生物化学20生物化学与分子生物学常用技术 (1)
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tangbinghua@bucm.edu.cn
二、基因打靶技术
tangbinghua@bucm.edu.cn
《生物化学》
第八章 生物化学与分子生物学技术
唐炳华（北京中医药大学）
中国中医药出版社
教学内容
第一节 第二节 第三节 第四节ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ第五节
印迹杂交技术 聚合酶链反应技术 DNA测序技术 重组DNA技术 转基因动物技术和基因打靶技术
tangbinghua@bucm.edu.cn
教学大纲
掌握：印迹杂交技术、聚合酶链反应技术、重组DNA 技术的基本原理
熟悉：常用印迹杂交技术，基因诊断 了解：生物芯片，常用PCR技术，DNA测序技术，转
基因动物技术和基因打靶技术
tangbinghua@bucm.edu.cn
2017年全国硕士研究生招生考试
临床医学综合能力（西医）考试大纲
(四)生化专题 10. 原癌基因、抑癌基因和生长因子的基本概念及作用
机制。原癌基因和抑癌基因的产物，功能与肿瘤的 关系 11. 常用的分子生物学技术原理和应用 12. 基因诊断的基本概念、技术及应用。基因治疗的基 本概念及基本程序
2．质粒pBR322载体
tangbinghua@bucm.edu.cn
3．pUC载体
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三、体外重组
1. 限制性内切酶 2. 连接酶 3. 连接方法
（1）平端连接 （2）互补黏性末端连接 （3）同聚物加尾连接 （4）加人工接头连接
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七、应用
1. 基因文库构建 2. 基因治疗 3. 基因工程技术制药
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第五节 转基因动物技术和基因打靶技术
一．转基因动物技术 二．基因打靶技术
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一、转基因动物技术
一、目的DNA制备
1. 组织细胞提取 2. 逆转录合成 3. PCR扩增 4. 化学合成
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二、载体选择
1. 载体结构 2. 质粒pBR322载体 3. pUC载体
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1．载体结构
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第一节 印迹杂交技术
一．印迹杂交基本原理 二．常用印迹杂交技术 三．生物芯片 四．印迹杂交技术与基因诊断
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一、印迹杂交基本原理
1. 电泳分离 2. 样品转移 3. 杂交
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二、常用印迹杂交技术
1. DNA印迹法 2. RNA印迹法 3. 蛋白质印迹法
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三、生物芯片——基因芯片
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四、印迹杂交技术与基因诊断
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四、印迹杂交技术与基因诊断
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1．插入失活
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2．蓝白筛选
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六、目的基因表达
重组DNA技术的主要内容之一就是要获得目的基因产 物
目前已经用原核细胞、真菌、植物细胞、昆虫细胞、 哺乳动物细胞等构建了各种表达系统
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第二节 聚合酶链反应技术
一．PCR基本原理 二．常用PCR技术
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一、PCR基本原理
1. 变性 高于模板熔点，约95℃ 2. 退火 低于引物熔点，约50℃ 3. 延伸 将反应体系温度升至延伸
温度（约72℃）
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二、常用PCR技术
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第三节 DNA测序技术
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第四节 重组DNA技术
一．目的DNA制备 二．载体选择 三．体外重组 四．基因转移 五．细胞筛选和DNA鉴定 六．目的基因表达 七．应用
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四、基因转移
1. 宿主细胞选择 2. 常用转移方法
① 氯化钙法 ② 噬菌体感染法 ③ 完整细胞转化法 ④ 原生质体转化法 ⑤ 电穿孔法 ⑥ 显微注射法
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五、细胞筛选和DNA鉴定
1．插入失活 2．蓝白筛选 3．遗传互补 4．核酸杂交分析 5．PCR分析 6．表达产物分析
二、基因打靶技术
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《生物化学》
第八章 生物化学与分子生物学技术
唐炳华（北京中医药大学）
中国中医药出版社
教学内容
第一节 第二节 第三节 第四节ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ第五节
印迹杂交技术 聚合酶链反应技术 DNA测序技术 重组DNA技术 转基因动物技术和基因打靶技术
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教学大纲
掌握：印迹杂交技术、聚合酶链反应技术、重组DNA 技术的基本原理
熟悉：常用印迹杂交技术，基因诊断 了解：生物芯片，常用PCR技术，DNA测序技术，转
基因动物技术和基因打靶技术
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2017年全国硕士研究生招生考试
临床医学综合能力（西医）考试大纲
(四)生化专题 10. 原癌基因、抑癌基因和生长因子的基本概念及作用
机制。原癌基因和抑癌基因的产物，功能与肿瘤的 关系 11. 常用的分子生物学技术原理和应用 12. 基因诊断的基本概念、技术及应用。基因治疗的基 本概念及基本程序
2．质粒pBR322载体
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3．pUC载体
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三、体外重组
1. 限制性内切酶 2. 连接酶 3. 连接方法
（1）平端连接 （2）互补黏性末端连接 （3）同聚物加尾连接 （4）加人工接头连接
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七、应用
1. 基因文库构建 2. 基因治疗 3. 基因工程技术制药
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第五节 转基因动物技术和基因打靶技术
一．转基因动物技术 二．基因打靶技术
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一、转基因动物技术
一、目的DNA制备
1. 组织细胞提取 2. 逆转录合成 3. PCR扩增 4. 化学合成
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二、载体选择
1. 载体结构 2. 质粒pBR322载体 3. pUC载体
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1．载体结构
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第一节 印迹杂交技术
一．印迹杂交基本原理 二．常用印迹杂交技术 三．生物芯片 四．印迹杂交技术与基因诊断
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一、印迹杂交基本原理
1. 电泳分离 2. 样品转移 3. 杂交
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二、常用印迹杂交技术
1. DNA印迹法 2. RNA印迹法 3. 蛋白质印迹法
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三、生物芯片——基因芯片
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四、印迹杂交技术与基因诊断
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四、印迹杂交技术与基因诊断
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1．插入失活
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2．蓝白筛选
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六、目的基因表达
重组DNA技术的主要内容之一就是要获得目的基因产 物
目前已经用原核细胞、真菌、植物细胞、昆虫细胞、 哺乳动物细胞等构建了各种表达系统
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第二节 聚合酶链反应技术
一．PCR基本原理 二．常用PCR技术
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一、PCR基本原理
1. 变性 高于模板熔点，约95℃ 2. 退火 低于引物熔点，约50℃ 3. 延伸 将反应体系温度升至延伸
温度（约72℃）
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二、常用PCR技术
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第三节 DNA测序技术
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第四节 重组DNA技术
一．目的DNA制备 二．载体选择 三．体外重组 四．基因转移 五．细胞筛选和DNA鉴定 六．目的基因表达 七．应用
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四、基因转移
1. 宿主细胞选择 2. 常用转移方法
① 氯化钙法 ② 噬菌体感染法 ③ 完整细胞转化法 ④ 原生质体转化法 ⑤ 电穿孔法 ⑥ 显微注射法
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五、细胞筛选和DNA鉴定
1．插入失活 2．蓝白筛选 3．遗传互补 4．核酸杂交分析 5．PCR分析 6．表达产物分析