硫酸软骨素含量测定方法的研究进展
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天津药学
Ｔ ｉ ａ ｎ ｊ ｉ ｎ Ｐ ｈ ａ ｒ ｍ ａ ｃ ｙ ２ ０ １ ３年
第２ ５卷
第 ２期
硫 酸 软 骨 素 含 量 测 定 方 法 的 研 究 进 展
张 莉
３ ０ ０ ０ ７ ０ ）
（ 天津市药 品检验所 ， 天津
摘
要
硫酸软骨 素是 一种 天然酸性黏多糖 ， 主要是从猪 、 牛或 鲨鱼等软骨提取 。作为药 品或保健 品 ， 主要 用于治疗
的《 卫生部药品标 准》 二部第六分 册。该法 的测定原 理是先将 ｃ ｓ酸水解成氨基葡糖 ， 然后在碱性条件下与 乙酰丙 酮反 应 ， 再 与 对 二 甲氨基 苯 甲醛 进 行 衍 生 显 红 色， 在５ ２ ５ ｎ ｍ 波长 处 测 定 吸 收 度 ， 以盐 酸 氨 基 葡 糖 作 对照品， 计算氨基葡糖 含量 ， 进而换算成 ｃ ｓ的含量。 因此方 法使 用 的 对 照 品 和 酸水 解 后 的产 物 有 所 不 同 ， 故 不 能真 实 的反 映其 主体 结 构 的 真 实 含 量 ， 准 确 度 较
种 异构 体 ， 以 Ａ和 ｃ异 构体 居多 ， 其均 由 Ｄ一葡 萄糖 醛 家药品标准化学药品地方标准上升 国家标 准》 （ 第九 酸 和 Ｎ一乙酰 一Ｊ Ｄ一氨 基 半 乳 糖 以 １ ， ３一糖 苷 键 结 合 册 ） ， 用 于 测定 多种 Ｃ Ｓ制 剂 。该 法 的测定 原 理是 利 用 的双 糖为 基本 单位 聚合 而成 。只是 硫 酸基 团的位 置 不 硫 酸 软骨 素 中的 Ｄ 一 葡 糖醛 酸 在饱 和 硼 酸溶 液 和 四硼 同， 前者 为 ４位 ， 后 者 为 ６位 。 目前 ｃ ｓ主要 是从 猪 、 牛 或 鲨鱼 等动 物 的喉 骨 和 鼻 中骨 等 软 骨 中 提取 ， 其 相 对
酸钠硫酸溶液 的共 同作用下加热生成糠醛 ， 在０ ． ２ ％ 咔唑 无水 乙醇 溶 液 中进 一 步 加 热 显 红 色 ， 显 色后 的溶 液在 ５ ２ ０ ｎ ｍ 波长 处有最 大 吸收 ， 测定 时 以葡糖 醛 酸为 对照 品 。该法 因需 要水 解 和显色 ， 实 验 过程 较 为烦 琐 、 复杂 ， 而且 干扰 因素较 多 。操 作过 程 中使 用 硫 酸 ， 也 给 操 作 者带来 诸 多 不 便 。虽 然 准 确 度 有 所 提 高 ， 但 专 属 性仍 然不 是很 好 。 １ ． ３ 酶解 一高 效 液 相 色 谱 法 ２ ０ １ ０年 版 的 《 中 国药 典》 采用 了酶解 一 高效液相色谱法 ， 用于测定 ｃ ｓ 钠 原料 、 片剂和 胶 囊 剂 。采 用 强 阴离 子交 换 硅胶 为填 充 剂 的色谱 柱 ， 分别 以水 （ ｐ Ｈ ３ ． ５ ） 和２ ｍｏ ｌ ／ Ｌ氯 化钠 溶 液（ ｐ Ｈ ３ ． ５）为 流 动 相 ， 进 行梯 度洗脱 ， 流速 为 １ ． ０ ｍ ｌ ／ ｍｉ ｎ ， 检测波长 为 ２ ３ ２ ｎ ｍ。用 Ｃ Ｓ钠 对 照 品作 为对 照， 按 外 标法 以硫 酸 软骨 素 Ａ、 Ｂ和 Ｃ的峰 面 积之 和计 算含 量 。反应 的原 理 为 Ｃ Ｓ钠 在硫 酸软 骨素 Ａ Ｂ Ｃ酶作
神经性头痛 、 心 绞痛 、 冠心病 ， 以及骨关节疾病 的治疗 等。本文着重 对近年 来硫 酸软骨 素含量测 定方 法的研究 进行综 述 ， 并对其各 自的含量测定 方法的原理和特点进行 了介绍 。硫 酸软骨素的测定方法虽然有很多种 ， 但每种 方法各有 其优点 和
缺点 ， 另外 适用 的 供 试 品 也 不 尽 相 同 ， 应 根 据 实 验 目的进 行 加 以选 择 应 用 。 关键词 硫 酸 软骨 素 ， 多糖 ， 含 量 测 定 文献标识码 ： Ａ 文章编 号 ： １ ０ ０ ６ — ５ ６ ８ ７ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ２ － ０ ０ ４ ４ － ０ ３ 中 图分 类 号 ： Ｒ ．
硫酸 软骨 素 （ ｃ ｈ ｏ ｎ ｄ ｒ ｏ ｉ ｔ ｉ ｎ ｓ ｕ ｌ ｆ ａ ｔ ｅ ， Ｃ Ｓ ） 是 一种 天然 酸 低 ， 结 果重 现性 不好 。
性 黏多糖 ， 属生物高分子化合物。ｃ ｓ有 Ａ、 Ｃ和 Ｄ三 １ ． ２ 测 定葡 萄糖 醛 酸 的咔唑 比色 法
该 法 收载 于 《 国
１ 我 国现行 的 法定 测定 方法 的应 用情 况 现执 行 的质 量 标 准 中硫 酸 软 骨 素含 量 测 定 方 法 主要 分 为三类 ， 即Ｅ ｌ ｓ ｏ ｎ—Ｍｏ ｒ ｇ ａ ｎ比色 法 、 咔唑 比色
法 和酶 解 一高效 液相 色谱 法 。 １ ． １ 测 定 氨 基 己糖 的 Ｅ ｌ ｓ ｏ ｎ—Ｍｏ ｒ ｇ ａ ｎ比色 法 早 在 用下 ， 将硫 酸 软骨 素钠 酶解 为硫 酸 软 骨素 Ａ、 硫 酸 软骨 １ ９ ８ ９年 ， ｃ Ｓ的质量 标 准 即 收 载 于 《 卫 生 部 药 品》 标 准 素 ｃ和少量 硫 酸 软 骨 素 Ｂ三 者 的 二 糖 单 元 。可 准 确 生 化药 品第 一 分 册 。后 此标 准 又 收 人 于 １ ９ ９ ８年 颁 布 判 断产 品软骨 的来 源 ， 精确地反映 Ｃ Ｓ钠 的 真 实含 量 ，
分 子质量 １ ０ ０ ０ ０～ ５ ０ ０ ０ ０ 。Ｃ Ｓ用 途 广 Biblioteka Baidu ， 主要 用 在 治
疗 神经性 头 疼 、 偏头痛 、 骨关 节 疾病 、 冠 心 病 和心 绞 痛 ，
对链 霉 素引起 的听觉 障碍具 有 显著 的临 床效 果 。 近年
来有 关硫 酸 软骨 素 与 氨 基 葡 聚糖 、 玻 璃 酸 钠 等 药 物 联 合使 用 ¨ ． ２ 治疗 骨性 关节 炎 的报 道越来 越 多 ， 制 成 复方 制 剂后其 抗 炎 、 镇 痛 效果更 加 显著 。随 着对 Ｃ Ｓ生理 功 能及 其理 化性 质 的进 一步 深入 研究 ， 在 医药 制剂 、 Ｅ ｔ 用 产品 、 医药 材 料 、 保 健 品等 领 域 ， ｃ ｓ的 用 途 将 更 加 广 泛， 越来 越 引起人 们 的重 视 。
Ｔ ｉ ａ ｎ ｊ ｉ ｎ Ｐ ｈ ａ ｒ ｍ ａ ｃ ｙ ２ ０ １ ３年
第２ ５卷
第 ２期
硫 酸 软 骨 素 含 量 测 定 方 法 的 研 究 进 展
张 莉
３ ０ ０ ０ ７ ０ ）
（ 天津市药 品检验所 ， 天津
摘
要
硫酸软骨 素是 一种 天然酸性黏多糖 ， 主要是从猪 、 牛或 鲨鱼等软骨提取 。作为药 品或保健 品 ， 主要 用于治疗
的《 卫生部药品标 准》 二部第六分 册。该法 的测定原 理是先将 ｃ ｓ酸水解成氨基葡糖 ， 然后在碱性条件下与 乙酰丙 酮反 应 ， 再 与 对 二 甲氨基 苯 甲醛 进 行 衍 生 显 红 色， 在５ ２ ５ ｎ ｍ 波长 处 测 定 吸 收 度 ， 以盐 酸 氨 基 葡 糖 作 对照品， 计算氨基葡糖 含量 ， 进而换算成 ｃ ｓ的含量。 因此方 法使 用 的 对 照 品 和 酸水 解 后 的产 物 有 所 不 同 ， 故 不 能真 实 的反 映其 主体 结 构 的 真 实 含 量 ， 准 确 度 较
种 异构 体 ， 以 Ａ和 ｃ异 构体 居多 ， 其均 由 Ｄ一葡 萄糖 醛 家药品标准化学药品地方标准上升 国家标 准》 （ 第九 酸 和 Ｎ一乙酰 一Ｊ Ｄ一氨 基 半 乳 糖 以 １ ， ３一糖 苷 键 结 合 册 ） ， 用 于 测定 多种 Ｃ Ｓ制 剂 。该 法 的测定 原 理是 利 用 的双 糖为 基本 单位 聚合 而成 。只是 硫 酸基 团的位 置 不 硫 酸 软骨 素 中的 Ｄ 一 葡 糖醛 酸 在饱 和 硼 酸溶 液 和 四硼 同， 前者 为 ４位 ， 后 者 为 ６位 。 目前 ｃ ｓ主要 是从 猪 、 牛 或 鲨鱼 等动 物 的喉 骨 和 鼻 中骨 等 软 骨 中 提取 ， 其 相 对
酸钠硫酸溶液 的共 同作用下加热生成糠醛 ， 在０ ． ２ ％ 咔唑 无水 乙醇 溶 液 中进 一 步 加 热 显 红 色 ， 显 色后 的溶 液在 ５ ２ ０ ｎ ｍ 波长 处有最 大 吸收 ， 测定 时 以葡糖 醛 酸为 对照 品 。该法 因需 要水 解 和显色 ， 实 验 过程 较 为烦 琐 、 复杂 ， 而且 干扰 因素较 多 。操 作过 程 中使 用 硫 酸 ， 也 给 操 作 者带来 诸 多 不 便 。虽 然 准 确 度 有 所 提 高 ， 但 专 属 性仍 然不 是很 好 。 １ ． ３ 酶解 一高 效 液 相 色 谱 法 ２ ０ １ ０年 版 的 《 中 国药 典》 采用 了酶解 一 高效液相色谱法 ， 用于测定 ｃ ｓ 钠 原料 、 片剂和 胶 囊 剂 。采 用 强 阴离 子交 换 硅胶 为填 充 剂 的色谱 柱 ， 分别 以水 （ ｐ Ｈ ３ ． ５ ） 和２ ｍｏ ｌ ／ Ｌ氯 化钠 溶 液（ ｐ Ｈ ３ ． ５）为 流 动 相 ， 进 行梯 度洗脱 ， 流速 为 １ ． ０ ｍ ｌ ／ ｍｉ ｎ ， 检测波长 为 ２ ３ ２ ｎ ｍ。用 Ｃ Ｓ钠 对 照 品作 为对 照， 按 外 标法 以硫 酸 软骨 素 Ａ、 Ｂ和 Ｃ的峰 面 积之 和计 算含 量 。反应 的原 理 为 Ｃ Ｓ钠 在硫 酸软 骨素 Ａ Ｂ Ｃ酶作
神经性头痛 、 心 绞痛 、 冠心病 ， 以及骨关节疾病 的治疗 等。本文着重 对近年 来硫 酸软骨 素含量测 定方 法的研究 进行综 述 ， 并对其各 自的含量测定 方法的原理和特点进行 了介绍 。硫 酸软骨素的测定方法虽然有很多种 ， 但每种 方法各有 其优点 和
缺点 ， 另外 适用 的 供 试 品 也 不 尽 相 同 ， 应 根 据 实 验 目的进 行 加 以选 择 应 用 。 关键词 硫 酸 软骨 素 ， 多糖 ， 含 量 测 定 文献标识码 ： Ａ 文章编 号 ： １ ０ ０ ６ — ５ ６ ８ ７ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ２ － ０ ０ ４ ４ － ０ ３ 中 图分 类 号 ： Ｒ ．
硫酸 软骨 素 （ ｃ ｈ ｏ ｎ ｄ ｒ ｏ ｉ ｔ ｉ ｎ ｓ ｕ ｌ ｆ ａ ｔ ｅ ， Ｃ Ｓ ） 是 一种 天然 酸 低 ， 结 果重 现性 不好 。
性 黏多糖 ， 属生物高分子化合物。ｃ ｓ有 Ａ、 Ｃ和 Ｄ三 １ ． ２ 测 定葡 萄糖 醛 酸 的咔唑 比色 法
该 法 收载 于 《 国
１ 我 国现行 的 法定 测定 方法 的应 用情 况 现执 行 的质 量 标 准 中硫 酸 软 骨 素含 量 测 定 方 法 主要 分 为三类 ， 即Ｅ ｌ ｓ ｏ ｎ—Ｍｏ ｒ ｇ ａ ｎ比色 法 、 咔唑 比色
法 和酶 解 一高效 液相 色谱 法 。 １ ． １ 测 定 氨 基 己糖 的 Ｅ ｌ ｓ ｏ ｎ—Ｍｏ ｒ ｇ ａ ｎ比色 法 早 在 用下 ， 将硫 酸 软骨 素钠 酶解 为硫 酸 软 骨素 Ａ、 硫 酸 软骨 １ ９ ８ ９年 ， ｃ Ｓ的质量 标 准 即 收 载 于 《 卫 生 部 药 品》 标 准 素 ｃ和少量 硫 酸 软 骨 素 Ｂ三 者 的 二 糖 单 元 。可 准 确 生 化药 品第 一 分 册 。后 此标 准 又 收 人 于 １ ９ ９ ８年 颁 布 判 断产 品软骨 的来 源 ， 精确地反映 Ｃ Ｓ钠 的 真 实含 量 ，
分 子质量 １ ０ ０ ０ ０～ ５ ０ ０ ０ ０ 。Ｃ Ｓ用 途 广 Biblioteka Baidu ， 主要 用 在 治
疗 神经性 头 疼 、 偏头痛 、 骨关 节 疾病 、 冠 心 病 和心 绞 痛 ，
对链 霉 素引起 的听觉 障碍具 有 显著 的临 床效 果 。 近年
来有 关硫 酸 软骨 素 与 氨 基 葡 聚糖 、 玻 璃 酸 钠 等 药 物 联 合使 用 ¨ ． ２ 治疗 骨性 关节 炎 的报 道越来 越 多 ， 制 成 复方 制 剂后其 抗 炎 、 镇 痛 效果更 加 显著 。随 着对 Ｃ Ｓ生理 功 能及 其理 化性 质 的进 一步 深入 研究 ， 在 医药 制剂 、 Ｅ ｔ 用 产品 、 医药 材 料 、 保 健 品等 领 域 ， ｃ ｓ的 用 途 将 更 加 广 泛， 越来 越 引起人 们 的重 视 。