾液血型物质检测:把抗-H单克隆试剂、 人源抗-A血清和人源抗-B 血清分别按呈现 ++凝集的最高稀释倍数稀释,将被检者的唾 液煮沸后,与稀释的抗-H单克隆试剂、人源 抗-A 血清和人源抗-B 血清作中和抑制试 验,检测是否有 H、A、B 血型物质。
1. 在室温及4 ℃,被检者红细胞与抗A、抗A1 、抗B 均不凝集,与
含不同抗原红细胞区别
与抗A血清反应 与抗A1血清反应 抗原位点数目 成人 脐血 α-乙酰-D-半乳糖 胺转移酶 A1型红细胞 4+ 4+ A2型红细胞 4+ —
1000000
250000
310000 140000 在PH6时最多、 在PH7时最多、 活性较强 活性较弱
其它A亚型

Aint亚型（A1-A2 intermediate）：与抗-Ａ1反 应程度介于Ａ１～Ａ２之间