四物汤对血虚证动物造模的影响

四物汤对血虚证动物造模的影响

杨中堂2002207235

摘要：综述和评价20余年来血虚证动物造模的方法及并用四物汤对几种造模的反证效果。近年来,随着对血虚证研究的不断深入,对血虚证动物模型的研究也有新的进展.尽管动物模型在当前还不能准确反映人体血虚证的全部实质,但作为替代实验对象,已在血虚证发病机制探讨及中药治疗研究等方面发挥了重要作用.目前研究和发展趋势比较集中的是化学药物造模、γ射线造模、综合放血造模等等。

关键词：血虚证动物模型造模法四物汤

前言：血虚证是中医的基础病证，主要表现为营血亏损。要阐明血虚证的本质和病理生理，以及中药治疗血虚证的机理，动物实验研究是不可缺少的途径。而要进行实验研究，首先必须有一个标准化的血虚证动物模型，这是中医药现代化研究的重要环节。许多科研工作者在这方面做了探索和努力，然而至今尚无统一的造模规范程序和公认指标。实验动物选择不同、实验方法不统一，甚至缺乏客观指标，严重影响对血虚证本质的探讨和对治疗血虚证药物的药效评价。本实验进行的血虚小鼠模型的标准化实验研究，目的在于建立操作简便，敏感精确，重复性好，经济实用的标准化血虚证动物模型。四物汤是中医传统的补血基本方，本实验用四物汤作为反证来评价血虚证造模成功与否，同时探讨四物汤的补血机理。

主体：

1 血虚证动物模型研究概述

血虚证动物模型的制作方法有多种。最早始于70年代的放血疗法，此后相继有放射损伤，化学损伤，营养性饥饿等方法造成的血虚证模型。上述方法各有其优缺点，如放血疗法可有效降低外周血中全血细胞的数量，但放血量难以精确控制，模型问有很大差别；化学损伤性模型多采用乙酰苯肼所致的溶血性贫血模型和环磷酰胺所致的白细胞减少性贫血模型，虽方法简单，但乙酰苯肼主要对红细胞有缓慢进行性氧化损伤作用，但却使红细胞和白细胞代偿性增高，而环磷酰胺对红细胞的作用不如其对白细胞的影响明显，而且给药剂量及给药次数若控制不好，便不能完全反映其病理本质。辐射造模可造成白细胞下降和骨髓造血损伤，是比较好的一种造模方法，但照射剂量是此模型的关键所在，因照射剂量小达不到损伤要求，而剂量大，骨髓造血损伤严重受抑，中医药治疗难以逆转。因此近几年对血虚证模型的研究，以综合造模为主，如采用乙酰苯肼60mg／ks 和环磷酰胺160mg／kg分次给药的方法联合造成血虚证模型，另一种综合造模法采用放血，控制饮食和劳倦的方法进行。如此可以较全面地反映血虚证证侯特点，拉近与临床的距离，考虑化学损伤和照射损伤所致动物血虚证模型的损伤特点，照射损伤着重在骨髓造血的损伤，化学损伤着重表现在外周血各血液成分的下降，并用临床常用补血名方四物汤进行了反证。

2 血虚证动物模型的造模方法

2.1 60Coγ射线造模法该造模方法

采用60Coγ射线全身一次性照射，剂量分别为2．5Gy，5．5Gy和7．5Gy，剂量率为161．2—164．8伦／分，照前测定各组小鼠外周血各血液成分正常值，照后分别于l、3、5，7、9、ll、l5、l9继续动态观察照后模型小鼠各成分的改变，结果提示此模型小鼠以对外周血白细胞的影响最为明显，并随照射剂量加大，外周血白细胞下降越明显。红细胞，血小板等指标亦下降，

但下降幅度不及白细胞明显。四物汤照后立即灌胃给药连续7d，可以逆转3．5和5．5Gy照射所致该模型小鼠外周血的下降，使照后第5、7、9、u 天的白细胞数和第l、5天后的血小板数明显高于对照组，而对7．5Gy照射所致的损伤不能逆转。

2.2 化学药物造模

2.2.1乙酰苯肼(APH)溶血造模法该造模方式利用 APH对较专一地对红细胞有缓慢性的进行性损伤作用，造成血液中红细胞数明显减少，网织红细胞和白细胞数量病理性代偿性升高，造出血虚证动物模型。2%APH0.2-0.3ml,皮下注射1次，或隔3d在注射1次（约合APH 4-6ml/只）。APH法利用APH较专一地对红细胞有缓慢性的进行性损伤作用El6_，最终造成血液中红细胞数明显减少，网织红细胞病理性代偿性升高和白细胞数量代偿性升高。相关文献的研究的实验指标主要集中在外周血象

2.2.2环磷酰胺化学损伤造模法

该造模原理利用环磷酰胺作为细胞周期非特异性细胞毒药物，对增殖周期中各期细胞均有杀灭作用，有抑制骨髓的作用，使白细胞下降，对粒细胞的影响更为明显，可制造出血虚模型。环磷酰胺法作为细胞毒药物可对外周血细胞和骨髓细胞造成损伤．主要使白细胞下降，尤其使粒细胞下降。迄今环磷酰胺造模剂量并未确认，有人对环磷酰胺的剂量作了尝试，发现环磷酰胺100、200、750 mg／kg给小鼠进行一次腹腔注射。可使小鼠外周血白细胞在给药后3 d 降至最低．给药后5 d开始回升．对血小板有相似影响。环磷酰胺分别按50、100mg／kg对小鼠腹腔注射，每日1次，连续5 d．50 mg／kg组白细胞数量在药后3 d降至最低，7 d后开始回升。100 mg／kg组在药后5 d降至最低，然后缓慢回升．外周血小板有相似的规律。各剂量组对红细胞和血红蛋白均无太大影响。

3．四物汤的作用机制四物汤是传统中医治疗血虚证的基本方。据《太平惠民和剂局方》记载，四物汤由当归(10g)、川芎(6g)、白芍(10g)和熟地黄(15g)四味药组成。“四物汤，物，类也，四者相类而仍各具一性，各建一功，并行不悖芎归入少阳主升，芎地入厥阴主降，芎蔚郁者达之，当归者虚者补之，芍药实者泄之，地黄急者缓之。”本方组成共四味药物，故名四物汤。本实验提示；四物汤能促进血虚小鼠骨髓有核细胞由G1期向G2／S转化，促进血虚小鼠的Hb、RBC、网织红细胞、骨髓有核细胞数的提高。说明四物汤对血虚小鼠造血系统有促进造血的作用，这与传统中医认为四物汤是治疗血虚证的基本方之一相符，同时也为四物汤治疗血虚证提供了有价值的实验科学依据。但四物汤对于血发生的影响直接作用于造血干细胞增殖分化时的某一阶段来促进机体造血功能，还是促进造血因子分泌增加，改善造血微环境，尚需进一步研究。

4. 血虚证与细胞凋亡及四物汤反证细胞凋亡介入了多种生理、病理过程，与造血器官的发育、成熟及血液系统疾病密切相关。2．5Gy，5．5Gy和7．5Gyγ射线照射后，动物骨髓和脾脏细胞出现典型的凋亡，表现为核固缩，核碎裂及凋亡小体的形成等，并且以24h以内最为明显，随后凋亡细胞逐渐减少，7d左右基本消失；与此同时，24h之内各剂量组小鼠骨髓和脾脏细胞DMA凝胶电泳出现明显梯状带，随着时间的推移，梯状带减弱、消失。上述造血细胞形态学及DNA的变化与血虚证的严重程度呈正相关，细胞凋亡越明显，小鼠血虚证越严重，但造血细胞凋亡出现的时间与血虚证的程度无关，即无论照射剂量大小，凋亡都发生在血虚出现的早期。四物汤预防给药连续7d对5．5Gy射线照射所致的细胞凋亡有明显抑制作用，而治疗给药在第7d和第10d均未检测到细胞凋亡的典型条带，这与受

照小鼠凋亡发生的时相有关。提示细胞凋亡是一典型的血虚证分子本质，但对补血类中药方剂的验证，以预防给药最为恰当。