第四章 细菌耐药性检测

第四章细菌耐药性检测

细菌耐药性产生的原因：

1、细菌自身因素：基因突变或获得耐药基因质粒

2、经验性使用抗菌素：致使细菌形成耐药或中介

3、对于未确诊为细菌感染者使用抗生素

4、滥用广谱抗生素

抗菌药物作用机制：

1、干扰细菌细胞壁的合成，使细胞不能生长繁殖

2、损伤细菌的细胞膜，破坏其屏障作用

3、影响细菌细胞蛋白质的合成，是细菌丧失生长

4、破坏核酸的代谢，阻碍遗传信息的复制

5、抑制细菌叶酸代谢等。

临床常用抗菌药物

1、β-内酰胺类：青霉素类，头孢菌素类，单环类、头霉素类等。机制：与青霉素结合蛋白结合，抑制细菌细胞壁合成。

头孢抗菌效果：对于革兰阳性球菌：一代>二代>三代

对于革兰阴性杆菌：三代>二代>一代

四代对革兰阳性球菌和革兰阴性杆菌几乎相同，并具有抗假单胞菌作用。

2、氨基糖苷类：

机制：①依靠离子的吸附作用，吸附在菌体表面，造成膜的损伤②和细菌核糖体30S小亚基发生不可逆结合，抑制mRNA的转录和蛋白质

的合成，造成遗传密码的错读，产生无意义的蛋白质。

3、大环内酯类

机制：①可逆结合细菌核糖体50S大亚基的23S单位，抑制细菌蛋白质的合成和肽链的延伸；②肺部浓度较血清浓度高③新一代大环内酯类具有免疫调节功能，能增强单核-巨噬细胞吞噬功能。

4、喹诺酮类：对革兰阳性菌无作用

作用机制：①通过外膜孔蛋白和磷脂渗透进入细菌细胞②作用DNA旋转酶，干扰细菌DNA的复制、修复和重组。

5、糖肽类和环脂肽类

6、磺胺类和三甲氧苄嘧啶

7、四环素类

8、林可霉素类

9、氯霉素类

抗菌药物敏感试验

意义：

1、可预测抗菌治疗的效果

2、指导抗菌药物的临床应用

3、发现或提示细菌耐药机制的存在，能帮助临床医生选择合适的药物，避免产生或加重细菌的耐药

4、检测细菌耐药性，分析耐药菌的变迁，掌握耐药菌感染的流行病学，以控制和预防耐药菌感染的发生和流行。

药敏试验抗菌药物选择的原则：考虑药物的临床疗效，耐药菌株流行

情况，预防耐药菌株产生和经济等综合因素。

目的：达到控制感染性疾病。

A组（首选）：包括对特定菌群的常规试验并常规报告的药物

B组：包括一些临床上重要的，特别是针对医院内感染的药物，也可用于常规试验，但只是选择性地报告

C组：包括一些替代性或补充性的抗菌药物，在A、B组过敏或耐药时选用

U组：仅用于治疗泌尿道感染的抗菌药物

O组，对该组细菌有临床适应症但一般不允许常规试验并报告的药物。试验方法：

1、稀释法：肉汤稀释法、琼脂稀释法

优点：精确，可靠，可用于研究

缺点：细菌生长情况不可查

2、纸片扩散法：半定量，最常用

影响因素：①培养基厚度②观察时间③标准菌株对照④菌量

注意事项：

①挑取至少3个菌落制作待测菌液

②接种时均匀密涂

③贴片时，用无菌镊子轻轻触压纸片，使之与培养基充分接触，贴纸片后不能更改纸片位置

④药敏纸片贴的数量要适量，一般9cm的平皿最多贴6张药敏纸片

⑤整个贴片过程应在15min内完成

3、E-test法：定量，但比稀释法更不准确。

4、联合药物药敏试验：

目的：①治疗混合型感染；

②预防或推迟细菌耐药性的发生；

③联合用药可以减少计量以避免达到毒性计量；

④对某些耐药细菌引起的严重感染，联合用药比单一用药效果更好。抗菌药物联合用药可出现四种结果：

①无关作用：两种药物联合作用的活性等于其单独活性

②拮抗作用：两种药物联合作用显著低于单独抗菌活性

③累加作用：两种药物联合作用时的活性等于两种单独抗菌活性之和

④协同作用：两种药物联合作用显著大于其单独作用的总和

细菌耐药机制

1、产生一种或多种水解酶、钝化酶和修饰酶；（具专一性）

2、抗生素作用的靶位改变，包括青霉素结合蛋白位点、DNA解旋酶、DNA拓扑异构酶Ⅳ的改变等；（具专一性）

3、细菌膜通透性下降，包括细菌生物被膜的形成和通道蛋白丢失；

4、细菌主动外排系统的过度表达。

细菌耐药监测

细菌耐药表型监测

1、葡萄球菌耐药性检测：青霉素耐药性和β-内酰胺酶检测（头孢硝噻吩纸片法）、甲氧西林/苯唑西林耐药性检测、VISA和VRSA检测、诱导克林霉素耐药性检测

2、肠球菌耐药性检测：万古霉素耐药性检测、氨基汤苷类高水平耐药检测

3、革兰阴性杆菌耐药性检测：超广谱β-内酰胺酶检测、碳青霉烯酶检测（EDTA协同试验和改良Hodge试验）

4、青霉素耐药肺炎链球菌检测

5、碳青霉烯类耐药菌鲍曼不动杆菌检测

细菌耐药基因型检测（少用）