在CCl4诱导的大鼠肝脏纤维化模型中肝功、肝脏纤维化程度的监测(1)
一１１３８——
１．１．１材料ＳＤ大鼠，雌性，１８０—２５０９，１００只。药物：４０％四氯化碳橄榄油溶液，４０％酒精。１．１．２实验动物分组ｓＤ大鼠，雌性，１８０—２５０ｇ。正常组１０只，肝硬化大鼠９０只。在肝硬化模型制备中，排除死亡动物，按照每实验组各５只动物作为统计学计算数量，实验用大鼠的数量足够使用。１．１．３给药方法ＣＣｈｏ．１ｍｌ／１００ｇ体重，１ｍｌ酒精，每天给一种药物，按顺序灌胃给药，给药２天后，停药１天。腹水的出现表明终末期肝硬化形成。终末期肝硬化形成后，四氧化碳药量酣晴减少，维持肝硬化腹水的状态，给药方案同上。每天观察大鼠外观的变化，当出现口鼻出血时，停止给药。１．１．４肝脏标本取材大鼠进行苯巴比妥麻醉，０．１５∥ｍｌ，打开腹腔，观察肝脏的外观变化，并拍照。取肝脏标本，置于１０％甲醛溶液浸泡２４ｈ。１．１．５石蜡切片制备按常规方法进行组织切片组织石蜡块的制备：组织块经过脱水、透明和浸蜡过程，组织中的水分被石蜡替代，并保持组织细胞的形态结构不变。脱水，乙醇置换组织细胞中的水的过程：所取组织从５０％乙醇、７０％、８５％、９５％直至无水乙醇的梯度脱水；透明．二甲苯置换酒精的过程：先经纯酒精和二甲苯各半的混合液浸渍１—２ｈ，再转人纯二甲苯中浸渍；浸蜡一石蜡掖体置换组织的浸蜡过程：先把组织材料块放在熔化的石蜡和二甲苯的等量混合液浸渍１—２ｈ，再先后移入２个熔化的石蜡液中浸渍３ｈ左右，组织中的水被石蜡置换。整个浸蜡过程由机器自动完成。浸蜡后的组织材料块放在装有蜡液的容器中，待蜡液表层凝固即迅速放入冷水中冷却，即做成组织包埋蜡块。
１．１．６切片制备及染色石蜡切片机连续切片，将完整的蜡片置于温水（４５＂Ｃ左右）中展平。捞至玻片上铺正，滤纸吸除多余水分，置入４５＂Ｃ温箱中干燥，
划Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒｔ２０７ｔＶｏｌ１ｌ，Ｎｏ．９得到石蜡切片。石蜡切片用二甲苯梯度脱蜡，再经无水乙醇直至蒸馏水浸泡，得到水化组织切片，进行ＨＥ及网状纤维染色。
１．２病理学检测
每隔７天解剖２只大鼠，取肝脏组织，切成１．５ｃｍ见方的体积，做盯脏的石蜡切片，ＨＥ染色和网状纤维染色相结合。苏木素．伊红（ＨＥ）染色观察肝小叶细胞变化和纤维化进展，网状纤维染色观察肝脏纤维化的进展，观察肝脏超微结构的变化规律。１．３肝功能指标的检测由中山大学附属三院的生化检验科完成。在检测肝功能和纤维化的指标时，用毛细针取眼血１—２ｍｌ，医院病理科送检。具体检测指标如下：
①反映肝纤维化４项指标：血清透明质酸（ＨＡ），层粘连蛋白（Ｌｍ，Ⅲ型前胶原（ＰｃⅢ），Ⅳ型胶原（Ⅳ．ｃ）。
②反映肝细胞蛋白合成代谢功能的指标：总蛋白ＴＰＲＯＴ（ｇ／Ｌ），自蛋白ＡＬＢ（ｇ／Ｌ），球蛋白ＧＬＢ（ｇ／Ｌ）。
③肝细胞受损的指标：谷草转氨酶＆ＳＴ（Ｕ／Ｌ），谷丙转氨酶ＡＬＴ（Ｕ／Ｌ），胆碱脂酶ＣＨＥ（Ｕ／Ｌ）。
④反映肝脏胆排泄、分泌及解毒功能的指标：总胆红素ＴＢＩＬＩ（ｖｍｏｌ／Ｌ），直接胆红素ＤＢＩＬＩ（ｍｎｏｌ／Ｌ），闯接胆红素ＩＢＩＬＩ（ｇｍｏｌ／Ｌ），总胆汁酸ＴＢＡ（ｆｍ∥Ｌ）。
⑤胆汁淤积指示酶（包括同工酶）有帮助的酶指标：古氨酰转肽酶ｃＧ“Ｕ／Ｌ），碱性磷酸酶ＡＬＰ（Ｕ／Ｌ）。
数据处理：各项指标的检测都用丁检验，检验水准设为０．０５。
２结果
２．１肝纤维化模型的建立
图中可见，肝硬化大鼠的肝脏呈现颗粒样改变，为肝硬化结节的表现。此时的肝脏已经有大量腹水，为终末期肝硬化（见图１）。
围１肝硬化大鼠的解剖和病理图片，圈片为放太２∞倍
在CCl4诱导的大鼠肝脏纤维化模型中肝功、肝脏纤维化程度
的监测
作者：徐川， 董云旭， 吕文天， 赵大兵， 王劲， 姜在波， 张建生， 朱康顺， 单鸿
作者单位：中山大学附属第三医院放射科,广东,广州,510630
刊名：
中国实验诊断学
英文刊名：CHINESE JOURNAL OF LABORATORY DIAGNOSIS
年，卷(期)：2007,11(9)
被引用次数：2次
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本文读者也读过(10条)
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APJ拮抗剂Apelin13(F13A)对肝纤维化大鼠肝脏Beclin1、LC3和p62表达的影响
APJ拮抗剂Apelinl3 ( F13A)对肝纤维化大鼠肝脏 Beclin 1. LC3和p62表达的影响 刘明;曾斌;肖婷筑王珊;姚梦娜 【期刊名称】《医学信息》 【年(卷)，期】2015(000)025 【摘要】目的观察血管紧张素受体ATI相关的受体蛋白(APJ)拮抗剂Apelinl3(F13A)对肝纤维化大鼠肝脏中自噬相关基因Beclin 1、LC3和p62表达的影响。方法30只雄性SD大鼠随机分为对照组、肝纤维化模型组和Apelinl3(F13A)(100pg/kg)处理组。采用四氯化碳(CCI4)诱导大鼠肝纤维化模型。Apelinl3(F13A)通过腹腔注射给药。取肝左叶同一部位,苏木精-伊红(HE) 染色观察肝脏的病理形态学变化。Western blot检测肝脏中自噬相关基因Beclin 1、LC3和p62的表达。结果对照组大鼠肝脏的肝小叶结构完整，肝索排列整齐,结构完整,肝细胞排列整齐，没有发现明显的胶原纤维增生，纤维化程度分级为0级；肝纤维化模型组大鼠肝小叶结构破坏严重,肝细胞排列紊乱,汇管区发现明显的坏死细胞和炎性细胞，可见大量胶原纤维增生,形成纤维纵隔，纤维化程度分级为多为3-4级；与模型组比较,Apelinl3(F13A)组大鼠肝脏组织肝细胞变性和坏死明显减少，纤维化程度明显减轻,纤维化程度分级多为1-2级。与对照组t出交，肝纤维化大鼠Beclin 1和LC3的表达显著增加，而p62的表达显著降低(均＜0.05)。与肝纤维化模型组大鼠比较，Apelinl3(F13A)降低了Beclin 1和LC3的表达,而增加了p62的表达(均＜ 0.05)。结论APJ拮抗剂Apelinl3(F13A)抑制了CCI4诱导的大鼠肝纤维化，其机制可能与Apelinl3(F13A)抑制细胞自噬有关。
肝纤维化指标正常值
肝纤维化指标正常值 肝纤维化指标正常值，指的是对肝脏进行纤维化程度检查时，所参考的几个有意义的项目的正常范围。 具体来说，肝纤维化指标正常值就是：PCⅢ(即III型前胶原)的正常值、IV-C(即IV型胶原)的正常值、LN(即层粘连蛋白)的正常值、HA(即透明质酸酶)的正常值、CG (即甘胆酸)的正常值、PLD (即脯氨酸肽酶)的正常值、MAO (即单胺氧化酶)的正常值、PINP (即Ⅰ型前胶原氨端肽原)的正常值。 肝纤维化指标是对肝纤维化程度的一个评估标准。及早发现肝纤维化指标和正常值存在偏差，及早展开治疗，有利于遏制肝纤维化向更坏的趋势发展。因此，肝纤维化指标正常值相当重要。 想要得到肝纤维化指标正常值的准确数据，需要在检查前注意以下事项。 首先，检查前不能进食。肝脏抽血检查要求空腹，空腹时间一般为8—12个小时。 其次，检查前一天不能喝酒。喝酒会导致转氨酶升高，从而影响检查结果。 再次，检查前不要服用药物。有些药物会加重肝脏负担，造成肝功能暂时性损伤，从而引起肝纤维化指标检查结果的准确性。
第四，检查前要注意保证充足的睡眠，且不要进行剧烈运动。因为这些都有可能影响检查结果的准确性。 最后，接受肝穿刺活检时，一定要经过患者的同意。 在接受完静脉抽血后，就可以得到检查者的肝纤维化指标数据了。将这一数据和肝纤维化指标正常值相对比，就可以判断肝脏内的肝纤维化水平处于哪一阶段，以及是否需要治疗了。 肝纤维化指标正常值 指标具体项目正常值 PCⅢIII型前胶原低于18ng/mL IV-C IV型胶原30—140ng/mL之间 LN 层粘连蛋白50—180ng/mL之间 HA 透明质酸酶低于120ng/mL PLD 脯肽酶1107±19.5u/L之间 MAO 单胺氧化酶 3.3—15.1nmol/(s·L)之间有纤维化指标正常值，就有异常情况。肝纤维化指标的异常结果，主要有： PCⅢ超出纤维化指标正常值，连续上升，提示病情可能有恶化并向肝硬变发展。 IV-C超出纤维化指标正常值，能反映肝纤维化的程度逐渐加重。 LN水平超出纤维化指标正常值，数值越高，患者的食管
水飞蓟素抑制单核细胞来源的巨噬细胞肝脏浸润抗小鼠肝纤维化作用
水飞蓟素抑制单核细胞来源的巨噬细胞肝脏浸润抗小鼠肝纤维 化作用 研究背景肝纤维化是由多种慢性肝病引起的肝脏炎症和修复失调所导致的,如病毒感染、毒物损伤、代谢紊乱和酒精滥用等,其特征是细胞外基质(extracellular matrix.ECM)过度沉积。肝脏中的纤维沉积,尤其是I型胶原, 可以保护肝细胞免受各种毒性刺激。 然而,过度的纤维沉积和调节失调会导致肝脏结构破坏、肝功能衰竭和肝硬化。到目前为止,临床上还没有有效的治疗肝纤维化的药物。 为寻找更好的治疗靶点,近年来对肝纤维化的病理生理机制进行了深入研究。大量的研究表明,固有免疫,特别是巨噬细胞在肝纤维化中起着关键作用。 肝巨噬细胞可通过多种途径促进肝纤维化,如释放促炎症因子,如肿瘤坏死 因子(TNF)-α、白细胞介素-1β和白细胞介素-6,诱导肝细胞坏死,促纤维化细胞因子,如转化生长因子(TGF)-β1直接激活肝星状细胞(HSC)。肝脏中巨噬细胞的来源主要有两种:一种是来源于胚胎祖细胞的存活时间长、自我更新的常驻库弗细胞(KF)。 在稳定状态下,肝脏中巨噬细胞数量的平衡主要依赖于KFs细胞的自我更新和增殖。另一种是在病理状态下从骨髓和外周血中迁移而来的单核细胞。 肝脏损伤后,外周血中的单核细胞大量趋化进入肝脏,并被活化成为巨噬细胞,释放促炎症因子和促纤维化因子,加剧了肝损伤和纤维化。这些发现表明抑制单核细胞浸润可能是治疗肝纤维化的一个新靶点。 进一步的研究发现,单核细胞主要根据细胞表面分子Ly6C分为两大亚群:经典单核细胞(Ly6Chi单核细胞)和非经典单核细胞(Ly6C]o单核细胞)。经典的单
核细胞表达高水平的CCR2和Ly6C,并表达低水平的CX3CR1,具有促炎症和促纤维化作用。 而非经典的单核细胞表达高水平的CX3CR1和低水平的CCR2和Ly6C,具有抗炎和抗纤维化作用。Ly6Chi单核细胞高表达的CCR2受体可与急慢性肝病时升高的趋化蛋白1(MCP-1)结合,导致Ly6Chi单核细胞向肝脏的趋化。 与野生小鼠相比,MCP-1-/-和CCR2-/-小鼠在毒性(四氯化碳,CCL4)和代谢(methionine choline-deficient)两种肝纤维化模型中显示较少的肝纤维化。药理抑制MCP-1的小鼠也出现类似现象。 因此,通过MCP-1/CCR2轴减少单核细胞浸润已成为肝纤维化治疗的重要靶点。水飞蓟是菊科药用植物。 水飞蓟素是一种含有水飞蓟全部药用成分的化合物,主要含有水飞蓟宾、异水飞蓟宾、水飞蓟宁和水飞蓟亭。水飞蓟素作为一种传统的保护肝的药物,具有特殊的疗效和极低的毒性,广泛应用于肝病的治疗。 许多临床和动物研究已经证实水飞蓟素具有保护肝细胞和抗肝纤维化的作用,但潜在机制仍然模糊不清。因此,本研究旨在研究水飞蓟素是否可以通过抑制Ly6Chi单核细胞的浸润而减轻四氯化碳诱导的肝纤维化。 以此来揭示水飞蓟素的保肝和抗肝纤维化的作用机理,为临床上更好的应用水飞蓟素提供充足的理论支持,且为今后治疗肝纤维化疾病提供新方向。研究方法本论文分为理论研究和实验研究两部分。 第一部分总结了中西医对肝纤维化的研究进展。第二部分研究了水飞蓟素抗纤维化的作用机制。 在理论研究部分,完整的叙述了中医先贤对肝纤维化病因病机、辨证和治疗
四氯化碳诱导大鼠肝纤维化模型改良的研究_邵佳亮
收稿日期:2011-05-18 基金项目:国家自然科学基金(30760230) 作者简介:邵佳亮(1980-),男,硕士,住院医师,主要从事肝纤维化的研究。 通信作者:胡国信,副教授,E -mail:hug uo x in8228@sina.co m 。 四氯化碳诱导大鼠肝纤维化模型改良的研究 邵佳亮,万赞燕,胡国信 (南昌大学第一附属医院感染科,南昌330006) 摘要:目的 构建肝纤维化大鼠模型,并对经典四氯化碳(CCl 4)复制模型方法进行适当改进。方法 取Sprague -Daw ley(SD)大鼠40只,雌雄各半,按随机数字表法分为A 组10只、B 组14只和C 组16只。B 组给予大鼠腹腔注射40%CCl 4花生油溶液2mL kg -1,2次 周-1,同时给予普通全价饲料喂养(改良方法);A 组为正常对照组,给予等量花生油腹腔注射,2次 周-1,同时给予普通全价饲料喂养;C 组给予大鼠腹腔注射40%CCl 4花生油溶液5mL kg -1,2次 周-1,同时给予添加10%猪油及2%胆固醇的饲料喂养(经典方法)。实验第8周末处死各组剩余大鼠:采用酶联免疫吸附法检测血清肝功能(A L T 、AST 、A L B 、T P 、A/G)水平;H E 及M asson 染色观察大鼠肝组织病理学变化。结果 实验第8周B 、C 组均可见明显肝功能损害表现。B 组可见部分标本肝脏假小叶形成,达到早期肝硬化,肝细胞少量脂肪变性,死亡率28.6%。C 组均已形成明显肝硬化,弥漫性肝细胞脂肪变性,死亡率43.7%。结论 低剂量CCl 4诱导并给予普通饲料喂养可成功建立大鼠肝纤维化模型,并明显降低大鼠死亡率,提高了模型质量及实验效率。 关键词:四氯化碳;肝纤维化模型;改良;动物,实验;大鼠 中图分类号:R-332 文献标志码:A 文章编号:1000-2294(2011)07-0040-03 Improved Rat Model of Liver Fibrosis induced by CCl 4 SHAO Jia -liang,WAN Zan -yan,HU Guo -xin (Dep ar tment of I nf ectious Diseases ,the First A f f iliated H osp ital of N anchang Univ ersity , N anchang 330006,China) ABSTRACT:Objective To establish a rat m odel of liver fibrosis,and to improv e the classical CCl 4induction method.Methods Forty SD r ats (20female and 20male)w ere r ando mly divided into three gro ups.Gro up B (n =14)w as given intraperitoneal injection of 2mL kg -1of 40%CCl 4solution (a mix ture of CCl 4and peanut oil)tw ice a w eek and the feeding of no rmal complete diet.Gro up A (n =10)w as given intraperitoneal injection of 2mL kg -1of peanut oil tw ice a w eek and the feeding of nor mal com plete diet.Gro up C (n =16)w as given intr aper ito neal injec -tion of 5mL kg -1of 40%CCl 4solution tw ice a w eek and the feeding of diet containing 10%lar d and 2%cholesterol.Rats w ere killed at the end of 8w eeks,and the levels o f ser um ALT ,AST ,Alb,T P and A/G w ere determined by ELISA.The patho logical changes in liver tissue w ere ob -served by H E and M asso n staining.Results Liv er function w as damag ed apparently by CCl 4in -jectio n.Some specimens in g roup B pro duced false flo cculus and achieved the ear ly stage of liver fibro sis,w ith fatty deg ener ation in a few liver cells.A ll specimens in gr oup C had cirrhosis w ith diffuse hepatic steato sis.The m ortality w as 28.6%and 43.7%in gro up B and g roup C,respec -tively.Conclusion Liv er fibrosis can be induced by injection o f low do ses of CCl 4and feeding of norm al co mplete diet in rats.In addition,the improved m ethod can reduce the mortality and im -40南昌大学学报(医学版)2011年第51卷第7期 Jou rnal of Nanch ang University(M edical Science)2011,Vol.51No.7
大鼠肝纤维化模型的制备
中文摘要 目的本文通过对SD大鼠腹腔注射四氯化碳以诱导大鼠肝纤维化动物模型。 方法取15只SD大鼠，180—220g，分为A组10只，B组5只，A组为模型组：40%CCL4橄榄油混合液按0.12ml/100g腹腔注射，一周两次，共八周。B组为对照组：纯橄榄油按0.12ml/100g腹腔注射，一周两次，共八周，八周后，禁食12小时处死全部大鼠，解剖取肝组织。病理学检测：HE染色，MASSON染色,PAS染色。基因学检测：1.3.4型胶原蛋白 结果八周试验期间B组大鼠全部存活，肝组织标本结构清晰，无异常情况；A组大鼠出现明显的病态，肝组织标本均已达到肝纤维化S3以上，多数标本可见小叶被纤维结构分割包围，假小叶形成，干细胞可见脂肪变性； 结论该方法肝损伤明显，死亡率低，周期短，能够成功作为慢性肝损伤，肝纤维化的模型。 关键词肝纤维化，四氯化碳，动物模型 Abstract Objective: Established animal model of hepatic fibrosis in rats induced by carbon tetrachloride. Methods: Take 15 SD rats,180-220g, divided into 10 group A, group B 5 只, A group of model group: 40% CCL4 0.12ml/100g by abdominal injection of a mixture of olive oil, twice a week, a total of eight weeks. Group B was the control group: pure olive oil press 0.12ml/100g abdominal injection twice a week, a total of eight weeks, eight weeks later, all rats were fasted for 12 hours were sacrificed, dissected liver tissue. Pathology: HE staining, MASSON staining, PAS staining. Genetics testing: 1.3.4 collagen Results: During the eight-week test group B rats survived, liver tissue specimens clear structure, no exceptions; significant morbidity A rat liver tissue fibrosis S3 have reached above, the majority of samples are split fiber structure visible lobular surrounded pseudo lobule formation, stem cell degeneration visible fat. Conclusion: This method obviously liver injury mortality, the period is short, to be successful as chronic liver damage, liver fibrosis model. Key words: Fibrosis, carbon tetrachloride, animal model 前言
肝纤维化的诊断指标及联合测定的临床意义
肝纤维化的诊断指标及联合测定的临床意义 大部分的慢性肝脏损伤都会引起肝纤维化和肝硬化，治疗终末期肝硬化的唯一有效手段就是肝移植，但是，即使是在发达国家，由于的供肝的不足和受者对手术不能耐受，肝移植技术无法完全解决肝硬化问题。近年来肝纤维化日益受到人们的重视，已成为肝病研究领域的热点。诸多病因如病毒、酒精、药物等所致的肝细胞炎症、坏死均可引起肝纤维化，肝纤维化为慢性肝病发展至肝硬化过程中的病理组织学变化，是发展到肝硬变的必经阶段.，其机理相当复杂，目前认为它主要是多种因素造成肝细胞外基质的过度增多和异常沉积，其主要成分包括胶原蛋白、糖蛋白、蛋白多糖和弹力纤维。尤其我国是世界公认的乙肝大国，发病人数居高不下，肝纤维化继续发展可导致肝硬化外，部分可发生癌变。 现认为肝纤维化尚有逆转至正常肝的可能，而肝硬变则否，认为阻止或延缓肝纤维化的发生和发展就能治愈大部分慢性肝病患者，给予有效治疗还可防止发展为肝硬化、肝癌。因此，人们期望对肝纤维化作出早期诊断，如何诊断肝纤维化，超声波、影像等一旦发现多数已在中期以上肝硬化阶段，能够早期诊断肝纤维化的方法至今主要依靠肝活检，临床称之为金标准。但，因其属损伤性检查，患者多不愿接受，作为抗肝纤维化药物疗效考核指标更难，因需多次活检、穿刺部位及样本大小等有其局限性； 肝脏B超是了解肝脏形态结构的非创伤性检查； 常用的肝功能检查法仅反映肝脏炎症、坏死及功能的改变；在肝穿刺不易推广的情况下与肝纤维化相关的血清学诊断方法受到关注，其项目日益增加； 血清肝纤维化标志物测定是无创伤性的，是从生化代谢方面判定肝纤维化的活动度，可进行动态观察，虽不能代替肝活检，但其与肝纤维化程度密切相关，因此临床上有其实用诊断价值，现临床所测肝纤维化的血清学指标只反映了慢性肝病肝纤维化过程的某个阶段及成分的变化，其临床意义应作综合分析评价。 肝纤维化的诊断指标 肝纤维化的诊断指标四项内容：透明质酸、Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原、层粘连蛋白。 透明质酸(hyaluronic Acid HA) 【正常参考值】血清：<100 ng/ml 【临床意义】HA是一种产生于间质细胞的氨基多糖，分子量4，000-8，000万，由肝内皮细胞摄取、降解，其广泛存在于结缔组织、皮肤、关节液及玻璃体液中，
四氯化碳腹腔注射致大鼠肝纤维化机理研究
四氯化碳腹腔注射致大鼠肝纤维化 机理研究 【摘要】目的观察四氯化碳腹腔注射制作大鼠肝纤维化模型时相关细胞因子 的变化，初步探讨四氯化碳腹腔注射致大鼠肝纤维化的机理。方法以四氯化碳腹腔注射的方法[四氯化碳 mL (用花生油1∶6稀释)/次，每周3次，共14周]制作大鼠肝纤维化模型，设立正常、溶剂对照组，检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原含量;ELISA法检测转化生因子ββ1)、肿瘤坏死因子α);化学法检测血清氧化亚 氮(NO)。肝行HE和Masson胶原染色，光镜下观察病改变，并按SSS计分系统进行评分。免疫组化染色观察肝组织血小板源生长因子的变化，专业像分析进行图像分析。结果与正常对照组、溶剂对照组比较，模型组血清ALT、AST、HA、LN、、NO、β1 、α明显升高
()，大鼠肝组织肝纤维化评分明显升高()，肝组织表达明显增多()。结论促进相关细胞因子的表达可能是四氯化碳腹 腔注射致大鼠肝纤维化的机理之一。 【关键词】四氯化碳;肝纤维化;细胞因子 Abstract:Objective To investigate the variation of correlated cytokine when the rat models of hepatic fibrosis were induced by intraperitoneal injection of carbon tetrachloride,and to the relevant molecular mechanism. Methods Rat models of hepatic fibrosis were made by intraperitoneal injection of carbon tetrachloride at mL(diluted 1∶6 with peanut oil),three times a week,a total of 14 weeks. The normal and dissolvent groups were prepared as controls. Serum β1 and α were detected by ELISA method. Serum levels of NO were detected by
肝纤维化动物模型的研究概况
肝纤维化动物模型的研究概况 摘要：建立一个与人类肝纤维化的发生机制相似的肝纤维化的动物模型对于肝病的预防与治疗有十分重要的意义；总结阐述目前常用的肝纤维化模型的造模方法，并比较各种方法的优缺点，以期对实践产生指导意义。 关键词：肝纤维化；动物模型 肝纤维化是细胞外基质在肝内过度沉积的病理改变，也是许多肝病的中间环节。建立一个与人类肝纤维化的发生机制相似的肝纤维化的动物模型一直是科学研究的难点。选择适当的肝纤维化动物模型是深入研究肝纤维化发病机制的重要基础，也是筛选防治肝纤维化药物的有效手段。近年来，肝纤维化动物模型的研究也取得了可喜的进展。现将目前常用的造模方法及其原理、特点综述如下。 1 中毒性肝损伤模型 1.1 四氯化碳法 四氯化碳（carbon tetochloride，CCL4）是最广泛使用的化学肝毒物。CCL4法造模的途径包括口服、腹腔注射和皮下注射，造模时间由途径和剂量决定，一般为8周至4月不等［1］。如，40％CCL4油溶液，按2mL/kg体重的剂量，予Wistar大鼠腹腔注射，每周2次，共8周，可成功复制肝纤维化模型［2］。 CCL4是氯化烷烃类化合物，可选择性损害肝、肾功能。CCL4进入体内后可直接进入肝细胞，溶解肝细胞膜上的脂质成分；也可以通过影响肝细胞细胞色素P450依赖性混合功能氧化酶的代谢，生成活泼的三氯甲基自由基和氯甲基自由基，启动脂质过氧化作用，致肝细胞损伤，变性，坏死，长期反复刺激可诱导肝纤维化形成。 CCL4致肝纤维化动物模型造模途径多样，简便，费用低廉，病理特征稳定可靠，复制时间短。CCL4诱导的肝纤维化动物模型在形态学、病理生理学的某方面与人肝纤维化相似［3］。该模型的原始启动机制显然是毒性化学物质对肝脏的损伤作用，比较适合药物性肝炎方面的研究。但是能否准确反映病原微生物感染人体后导致肝纤维化的机理，尚待进一步探讨。其缺点在于CCL4肝毒性作用剧烈、动物死亡率高，不适合于周期较长的实验研究。 1.2 二甲基亚硝胺法 1％二甲基亚硝胺（DMN）生理盐水稀释液，按10mL/kg体重的剂量腹腔注射，第1周连续3次，第2、3、4周各1次，6、7周各连续2次，8周可诱导大鼠肝纤维化动物模型［4］。
稳定大鼠原位肝移植模型的建立
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２００９年５月第６卷第１３期 图１腹主动脉灌注图２修肝及套管 圈３肝脏血管系统吻合完成 当延长供肝的冷缺血时间并不明显增加术后死亡率及并发症的发生。而术中过多地牵动供肝则会明显影响供肝的质量嗍。手术分离时尽可能去除血管壁周围的筋膜、结缔组织等。防止再通后造成套管腔狭窄及血栓形成。 ３．２供肝灌注 先松开门静脉夹，再松开肝下下腔静脉夹，均缓慢松开。灌洗压力过大容易引起供肝的细胞器肿胀、细胞坏死和淋巴细胞浸润，导致细胞内钙超载和能量代谢障碍．从而影响移植肝的质量。本研究采用的是经腹主动脉的灌注法。以１￣２ＩｌｉＯｎ的速度灌注腹主动脉，灌注液体经过肝动脉和门静脉系统回流入肝脏，从而保证肝脏得到充分、缓慢而均匀的灌注，提高供肝的质量。 ３．３袖套管放置 套管必须保证硬度适中、内壁光滑。由于不重建肝动脉，而胆道血供多由肝动脉供应．故供肝胆总管不应保留过长．有利于减少胆道并发症。在脾静脉水平安放门静脉袖套较为方便。在左肾静脉水平剪断ⅣＣ。有利于袖套的翻转。 ３．４受体手术 笔者在进腹时习惯取中上腹横切口，而此过程中笔者建议结扎左右腹壁下静脉，首先该血管相对较粗大，出血会影响术野，其次该血管的出血量相对于只有１２一１３“血容量的大鼠来讲会是术后出血性休克死亡的重要原因。受体术前１５ｒｎｉｎ常规给予阿托品对于预防术后肺炎、肺不张有较好的效果ｆＩｑ。供肝恢复血供后对于肝门部的处理，使用血供较好的大网膜覆盖，既有加压防止出血、使胆漏和胆道感染局限化的作用，同时可以适当供给胆道血供，可以预防胆道并发症的发生【ｌｌｌ。受体阻断门静脉后，经门静脉注入羟乙基淀粉 ?论著? 注射液可将肝内残存的血液及时推人体循环。起到“自身输血”的作用。在ＳＶＣ的吻合过程中，缝线不宜过紧。防止血管狭窄。供肝门静脉及ＩＶＣ“套管法”吻合前，必须排出阻断夹后方的一段积血。以防止血栓栓塞。Ｐａｅｈｅｃｏ等旧研究表明，随门静脉淤血时间的延长。再灌注后闲肠道内菌群移位而使内毒素骤升。如此可激活肝脏Ｋｕｐｆｆｅｒ细胞，产生大量的ＴＮＦ—Ｏｔ及一系列的级联反应。从而对供肝及受者的肺脏产生损伤１７．Ｌａ－ｌ川。同时．ＩＶＣ阻断时间的延长会导致血钾浓度显著升高。在供肝恢复血供的过程中．应缓慢放开无创血管夹，而且应按顺序先放开门静脉。后放开肝上上腔静脉，尽量使心脏逐渐适应血容量的增加。 ４结论 重复是技巧之母．所以大量的练习是提高手术技巧的关键。认真、耐心、仔细的手术是成功的关键。对于供肝的提早冷缺血处理及对供肝植入后的细心操作。使得手术成功的机会大大增加。 【参考文献】 【１】ＫａｍａｄａＮ，ＣａＭｅＢＹ．ＡｓｕｒｇｉｃａｌｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅｗｉｔｈｆｉｖｅｈｕｎｄｒｅｄｔｈｉｒＩｙｌｉｖｅｒｔｒａｎｓｐｌａｎｔｓｉｎｔｈｅｒａｔ【Ｊ】．Ｓｕｒｇｅｒｙ，１９８３，９３（Ｐｔｌ）：６４－６９． 【２】宇汝胜，汪泳，钱海鑫．大鼠原位肝移植模型的手术操作技巧探讨阴．肝胆胰外科杂志．２００８．２０（１）：７－９． 【３】权毅，付华。徐亮．大鼠原位肝移植模型的建立和术式改进阴．中国现代医学杂志．２００６．１６（２）：２２６－２２９． 【４】ＷａｎＣＤ，ＣｈｅｎｇＲ，ＷａｎｇＨＢ。ｅｌａ１．１ｒａｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｙｅｆｆｅｅｔａｏｆｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓｄｅｒｉｖｅｄｆｒｏｍａｄｉｐｏｓｅｔｉｓｓｕｅｓｉｎａｒａｔｏｒｔｈｏｔｏｐｉｃｌｉｖｅｒｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｍｏｄｅｌ陬ＨｅｐａｔｏｂｉｌｉａｒｙＰａｎｃｒｅａｔＤｉｓＩｎｔ，２００８，７（１）：２９—３３． 【５】汪根树。陈规划，朱晓峰．大鼠小体积原位肝移植模型的建立田．中国实验诊断学，２００６，（１０）：儿１９－１１２２． 【６】贾凯，徐钧．二袖套法大鼠原位肝移植术的改进们．山西医科大学学报，２００６，３７（４）：３５６－３５８． 【７】ＴｉａｎＹ，ＪｏｅｈｕｍＷ，Ｇ∞晒ｅｖＰ，ｅｔａ１．Ｋｕｐｆｆｅｒｃｅｌｌ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔＴＮＦ－Ｍｐｈａｓｉｇｎａｌｉｎｇｍｅｄｉａｔｅｓｉｎｊｕｒｙｉｎｔｈｅａｒｔｅｒｉａｌｉｚｅｄｓｍａｌｌ—ｆ打一ｓｉ∞ｌｉｖｅｒｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｉｎｔｈｅＩｎｏｕｏｅ叽ＰｌｏｃＮａｉｌＡｃａｄＳｃｉ．２００６，１０３（１２）：４５９８－舢奶． 【８】ＵｍｔａＫＮａｎｙｅｎＢ，Ｂｍｕｈ＆ｅｔａ１．Ｄｅｃｒｅａｓｅｄｓｕｒｖｉｖａｌｉｎｒａｔｌｉｖｅｒｔｒａｒｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎｗｉｔｌｌｅｘｔｅｎｄｅｄｃｏｌｄｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ：ｒｏｌｅ０ｆｐｏｒｔａｌｖｅｉｎｃｌａｍｐｉｎｇｔｉｍｅＩＪ］．Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，１９９８，２８（２）：３６６－３７３． 【９】邵堂雷，蔡伟耀，张明钧，等．影响肝移植鼠近期存活的术中因素分析叨．上海第－－ｇｇ科大学学报，２００１，２１（３）：２２３—２２５． 【１０】彭勇，龚建平，刘长安，等．大鼠原位肝移植模型制作过程中麻醉方法的选择【Ｊ】．中华普通外科杂志，２００３，１２０）：６７３－－６７６． 【１ｌ】常顺伍，郑树森，梁廷波，等．大鼠原位肝移植术中胆道重建方法的改进【Ｊ】．中华器官移植杂志２００７，（１）：１３—１６． 【１２】ＰａｅｈｅｅｏＥＧ，ＧｏｒａｅａＭＣ，ＲｏｄｒｉｇｕｅｓＧ凡ｅｔａ１．Ｅｆｆｅｃｔｏｆｌｉｖｅｒｉａｅｈａｅｍｉｅｐｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇｉｎｃｉｒｒｈｏｔｉｃｒａｔｓｓｕｂｍｉｔｔｅｄｔｏｈｅｐａｔｉｃｉｓｅｈａｅｍｉａ／ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙ【Ｊ】．ＡｅｔａＣｉｒＢｒａｓ，２００６，２１：２４－２８． 【１３】ＯｌｌｕｏｇｌｕＥ，ＫｅｒｅｍＭ，ＰａｓａｏｇｌｕＨ，ｅｔａ１．Ｄｅｌａｙｅｄｅｎｅｒｇｙｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ０ｆｉｓｃｈｅｍｉｃｐｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇｏｎｈｅｐａｔｉｃｉｓｃｈｅｍｉａ／ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙｉｎｒａｔｓ仞．ＥｕｒＳｕｒｇＢｅｓ，２００６，３８：１１４－１２１． 【１４］Ｋａｓｈｔｉ气Ｍｅｈｒａｂｉ气ＰａｈｌａｖａｎＩＳ，ｅｔａ１．Ａｒｅｖｉｅｗｏｆｖａｒｉｏｕｓｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓｏｆｏｒｔｈｏｔｏｐｉｃｌｉｖｅｒｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｉｎｔｈｅ呲忉．ＴｒａｎｓｐｌａｎｔＰｒｏｅｔ２００５，３７：１８５－１８８． （收稿日期：２００９－０２—１７） ＣＨＩＮＡＭＥＤＩＣＡＬ ＨＥＲＡＬＤ中目医琦导囊３５ 万方数据
肝纤维化四项指标及其意义
肝纤维化四项指标及其临床意义 HA ,Hyaluronidase（透明质酸酶）： 为基质成分，可较准确灵敏地反映肝内已生成的纤维量及肝细胞受损状况，有认为本指标较之肝活检更能完整反映出肝全貌，是肝纤维化和肝硬变的敏感指标。 1）血清HA在急肝、慢迁肝时轻度升高；慢活肝时显著升高；肝硬化病人血清HA极度升高。 2）血清HA水平是反映肝损害严重程度、判断有无活动性肝纤维化的定量指标。 3）对慢迁肝与慢活肝的鉴别诊断，慢迁肝HA浓度与正常人无差别，而慢活肝的升高明显。 4）反映肝细胞功能，肝脏纤维化形成和程度，反映肝脏炎症性病变。 5）有助于估价肝病发展趋势，在急性肝炎→慢活肝→肝硬化发展中，血清HA逐步并优于其他肝硬化诊断指标等。 6）肝硬化时，有些病人HA却不升高，与其肝脏合成功能有关 LN ,Laminin （层粘连蛋白）： 为基底膜中特有的非胶原性结构蛋白，与肝纤维化活动程度及门静脉压力呈正相关，慢活肝和肝硬变及原发性肝癌时明显增高，LN也可以反映肝纤维化的进展与严重程度。另外，LN水平越高，肝硬变病人的食管静脉曲张越明 显。 1）反映肝纤维化：正常肝脏间质含少量LN，在肝纤维化和肝硬化时，→肌成纤维细胞增多→大量合成和分泌胶原、LN等间质成分→形成完整的基底膜（肝窦毛细血管化）。肝窦毛细血管化是肝硬化的特征性病理改变， LN与纤维化程度和门脉高压正相关，纤维化后期升高尤为显著。 2）可诊断酒精肝是否存在门脉高压 3）与基底膜相关疾病有关：如先兆子痫孕妇血清较正常妊娠者显著升高，提示可能与肾小球及胎盘螺旋动脉损伤有关。血清LN与糖尿病、肾小球硬化等疾病有关。 PCIII ,Procollagen Ⅲ（III型前胶原）： 反映肝内III型胶原合成，血清含量与肝纤程度一致。 1）PCIII与肝纤维化形成的活动程度密切相关，但无特异性，其它器官纤维化时，PCIII也升高。 2）持续PCIII升高的慢活肝，提示病情可能会恶化并向肝硬变形成发展，而PCIII降至正常可预示病情缓解，说明PCIII 不仅在肝纤维化早期诊断上有价值，在慢性肝病的预后判断上也有意义。 3）肝纤维化病变程度呈密切相关，反映肝纤维合成状况和炎症活动性，早期即显著升高，而陈旧性肝硬化和部分晚期肝硬变、肝萎缩患者血清PCⅢ不一定增高。
CCl4诱导的小鼠肝脏纤维化模型
CCl4诱导的小鼠肝脏纤维化模型 肝纤维化是指肝脏内弥漫性细胞外基质（特别是胶原）过度沉积，不是一个独立的疾病，是许多慢性肝病共同的病理过程，几乎各种慢性肝病（化学毒性、感染性、遗传代谢性、自身免疫性，以及胆汁淤积性）都可以导致肝纤维化。 CCl4是诱导实验动物产生肝纤维化和肝硬化最广泛使用的化学性肝毒物。在肝细胞内质网中，经肝微粒体内依赖于细胞色素P450 的具有混合功能的氧化酶激活后，CCl4产生了自由CCl3·及Cl，它们与肝细胞内大分子发生共价结合，可攻击膜不饱和脂质，引发活性氧自由基的产生和脂质过氧化，损伤肝细胞，从而导致狄氏间隙内原本静止的贮脂细胞活化，释放出Ⅳ型胶原酶，降解Ⅳ型胶原。同时该细胞由合成分泌Ⅲ型胶原改为合成分泌I 型胶原，取代了Ⅳ型胶原，促使肝脏纤维化 1.实验动物 SPF级BablC小鼠，健康，雄性，体重为18g-20g 2.实验分组 实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组，每组15只动物。 3.实验周期 6W 4.主要试剂 CCl4（上海国药集团） 5.建模方法 按5ml/kg 体重皮下注射体积分数为20% CCl4的油剂溶液（CCl4：橄榄油=1:4）, 每3天1次，连续6W。对照组动物皮下注射等量等次的橄榄油溶剂。正常饮食饲养，观察动物活动、精神状况和饮食量,实验前后称量小鼠体重。 完成持续给药6W后，称体重，戊巴比妥钠腹腔注射麻醉小鼠，摘眼球取血，室温静置2h后于4℃3000r离心10分钟提取血清，放入-80℃冰箱冻存。同时取肝左叶组织1.5cm×1cm×0.2cm于10%中性福尔马林中固定，石蜡包埋；其余肝组织液氮冷冻-80℃保存。 6.模型评价
肝纤维化大鼠模型的研究进展_王宪东
世界最新医学信息文摘 2016年 第16卷 第94期39 重视中医药在大肠癌治疗方面的研究，探索新思路，研讨新治法，增加新疗法，提高大肠癌患者生存率。 参考文献 ［１］ 关彤．《金匮要略》理论在大肠癌防治中的运用［Ｊ］．中华中医药学刊，２００７，２５（２）：３７１－３７２． ［２］ 余胜珠，杨光华，陈连生，付相建．补中益气汤联合四神丸加减治疗老年大肠癌术后腹泻１８例［Ｊ］． 中国药业，２０１３，２２（８）：９９－１００．［３］ 王学中，季秀海．健脾补肾活血方改善大肠癌术后化疗毒副作用临床观察［Ｊ］．新中医，２０１５，４７（８）：２１０－２１１．［４］ 薛建章，王瑞敏．中医药联合化疗对大肠癌根治术后复发、转移以及生存期的影响研究［Ｊ］．中国现代药物应用，２０１６，１０（５）：２５９－２６０． ［５］ 黄耀，唐晓玲．熊墨年教授治疗大肠癌的临证经验初探［Ｊ］．江西省２ ０ １ ４年中医、中西医结合肿瘤学术交流会暨中医苗治疗肿瘤新进展培训班，１８４－１８７． ［６］ 李晓琳，冯 妮．复方苦参注射液联合化疗治疗大肠癌术后３１９例患者的疗效分析［Ｊ］．中医中药，２０１５ ，１３（１４）：１９９－２００．［７］ 陈爱飞．清肠消癌方灌肠联合化疗治疗晚期大肠癌５６例观察实用［Ｊ］．中医药杂志，２０１１，２７（１２）：８４２－８４３． ?综述? 肝纤维化大鼠模型的研究进展 王宪东１，石安华２（导师），陈文玲３（通讯作者） （１．云南中医学院 基础医学院，云南 昆明 ６５０５００；２．云南中医学院 继续教育学院，云南 昆明 ６５００００； ３．云南中医学院 临床医学院，云南 昆明 ６５００００） 摘要：肝纤维化动物模型是研究肝纤维化发病机制的重要途径，本文对目前常用的肝纤维化大鼠模型进行阐述，主要综述了四氯化碳、二甲基亚硝胺、猪血清、刀豆蛋白、乙醇及胆管阻塞手术方等造模方法，同时探讨了每一种模型的造模方法和优缺点。 关键词：肝纤维化；动物模型；大鼠；机制 中图分类号：R657.3+1 文献标识码：A DOI：10.3969/j.issn.1671-3141.2016.94.028 0 引言 肝纤维化是肝脏内弥漫性纤维结缔组织沉积，机体对炎症组织损伤修复的反应［１］。肝纤维化是许多慢性肝病的中间环节，阻止延缓肝纤维化的发生发展是治疗的关键。肝纤维化动物模型的建立，既是研究肝纤维化发病机制的前提，也是研究肝纤维化治疗的先决条件。标准的肝纤维化动物模型应该具备如下条件：与人类的病变基本相似；肝纤维化的发生发展具有明显的分期的过程；动物的造模成功率高，死亡率低；造模方法简便，造模成本低廉，具有可重复性等。 1 四氯化碳诱导的肝纤维化大鼠模型 四氯化碳（ＣＣＬ４）诱导的大鼠肝纤维化模型是应用最广泛的肝纤维化动物模型，其模型在临床上与人类的某些病理学变化极其相似。ＣＣＬ４经过灌胃或者腹腔注射后，通过门静脉流入肝脏，随着血液的循环由汇管区向中央静脉流动。在此过程中，ＣＣＬ４被肝细胞吸收，在肝细胞内经微粒体细胞色素氧化酶Ｐ４５０代谢生成大量的自由基，攻击肝细胞，使肝细胞发生凋亡或坏死。黄月红等［２］对大鼠腹腔注射生理盐水５０％与 ＣＣＬ４ 蓖麻油混合液，剂量为２ｍｌ／ｋｇ，每周两次，共四周，结果显示ＣＣＬ４造模４周早期肝纤维化已形成。ＣＣＬ４诱导的大鼠肝纤维化模型具有操作简便，价格低廉，耗费时间短等优点，但是动物的死亡率较高，而且停止注射一段时间后，肝纤维化有愈合的趋势。 2 二甲基亚硝胺诱导的肝纤维化动物模型 二甲基亚硝胺（ＤＮＭ）是一种半挥发性的有机化学品，小剂量接触可能致癌，具有较强的肝毒性作用。ＤＭＮ通过肝微粒体代谢其中间产物与核酸、蛋白质等结合导致肝细胞损伤，同时产生的活性甲基化产物使核酸、蛋白质甲基化导致肝坏死［３］。梁晋川等［４］对大鼠腹腔注射ＤＭＮ１０μｌ／ｋｇ，连续３ｄ／周，连续３￣６周；或８ｍｌ／ｋｇ，连续３ｄ／周，连续五周，在注射２￣５周后肝纤维化程度逐渐加重。ＤＭＮ诱导的大鼠肝纤维化模型具有周期短，可重复性好，纤维化的程度高，停止给药后不宜反复等特点，而且ＤＮＭ本身就是致癌物，与临床上肝癌的病变特点有相似之处。但对ＤＭＮ注射的量不易掌控，动物的死亡率较高，ＤＭＮ本身就为一级致癌物，在操作中也要注意个人防护，防止中毒。 3 猪血清诱导的肝纤维化大鼠模型 猪血清是一种异种血清，血清中的白蛋白注入大鼠体内后变为异种抗原 ，诱导机体产生抗体从而形成抗原与抗体的复合物，沉积于门脉区肝血管和间质组织中，通过免疫复合物介导的细胞毒性反应活化枯否氏细胞而导致肝血管和间质组织结构的改变，最终引发肝纤维化。张艳等［５］对大鼠采用腹腔注射猪血清０．５ｍｌ／ｋｇ，每周两次，经观察腹腔注射猪血清四周时，肝纤维化已初步形成，八周时模型就已经复制成功。猪血清诱导的肝纤维化大鼠模型主要与免疫性肝纤维化的形成有关，与人类慢性肝炎中肝纤维化的发生相似。但其复制模型的周期较常长，动物肝脏的损伤常常具有自愈性，动物的死亡率也比较高。4 刀豆蛋白诱导肝纤维化的大鼠模型 刀豆蛋白Ａ（Ｃｏｎ Ａ）是从刀豆中提取的凝集素，其具有沉淀多种糖类、区分某些正常的细胞和肿瘤并促进其分裂等。Ｃｏｎ Ａ可以激活Ｔ细胞从而引起肝脏的损伤。梁洁等［６］经尾静脉注射１２．５ ｍｇ／ｋｇ剂量的Ｃｏｎ Ａ，每周１次，连续注射八周后的大鼠ＡＬＴ、ＡＳＴ指标显著增高，肝脏体积增大，肝脏指数升高，提示肝纤维化形成。Ｃｏｎ Ａ诱导肝纤维化大鼠模型，其病理过程与慢性肝炎的病理过程相似，可以更好的复制人类病毒性肝病的模型。Ｃｏｎ Ａ诱导肝纤维化大鼠模型造模的成功率高，动物死亡率低，简便易行。 5 乙醇诱导的肝纤维化动物模型 酒精中毒是西方国家肝硬化发病的主要原因，在我国，随着生活水平的提高，酒精性肝病的比例也逐渐升高。酒精在进 （下转第３０页） 基金项目：云南省科技厅应用基础面上项目（NO. 2013FZ091） 作者简介：王宪东，男，汉族，籍贯：辽宁省大连市，现在职务或职称：研究生在读，学位：硕士学位，研究方向：中西医结合防治疾病机制研究。
单次剂量照射制备大鼠放射性肝纤维化模型的建立与评价胡宗涛
单次剂量照射制备大鼠放射性肝纤维化模型的建立与评价 胡宗涛1，高世乐1，秦峰1，朱杰1，黄德武3，董六一 2(1．安徽医科大学临床学院解放军第105医院肿瘤中心，安徽合肥230031; 2．安徽医科大学药理学教研室，教育部抗炎免疫药理学重点实验室，国家中医药管理局中药药理三级实验室; 3．安徽医科大学省级实验动物中心，安徽合肥230032) 摘要：目的评价单次30Gy 照射制备大鼠放射性肝纤维化模型的可行性、科学性及实用性。方法清洁SD 雄性大鼠48只， 随机分为照射组（A 组）40只、对照组（B 组）8只。VARIN 21-EX 直线加速器对A 组大鼠右肝进行单次照射（30Gy /次），于照 射后第4、8、12、26周处死，每时相点处死8只，B 组于第4周末处死。观察大鼠活体外观及肝脏的大体标本，检测大鼠血清中AST 、ALT 活性，ELISA 法测大鼠血清中TGF-β1、HA 、PC-Ⅲ、 LN 含量、HE 染色于光镜下观察肝脏组织病理改变、MASSON 染色观察大鼠肝脏组织胶原沉积改变；碱水法检测大鼠肝脏组织中Hyp 含量，免疫组化法测肝脏组织TGF-β1蛋白表达情况。结果 与对照组（B 组）比较，A 组受照射肝组织表现出放射性肝炎及肝纤维化，照射组大鼠血清中AST ，ALT 酶活性和TGF-β1水平 自第4周明显升高（P ＜0．05或P ＜0．01），分别于第8周和第12周达到高峰；照射组大鼠血清中HA 、PC-Ⅲ、 LN 含量和肝脏组织中Hyp 含量于照射后第4周显著升高（P ＜0．05或P ＜0．01），一直呈上升趋势，照射后26周值最高；照射组大鼠肝脏组织中TGF-β1蛋白表达于照射后第4周也明显升高（P ＜0．05）， 照射后第12周达到高峰，第26周开始下降。光镜下可见肝脏病变呈慢性进行性肝纤维化改变。结论单次剂量照射制备的大鼠放射性肝纤维化模型稳定可靠，动物死亡率较低，可以用于实验研究。 关键词：放射性肝纤维化；大鼠；转化生长因子-β1；模型 Establishment and evaluation on the model of radiation-induced liver injury of rat caused by once dose radiation HU Zong-tao ，GAO Shi-le ，QIN Feng ，et al （Center of Cancer ，the No．105hospital of People ’s Liberation army ，Hefei 230031，China ） Abstract ：Objective To evaluate the feasibility ，rationality and practicability about the model of radiation-induced liver injury of rat caused by single 30Gy dose radiation．Methods 48SD rats were randomly divided into irradiation group （A group ，n =40）and control group （B group ，n =8）．A group was irradiated fractionally by VARIN 21-EX linear acceleratorat at right liver （dose 30Gy once ），eight of which were killed on 4rd 、 8th 、12th and 26th week after radiation．And B group were sacrificed on 4rd weekend．Then we observed the living appearance of rats ，general sample of radiated liver．The blood and liver of all rats were collected for further examinations．The level of Hyp in liver tissue and the serum activities of ALT and AST were detected．The level of TGF-β1，HA ，PC-Ⅲand LN of blood serum were measured by ELISA ，histological change of livers was observed with hematoxylin-eosin （HE ）staining and Masson＇s trichrome staining by optical microscopy．Meanwhile ，the expression of TGF-beta1protein was detected by immunohistochemistry．Results Compared with the control group （B group ），Display of radiating hepatitis and liver fibrosis were observed in radiated liver histology of the A group rats． The activities of AST ，ALT and the level of TGF-β1in serum of the A group rats showed an increase from 4th week after the first radiation （P ＜0．05or P ＜0．01），reaching the highest level at 8th and 12th week ，respectively．The content of HA ，PC-Ⅲand LN in blood serum and Hyp in liver tissue of the A group rats have significantly increased from 4th week after the first radiation （P ＜0．05or P ＜0．01）．The expression of TGF-beta1protein in liver tissue of the A group rats has significantly increased from 4th week （P ＜0．05）．Histological change of livers was chronic progressive liver fibrosis by light microscopy．Conclusion The model of radiation-induced liver injury of rat caused once dose radiation is stable and reliable ，has lower death rate ，conform to the practice of clinical radiation therapy．Key words ：radiation-induced liver injury ；rat ；TGF-β1；model 基金资助：解放军105医院重点课题（No 2010YZ12） 通信作者：董六一，男，教授，硕士生导师，研究方向：药理学， E-mail ：dongly061@yahoo．com．cn 由于放疗在腹部肿瘤治疗中日渐广泛的运用及骨髓移植 辐射预处理技术的开展，特别是近年来将三维适形、组织间插 植内照射等放疗新技术用于肝脏肿瘤治疗，使肝脏局部受到 大剂量照射，更重要的是战场核辐射及核设施等意外事故导 致的肝脏受到大剂量照射，而肝脏在受到较大剂量照射后，会 出现急性放射性肝炎、肝脏功能损害、慢性进行性肝纤维化、 肝硬化甚至个体死亡［1-2］。但如何模拟临床放疗实际制作放射性肝纤维化动物模型，对防治放射性肝纤维化的研究显得非常重要。本实验模拟临床放射治疗的过程，对大鼠进行单次剂量照射制备放射性肝纤维化模型，通过多种途径评价该模型的可行性、科学性、实用性。1材料1．1实验动物清洁级SpragueDawleg （SD ）雄性大鼠，鼠龄为5 6个月，体重180 220g ，安徽医科大学实验动物中心提供，生产合格证号：SCXK （皖）：2005-001。·85·安徽医药Anhui Medical and Pharmaceutical Journal 2013Jan ;17(1)