精子活力和顶体形态双重荧光染色试剂盒产品说明书(中文版)
精子细胞氧化应激活性氧(ROS)高质荧光检测试剂盒产品说
精子细胞氧化应激活性氧（ROS）高质荧光检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途精子细胞氧化应激活性氧（ROS）高质荧光检测试剂是一种旨在使用透膜荧光染色剂氯甲基二氯二氢荧光素二乙酯，在细胞氧化条件下，产生荧光，来定量检测精子细胞内活性氧族的生成和增加的权威而经典的技术方法。
该技术经过精心研制、成功实验证明的。
适用于动物和人体精子细胞的活性氧族的检测。
可以被用于细胞凋亡、衰老、代谢和营养学，以及发育生物学（男性不育）等的研究。
产品严格无菌，即到即用，操作简便，性能稳定，荧光清晰。
技术背景超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2-）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基（hydroxyl radical；OH-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO-）次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，甚而导致诸如男性不育、冠心病、风湿性关节炎、肿瘤、退行性病变等各种病理状况。
其中精子细胞（spermatozoa）对于活性氧较为敏感：低浓度活性氧可以调节正常精子功能、精子获能、顶体反应、精卵融合等；高浓度活性氧则影响精子细胞的质量和功能，因为精子细胞质膜含有大量不饱和脂肪酸，胞浆含有少量的祛除活性氧的相关酶蛋白，由此活性氧容易造成精子质膜的流动性和DNA完整性受到损害，精子运动能力降低，不能参与授精活动，最终导致特发性不育症（idiopathic infertility）。
精子DNA检测系列简介
包装规格：10人份/盒、20人份/盒 、 40人份/盒
存储条件及有效期： 试剂盒于2-8℃避光保存，有效期为12个月。
（三）
精子活体染色试剂盒 （拒染法）
检测原理：
利用荧光络黄染料（吖啶橙）具有高度的异 染性的特性，以插入的方式与双螺旋的DNA分子
结合，染色后断裂的单DNA精子呈绿色荧光。
医生可通过计算红色和黄色荧光精子即单链DNA
精子的百分率评估精子受精几率。
3、检测操作过程
检测样本：液化后的新鲜精液标本 精子洗涤 涂片 固定
三明市和众生物技术有限公司内部培训资料
生殖医学检测试剂盒系列
精子五联检
1、精子DNA检测试剂盒 2、精子DNA碎片检测试剂盒 3、精子活性检测试剂盒 4、精子形态学检测试剂盒 5、精子核蛋白检测试剂盒
影响精子受精或男性不育的因素
精子死亡率过高 精子畸形率过高 精子成熟率过低 精子染色体异常 精子数量过少 精子活动力过低 精子液化能力过低
完
正常参考值：核蛋白不成熟精子≤30%
结果： 核蛋白不成熟的精子（IM）染紫蓝色或紫色 核蛋白成熟的精子（M）染红色。
操作方法
精子液化 精子洗涤 精子洗涤
涂片
复染 洗脱 染色 固定
镜检
染色效果
不成熟精子
成熟精子
正常参考值：核蛋白不成熟精子≤30%
产品基本信息
产品注册证号：闽明食药监械（准）字2013第1400022号 执行标准号：YZB/闽明0033-2013 生产许可证号：闽食药管械生产许第20110297号
抗精子IgG抗体检测试剂盒(胶体金免疫层析法)产品技术要求中检安泰
抗精子IgG抗体检测试剂盒（胶体金免疫层析法）适用范围：本试剂盒用于体外定性检测人血清或血浆中的抗精子IgG抗体水平。
1.1产品规格：20人份/盒。
1.2组成：1.2.1检测卡/条：1人份/袋×20袋，由样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水纸组成。
硝酸纤维素膜上检测线包被重组精子抗原、质控线包被羊抗鼠IgG多抗，金标垫上固定胶体金标记的鼠抗人IgG单抗。
1.2.2样本稀释液：3mL/瓶×1瓶，20mM pH7.4 磷酸盐缓冲液。
2.1 物理检查2.1.1 外观外观平整，材料附着牢固，内容齐全，试剂无杂质，外包装完整无破损，标签清晰可辨。
2.1.2 样本稀释液净含量样本稀释液的净含量应不少于3ml。
2.1.3 膜条宽度膜条宽度应满足3.4～3.8 mm。
2.1.4 液体移行速度液体移行速度应不低于10mm/min。
2.2 临界值本试剂盒临界值为抗精子IgG抗体滴度1:12。
检测1份抗精子IgG抗体滴度为1:8的阳性企业参考品，重复检测20次，检测结果均为阳性反应。
检测1份抗精子IgG抗体滴度为1:16的阴性企业参考品，重复检测20次，检测结果均为阴性反应。
2.3 特异性检测3份抗精子IgG抗体阴性血清，其中包括抗子宫内膜 IgG抗体阳性血清、抗透明带 IgG抗体阳性血清、抗心磷脂IgG抗体阳性血清各1份，每份阴性血清重复检测3次，检测结果均为阴性反应。
2.4 批间差抽取三个批次的检测卡/检测条，每个批次20人份，按2.2临界值的检验方法，检测抗体滴度为1:8的阳性企业参考品，反应结果应显色均一，且均为阳性。
抽取三个批次的检测卡/检测条，每个批次20人份，按2.2临界值的检验方法，检测抗体滴度为1:16的阴性企业参考品，反应结果均为阴性。
2.5 稳定性2.5.1效期末稳定性在4～30℃下试剂盒有效期为12个月，试剂盒在规定的条件下保存至有效期末，检测结果应符合2.2、2.3各项目要求。
多色免疫荧光染色试剂盒使用说明
多色免疫荧光染色试剂盒使用说明多色免疫荧光染色试剂盒使用说明酪酰胺信号放大(TSA，Tyramide signal amplification)技术是一类利用辣根过氧化酶(HRP)对靶蛋白进行标记的酶学检测方法，类似常规免疫组化的DAB显色方法，TSA技术同样采纳HRP标记的二抗，同样有对应的“显色”步骤(HRP催化加入反应体系的酪胺荧光素底物，产生活化荧光底物，活化底物可与抗原上的酪氨酸等残基共价结合，使样品上稳定的共价结合酪胺荧光素。
之后用热修复法洗去非共价结合的一抗-二抗-HRP复合物，重复下一种一抗-hrp二抗来其次轮孵育，换另一种酪胺荧光素底物，如此往复就可实现多重标记。
TSA具体原理是利用酪胺Tyramide的过氧化物酶反应(酪胺盐在HRP催化H202下形成共价键结合位点)，产生大量的酶促产物，该产物能与四周的蛋白残基(包括色氨酸、组氨酸和酪氨酸残基)结合，这样在抗原-抗体结合部位就有大量的荧光素沉积，结果使其检测信号得到10-100倍增加。
简洁来说，用这种方法做多重免疫荧光是利用二抗上带有的HRP(而不是直接偶联荧光素)，来催化后续添加入体系的非活性荧光素。
荧光素在HRP和过氧化氢的作用下被活化，跟接近蛋白的酪氨酸残基共价偶联，使得蛋白样品与荧光素稳定结合。
然后微波或煮沸或者水浴等热修复处理，前一轮非共价结合的抗体被洗掉，共价结合的荧光素稳定共价结合在样本切片蛋白上。
再换个一抗来其次轮孵育，周而复始。
等到全部抗体孵育结束，荧光素都结合好后，最终去检测结果。
由于每次体系中都只有单一抗体孵育，因此无需担忧抗体交叉反应，以及一抗二抗种属匹配问题，大大削减了试验设计时不同种属抗体选择匹配的限制。
也就是说，假如用TSA技术，同一张片子上全部的靶标都可以选用特异性高的兔单克隆抗体。
搭配同一支抗兔的HRP二抗就可以进行试验，而且信号放大的倍数大大增加。
茹创生物开发的试剂盒详细酪胺荧光染料为以下其中一种或者多种：TYR-480，TYR-520，TYR-570，TYR-620，TYR-690，TYR-780。
双荧光素酶报告基因检测试剂盒使用说明
双荧光素酶报告基因检测试剂盒使用说明产品说明：报告基因检测，是真核基因表达调控研究的常用方法。
由于检测光量子的方法非常敏感，采用生物发光(bioluminescent)法，是报告基因检测最常用的有效手段。
荧光素酶(luciferase)催化底物荧光素的转化，发射出光子。
萤火虫荧光素酶(Firefly luciferase)和海肾荧光素酶(Ranilla luciferase)催化的发光反应，具有相似的光学特征和很好的浓度线性范围(7~8个数量级的线性范围)，酶的检测灵敏度达10-18mol到10-20mol，但两者催化的化学反应底物和最适反应条件完全不同。
这两种荧光素酶配合形成了十分有效的双荧光素酶报告基因系统，其中Ranilla luciferase通常作为内参照。
本试剂盒提供了一体化形式的双荧光素酶检测系统。
采用通用裂解缓冲液，适合于两种荧光素酶活性的保持，且与其他类型的报告基因检测和蛋白含量检测兼容；优化的两种酶反应体系，使每种发光反应持续数十分钟，以便于手工操作多个样品；并保证Firefly luciferase发光及时淬灭，不影响后续Ranilla luciferase的测定；优化的反应体系还使两种荧光素酶活性比值趋于合理的敏感范围，更有利于后续数据的比较。
产品内容：名称数量保存条件5x Universal Lysis Buffer(通用裂解液)25ml-20℃Fassay Buffer I(虫酶缓冲液)10ml-20℃Fassay Substrate I(虫酶底物)0.5ml-20℃Rassay Buffer II(海酶缓冲液)10ml-20℃Rassay Substrate II(海酶底物)0.2ml-20℃可作100次双荧光素酶检测。
低温运输，-20℃或-80℃避光保存。
有效期6个月。
自备试剂：PBS、双蒸水等。
操作步骤：一、裂解细胞：1)新鲜配制裂解液：临用前，取适量5xUniversal Lysis Buffer(ULB)，用双蒸水稀释至1xULB，混匀。
精子形态学染色液(shorr法)使用说明书
精子形态学染色液（shorr法）使用说明书货号：G2570规格：3×20ml/3×100ml保存：室温，避光，12个月。
试剂盒组成：名称3×20ml3×100ml Storage试剂A：猩红橙黄染色液20ml100ml RT，避光试剂B：媒染液20ml100ml RT，避光试剂C：固绿染色液20ml100ml RT，避光产品简介：WHO推荐的精子形态的评估方法有巴氏染色法、Shorr染色法和Diff-Quik染色法。
精子形态学染色液（shorr法）染色原理与巴氏染色法相似，因精子及细胞内不同等电点的蛋白质在相同的酸度下带不同的电荷，能选择性地结合相应的染料而着色。
胞核由酸性物质组成，它与碱性染料的亲和力较强；而胞浆则相反，它含有碱性物质和酸性染料的亲和力较大。
特别适用于精子的染色，亦可用于胸水、腹水、痰液等细胞样本的染色。
操作步骤（仅供参考）：1.细胞涂片用95%乙醇-冰乙酸（3:1）固定液固定10-15min。
2.80%、70%、50%的乙醇分别浸泡1min。
3.蒸馏水或自来水浸泡或冲洗1min。
4.苏木素染色液染色3-5min。
自来水冲洗2min。
5.（可选）0.5%的盐酸乙醇分化液分化4-5s。
自来水冲洗2min。
6.蓝化液中蓝化4min。
7.自来水冲洗2min。
8.用猩红橙黄染色液染色1-2min。
9.蒸馏水速洗，然后入媒染液处理1-2min。
10.入固绿染色液染色4min。
11.直接用1%冰醋酸分化30s。
12.水洗，然后经50%、70%、80%、95%、无水乙醇脱水。
13.二甲苯透明，中性树胶封片。
染色结果：精子头部的顶体区淡蓝色顶体后区深蓝色中段略呈红色尾部蓝色或淡红色通常位于头部下部或围绕中段的过量残留胞浆染成橘红色。
注意事项：1.所有染液均需过滤，需经常更换染液。
2.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
顶体蛋白检测试剂盒使用说明
UscnLife Science Inc.;;;;E91947Hu96T顶体蛋白(ACR)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)适用生物：人使用说明书仅供体外研究使用，不用于临床诊断!第7版（2011年11月修订）[预期应用]本试剂盒运用双抗体夹心ELISA法定量测定人精子中ACR含量。
[试剂盒内容][需自备的设备及试剂]1、450±10nm滤光片的酶标仪(建议仪器使用前提前预热)2、单道或多道微量加液器及吸头3、稀释样品的EP管4、蒸馏水或去离子水5、吸水纸6、盛放洗液的容器[试剂盒的储存及有效期]1、未开封的试剂盒：所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存。
请注意，收到试剂盒后请尽快将标准品、检测溶液A、检测溶液B以及96孔板保存于-20o C。
有效期为6个月。
2、使用后的试剂盒：剩余试剂仍需按照试剂瓶标签所示的温度保存，开封后的酶标板要加干燥剂后密封保存于-20o C，避免潮湿。
注意：试剂盒内酶标条可拆卸，按实验需求可分多次使用；使用后的剩余试剂盒建议在首次实验后1个月内使用完毕。
[标本的采集与保存]1、精子制备：筛选收集新鲜精液，置37℃水浴箱，待精液液化，将液化精液转移至离心管中进行离心，转速为2,000×g，离心10-15min，弃精浆，沉淀物中加生理盐水，洗涤、离心，重复3次，保留沉淀，经超声波超声粉碎，10-15min高速离心，取上清即可检测，或将上清置于-20o C或-80o C保存，但应避免反复冻融。
注意：1、以上标本均需密封保存，4o C保存应小于1周，-20o C不应超过1个月，-80o C不应超过2个月。
2、标本使用前应缓慢均衡至室温，不应加热使之融解。
[试剂准备]1、使用前将所有的试剂和标本缓慢均衡至室温(18-25o C)，试剂不能直接在37o C溶解。
2、标准品(液体)：每瓶标准品加入标准品稀释液0.4mL，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为10ng/mL。
Calcein-AM PI 活细胞 死细胞双染试剂盒说明书
Calcein-AM/PI 活细胞/死细胞双染试剂盒说明书货号：CA1630规格：500T保存：-20°C 避光干燥保存，一年有效。
产品内容：名称规格保存Calcein-AM Solution(2mM)50μL -20°C 避光干燥保存PI Solution （1.5mM ）150μL -20°C 避光干燥保存10×Assay Buffer 50mL -20℃保存，经常使用可放在4℃保存。
产品说明：Calcein-AM 是一种对活细胞进行荧光标记的细胞染色试剂，发绿色荧光（Ex=490nm,Em=515nm ）。
因其在传统的Calcein （钙黄绿素）基础上引入乙酰甲氧基甲酯（AM ）基团，增加了疏水性，使其能够轻易穿透活细胞膜。
一旦进入细胞后，Calcein-AM （本身不发荧光）被细胞内的酯酶剪切形成膜非渗透性的极性分子Calcein ，从而被滞留在细胞内并发出强绿色荧光。
与其它同类试剂（如BCECF-AM 和CFDA)相比，由于Calcein,AM 细胞毒性极低，是最适合用于活细胞染色的荧光探针，而且不会抑制任何的细胞功能，如增殖和淋巴球的趋化性。
由于死细胞缺乏酯酶，Calcein-AM 仅用于对活细胞的细胞生存能力测试和短期标记。
因此，Calcein-AM 常常与死细胞荧光探针如碘化丙啶（PI ）等联合使用，同时进行活细胞和死细胞的荧光双重染色。
碘化丙啶（Propidium iodide ，PI ）不能穿过活细胞的细胞膜，仅能穿过死细胞膜的无序区域而到达细胞核，并嵌入细胞的DNA 双螺旋从而产生红色荧光（Ex=535nm,Em=617nm ），因此PI 仅对死细胞染色。
由于Calcein 和PI-DNA 都可被490nm 激发，因此可用荧光显微镜同时观察活细胞和死细胞。
而用545nm 激发，仅可观察到死细胞。
本试剂盒的工作原理就在于Calcein-AM 和PI 的双重染料，来进行活细胞和死细胞的双重染色标记，从而进行活细胞和死细胞水平的分析。
蓝色荧光细胞核染色分析试剂盒产品说明书(中文版)
蓝色荧光细胞核染色分析试剂盒产品说明书（中文版）主要用途蓝色荧光细胞核染色分析试剂是一种旨在通过使用荧光染料DAPI与细胞核DNA特异性结合，并发出荧光检测信号，用于分析和观察细胞核形态或DNA含量以及双重染色或重叠染色定位的权威而经典的技术方法。
该技术经过精心研制、成功实验证明的。
其适用于各种细胞核（动物、人体、植物、昆虫等）的观察。
产品即到即用，性能稳定，荧光清晰。
技术背景作为细胞DNA染色剂之一的4,6-二咪基－4-联苯基吲哚（4,6-diamidino-2-phenylindole；DAPI）特异性地与DNA双螺旋的凹槽部分发生相互作用，从而与DNA的双链紧密结合。
结合后产生的荧光基团的吸收峰是358nm而散射峰是461nm，正好是UV（紫外光）的激发波长356nm，使得DAPI成为一种常用的荧光检测信号，并作为双重染色或重叠染色的主要染色剂之一。
产品内容清理液（Reagent A）毫升固定液（Reagent B）毫升扩张液（Reagent C）毫升染色液（Reagent D）毫升抗淬灭剂（Reagent E）毫升产品说明书1份保存方式保存固定液（Reagent B）、染色液（Reagent D）和抗淬灭剂（Reagent E）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；染色液（Reagent D）和抗淬灭剂（Reagent E）避免光照；有效保证6月用户自备微型台式离心机：用于悬浮细胞的操作盖玻片：用于染色后封片荧光显微镜：用于观察细胞核DNA染色实验步骤一、贴壁细胞染色1．准备1个细胞培养24孔板的待测细胞，每孔铺满率达70％（注意：可以使用载玻片，载玻片培养皿，35mm培养皿，和其它培养孔板，见注意事项6）2．小心抽掉细胞培养液3．小心加入xx微升清理液（Reagent A）4．小心抽掉清理液（Reagent A）5．小心沿着孔壁加入xx微升－20℃预冷的固定液（Reagent B），覆盖培养孔表面6．在4℃冰箱里孵育6分钟7．小心抽掉固定液（Reagent B）8．小心沿着孔壁加入xx微升清理液（Reagent A），覆盖培养孔表面9．在室温下孵育5分钟10．小心抽掉xx微升清理液（Reagent A）11．小心加入xx微升通透液（Reagent C），覆盖培养孔表面12．在室温下孵育5分钟13．小心抽掉xx微升通透液（Reagent C）14．小心加入xx微升清理液（Reagent A），覆盖培养孔表面15．小心抽掉xx微升清理液（Reagent A），空气中晾干（注意：由此步骤开始，用户可以进行抗体荧光染色或其它荧光染色）16．小心加入xx微升染色液（Reagent D），覆盖培养孔表面17．室温下孵育10分钟，避免光照18．小心抽掉xx微升染色液（Reagent D）19．小心加入xx微升清理液（Reagent A），覆盖培养孔表面20．即刻在倒置荧光显微镜下进行观察：激发波长350nm，散发波长460nm（细胞核呈现蓝色）二、悬浮细胞染色1．将悬浮细胞（1 X 106细胞）移入到1.5毫升离心管2．放进微型台式离心机离心10分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）3．小心抽掉上清液4．小心加入xx微升清理液（Reagent A），混匀细胞颗粒群5．放进微型台式离心机离心10分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）6．小心抽掉清理液（Reagent A）7．轻轻指弹，松动细胞颗粒群8．一滴一滴加入xx微升－20℃预冷的固定液（Reagent B），混匀细胞颗粒群9．在4℃冰箱里孵育6分钟10．放进微型台式离心机离心10分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）11．小心抽掉固定液（Reagent B）12．小心加入xx微升清理液（Reagent A），混匀细胞颗粒群13．在室温下孵育5分钟14．放进微型台式离心机离心10分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）15．小心抽掉xx微升清理液（Reagent A）16．小心加入xx微升通透液（Reagent C），混匀细胞颗粒群17．在室温下孵育5分钟18．放进微型台式离心机离心10分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）19．小心抽掉xx微升通透液（Reagent C）20．小心加入xx微升清理液（Reagent A），混匀细胞颗粒群21．放进微型台式离心机离心10分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）22．小心抽掉xx微升清理液（Reagent A）（注意：由此步骤开始，用户可以进行抗体荧光染色或其它荧光染色）23．小心加入xx微升染色液（Reagent D），混匀细胞颗粒群24．室温下孵育10分钟，避免光照25．放进微型台式离心机离心10分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）26．小心抽掉xx微升染色液（Reagent D）27．小心加入xx微升清理液（Reagent A），混匀细胞颗粒群28．放进微型台式离心机离心10分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）29．小心抽掉xx微升清理液（Reagent A）30．小心抽掉xx微升清理液（Reagent A），混匀细胞颗粒群31．移出5微升到载玻片上，放上盖玻片32．即刻在荧光显微镜下进行观察：激发波长350nm，散发波长460nm（细胞核呈现蓝色）三、载玻片染色1．准备1个细胞载玻片2．小心加上xx微升清理液（Reagent A）3．小心抽掉清理液（Reagent A）4．小心加上xx微升－20℃预冷的固定液（Reagent B），覆盖载玻片表面5．在4℃冰箱里孵育6分钟6．小心抽掉固定液（Reagent B）7．小心加上xx微升清理液（Reagent A），覆盖载玻片表面8．在室温下孵育5分钟9．小心抽掉xx微升清理液（Reagent A）10．小心加上xx微升通透液（Reagent C），覆盖载玻片表面11．在室温下孵育5分钟12．小心抽掉xx微升通透液（Reagent C）13．小心加上xx微升清理液（Reagent A），覆盖载玻片表面14．小心抽掉xx微升清理液（Reagent A），空气中晾干15．重复实验步骤13至14一次（注意：由此步骤开始，用户可以进行抗体荧光染色或其它荧光染色）16．小心加上xx微升染色液（Reagent D），覆盖载玻片表面17．室温下孵育10分钟，避免光照18．小心抽掉xx微升染色液（Reagent D）19．小心加上xx微升清理液（Reagent A），覆盖载玻片表面20．小心抽掉xx微升清理液（Reagent A）21．小心加上xx微升抗淬灭液（Reagent E）22．盖上盖玻片23．即刻在荧光显微镜下进行观察：激发波长350nm，散发波长460nm（细胞核呈现蓝色）注意事项1．本产品为100次（4个24孔培养板）和200次（载玻片）操作规格2．本产品友好使用于双重染色或重叠染色3．染色液（Reagent D）为半通透性染料4．操作时须戴手套5．操作时，避免污染母液6．本产品适合各种规格的培养细胞：载玻片，载玻片培养皿，35mm培养皿，和各种培养孔板，须相应调整试剂溶液：7．本产品可用于悬浮细胞或细胞脱离处理后染色8．本公司提供系列细胞核染色分析试剂产品质量标准1．本产品经鉴定性能稳定2．本产品经鉴定荧光清晰。
精子顶体酶活性检测对诊断男性不育症的价值分析
精子顶体酶活性检测对诊断男性不育症的价值分析发布时间：2022-07-27T02:34:42.512Z 来源：《医师在线》2022年4月7期作者：邓颖芸韦海燕覃宣富[导读]邓颖芸韦海燕覃宣富（广西河池市人民医院；广西河池547000）【摘要】目的：探究男性不育症诊断中应用精子顶体酶活性检测的临床价值。
方法：选择各种原因导致的男性不育症患者组成实验组，病例数300例，时间2021年1月至2021年8月，其中100例精液参数异常纳入实验1组，剩余100例精液参数正常纳入实验2组，另选同期健康体检可生育男性100例组成对照组，比较不同组别受检者精子顶体酶活性检测结果（精液顶体酶活性）。
结果：实验1组精液顶体酶水平显著低于实验2组和对照组，实验2组也显著低于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。
实验1组精液顶体酶活性低于实验2组和对照组，实验2组和对照组比较精液顶体酶活性明显更低，差异均有统计学意义（P＜0.05）。
结论：在男性不育症临床诊断中应用精子顶体酶活性检测具有很高的价值，可以通过精液顶体酶活性检测对男性不育症患者精子受精能力进行评价，且可对不育症患者精液参数异常情况进行定性，为男性不育症诊断提供准确依据，可进行推广使用。
【关键词】“男性不育症”指的是夫妇同居一年，在不采取避孕措施且性生活正常的条件下，无法使女性怀孕的疾病。
导致男性不育症的原因很多，一般情况下无法进行病因明确，常见的致病因素包括先天因素、内分泌异常、感染等[1]。
尽早确诊、尽早开始治疗可以获得理想的治疗效果。
顶体酶存在于精子头部顶体内膜与赤道膜之间。
当精子与卵母细胞结合后，精子头部发生顶体反应，顶体外膜破裂，顶体酶释放。
顶体酶是受精过程中重要的蛋白水解酶，可溶解卵母细胞周围的放射冠和透明带，使精子穿过透明带与卵细胞融合完成受精。
精子顶体酶活性降低可影响精子穿透卵母细胞透明带，从而导致不育。
除精子自身质量之外，严重的生殖系统感染，也可造成精子顶体酶活性降低。
诱发精子顶体反应检测试剂盒(钙离子载体诱发荧光染色法)产品技术要求华康
医疗器械产品技术要求编号：
诱发精子顶体反应检测试剂盒（钙离子载体诱发荧光染色法）
2.性能指标
2.1外观性状
试剂盒标签应印制清晰、无错误；试剂盒包装应清洁干净、无泄漏液体；试剂盒
组装应正确无误；试剂瓶内液体组分应无沉淀、无絮状物。
2.2装量
试剂盒液体组分标识量在15mL及以上的，其实际装量不得小于标识量的95%；
试剂盒液体组分标识量在15mL以下的，其实际装量不得小于标识量的90%。
2.3试剂酸碱度
精子提取液 pH 值范围 7.2～7.8
精子培养液 pH 值范围 7.2～7.8
荧光标记物溶解液 pH 值范围 7.2～7.6
2.4精密度
a)试剂盒批内变异系数CV%≤10%
b)试剂盒批间变异系数CV%≤15%。
精子膜表面凝集素受体定量试剂盒使用说明书
Spermatozoan Surface Lectin Receptor Quantitative Assay Kit(酶标记法)[原理]精子表面存在麦芽凝集素受体，外源性麦芽凝集素（WGA）有与麦芽凝集素受体结合的专一性。
辣根过氧化物酶(HRP)－WGA结合物，与精子膜表面糖萼中的唾液酸和N-乙酰葡糖胺结合，通过底物反应，使精子显色。
[试剂盒组成]1．精子洗液50ml×2瓶2．固定液2ml×1瓶3．浓缩洗涤液（10倍）50ml×2瓶4．酶结合物0.5ml×1瓶5．显色剂A 2ml×1瓶6．显色剂B 0.5ml×1瓶7．封固液2ml×1瓶8．特制载玻片（4孔）6块9．盖片6块[试剂准备]洗涤液配备以蒸馏水将浓缩洗涤液作10倍稀释（如：取浓缩洗涤液5ml，加蒸馏水45ml）。
稀释后溶液室温保存可用1个月。
[标本]新鲜液化精液，或-20℃贮存精液标本。
[操作方法](1) 计数待检精液标本精子密度。
(2) 1份液化的精液(约0.2ml)与5倍体积的精子洗液混合，室温500g离心5分钟,去上清液。
再加一定体积的精子洗液使精子重新均匀悬浮，500g离心5分钟，如此共洗涤3次。
(3) 最后一次洗涤完毕，弃上清液。
以精子洗液将精子重新均匀悬浮。
计数精子密度。
然后以精子洗液将精子密度调整至（10~20）×106/ml左右。
(4) 取此精子悬液5ul，均匀涂布于特制玻片涂片窗内，空气中自然干燥。
(5) 每个涂片窗内加入50ul固定液，室温固定10min。
(6) 以洗涤液轻轻冲洗载玻片5次，将整张特制载玻片置洗涤液中浸泡3min；换新洗涤洗，再浸泡3min，甩去玻片表面水份。
取一张清洁滤纸平放于台面，将特制载玻片塑膜面倒扣于滤纸上，吸去塑膜表面液体(注意勿触及涂片区域)。
(7)（勿使涂片组织干燥）每个涂片窗内加入20ul酶结合物,37℃湿盒（如：培养皿中放一张浸湿的滤纸）内孵育40min。
PH0532-Hoechst 33342PI 双染试剂盒使用手册
PH0532|Hoechst33342/PI双染试剂盒（Hoechst33342/PI Detection Kit）货号：PH0532规格：100T存储：4℃保存，有效期一年试剂组成规格保存Heochst33342染液 1.0mL4℃，避光Propidium Iodide（PI）500μL4℃，避光10×Buffer A10mL4℃注：Buffer A工作液配制用：双蒸水将10×Buffer A稀释10倍。
◆产品简介荧光染料Hoechst33342能少许进入正常细胞膜，使其染上低蓝色，而凋亡细胞的膜通透性增强，因此进入凋亡细胞中的Hoechst33342比正常细胞的多，荧光强度要比正常细胞中要高，此外，凋亡细胞的染色体DNA的结构发生了改变从而使该染料能更有效地与DNA结合，并且凋亡细胞膜上的p-糖蛋白泵功能受到损伤不能有效地将Hoechst33342排出到细胞外使之在细胞内积累增加等都使凋亡细胞的蓝色荧光增强。
而PI染料是不能进入细胞膜完整的正常细胞和凋亡细胞中，即活细胞对PI染料拒染，而坏死细胞由于膜完整性在早期即已破损，可被PI染料染色。
根据这些特性，用Hoechst33342结合PI染料对凋亡细胞进行双染色，就可在流式细胞仪上将正常细胞、凋亡细胞和坏死细胞区别开来。
在双变量流式细胞仪的散点图上，这三群细胞表现分别为：正常细胞为低蓝色/低红色（Hoechst33342+/PI+），凋亡细胞为高蓝色/低红色（Hoechst33342++/PI+），坏死细胞为低蓝色/高红色（Hoechst33342+/PI++）。
◆注意事项【试剂盒以外需自备仪器和试剂】荧光显微镜或流式细胞仪、低速离心机、微量移液器、1.5mL Microtube、载玻片、盖玻片1、在红色荧光对兰色荧光散点图上，还可见到细胞凋亡区向细胞坏死区迁移的轨迹，可能是凋亡细胞的DNA进一步降解的缘故。
2、用Heochst33342染料与细胞孵育的时间不宜过长，一般控制在20min之内为宜。
精子顶体酶活性定量测定试剂盒使用说明书（固相BAPNA法）
精子顶体酶活性定量测定试剂盒使用说明书（固相BAPNA法）【产品名称】通用名称：精子顶体酶活性定量测定试剂盒（固相BAPNA法）商品名称：SpermFunc TM Acrosin英文名称：Kit for determination of human spermatozoan acrosin activity【包装规格】 30测试/盒【预期用途】定量检测人类精子顶体酶的活性。
【检验原理】固相BAPNA法。
以高分子聚合物将待测精子固着于聚四氟乙烯膜（PTFE）表面，通过特制的反应装置控制反应液与PTFE表面精子的接触与分离，达到实现检测精子顶体酶和终止反应的目的。
检测被固相捕获精子的精氨酸酰胺酶活性，精子顶体内的精氨酸酰胺酶活性可反映全部顶体酶的活性。
Nα-苯甲酰-DL-精胺酸-ρ-硝酰基苯胺（BAPNA）在精氨酸酰胺酶的作用下，分解产生黄色的硝酰基苯胺，通过测定硝酰基苯胺的产量推算出精氨酸酰胺酶的活性。
【主要组成成份】反应装置 30套包括PTFE管、离心管和底盖各30个5×精子浓缩洗液 1瓶50ml 含4.5%氯化钠溶液缓冲液 45管 0.8ml/管pH7.4 HEPES缓冲液底物液 1瓶 10ml 含6mg/ml BAPNA吸光度转换液 1瓶 10ml 含umol/L 4-硝基酚的氢氧化钠溶液质控终止液 1瓶 0.15ml 含83mg/ml苯甲脒泡沫板 1块微孔板 8孔/条 12条使用说明：不同批号试剂盒中各组份可以互换使用。
【储存条件及有效期】1．储存条件底物液置于－20℃保存，其余试剂须避光放2－8℃保存；反应装置的PTFE管须严格防潮包装后放2－8℃保存；泡沫板、微孔板、反应装置的底盖可在室温环境下保存。
2．有效期：18个月。
底物液置于2-8℃保存可使用3个月。
【适用仪器】1. 本试剂盒适用仪器：酶标比色仪（配有405nm波长滤光片）或BRED自动生殖医学生化免疫分析仪。
2. 操作过程中用到的其他设备：1）水平式低速离心机4）24℃恒温箱2）精子计数板 5）－20℃冷柜3）普通光学显微镜6）2－8℃药品保存箱3. 其他需要但未提供的材料1）精液采集装置5）巴氏吸管2）20ul-200ul数字可调移液枪和一次性吸头6）一次性使用手套3）100ul-1000ul数字可调移液枪和一次性吸头7）液化剂（需另购）4）15ml锥形离心管8）质控品（需另购）【样本要求】1．受试者须禁欲2-7天，通过手淫法或用特制的精液采集套以性交方式留取全部精液标本。
精子形态分析和染色
精子形态分析和染色
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精子细胞形态学检验
• 1、正常精子形态：正常在精液中占15% • (5版)参考下限为：4% • 2、畸形精子：头部形状、大小异常；体部
异常；尾部异常。 • 临床意义：精子形态异常与生殖系统感染、
外伤、雄激素改变、化学药品中毒及遗传 原因相关。
精子形态分析和染色
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• 3、生精细胞、精原、初级精母、次级精母、 精子细胞。
精子形态分析和染色
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正常形态精子概念
• 把“具备潜在受精能力精子”（亚群）外 观作为形态正常标准。
• 人为设定临界标准，要求“临界形态精子 都是异常”。
精子形态分析和染色
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操作前准备
• 一侧有磨砂载玻片 • 盖玻片（24mmX50mm） • 10uL移液器及吸头 • 纱布或纸巾 • 记号笔 • 巴氏染液或Diff染液
精子形态分析和染色
第13页
涂片方法
• 充分混匀待涂片精液标本，依据精子浓度，用移 液器去5~10uL精液滴在载玻片一端，马上用第二 张载玻片非磨砂端以45°角（角度越小，涂片越 薄）沿第一张载玻片表面移动并接触精液滴，然 后沿载玻片长轴迟缓拖回拉片（约一秒；速度越 快，涂片越厚），制成一张涂片。
精子形态分析和染色
第14页
• 对于高粘稠或低密度或充满碎屑精液：稀释精浆 或离心去精浆。
• 方法：取0.2~0.5mL精液，加10mL生理盐水， 800g离心10分钟，除去大部分上清液，轻轻拍打 试管，使精子团重新混悬于剩下上清液中。
• 必要时可加生理盐水重复洗涤一次。
• 洗涤后精子浓度在20-50X106/ml为好。
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12-2
精子形态分析和染色
矿产
矿产资源开发利用方案编写内容要求及审查大纲
矿产资源开发利用方案编写内容要求及《矿产资源开发利用方案》审查大纲一、概述
㈠矿区位置、隶属关系和企业性质。
如为改扩建矿山, 应说明矿山现状、
特点及存在的主要问题。
㈡编制依据
(1简述项目前期工作进展情况及与有关方面对项目的意向性协议情况。
(2 列出开发利用方案编制所依据的主要基础性资料的名称。
如经储量管理部门认定的矿区地质勘探报告、选矿试验报告、加工利用试验报告、工程地质初评资料、矿区水文资料和供水资料等。
对改、扩建矿山应有生产实际资料, 如矿山总平面现状图、矿床开拓系统图、采场现状图和主要采选设备清单等。
二、矿产品需求现状和预测
㈠该矿产在国内需求情况和市场供应情况
1、矿产品现状及加工利用趋向。
2、国内近、远期的需求量及主要销向预测。
㈡产品价格分析
1、国内矿产品价格现状。
2、矿产品价格稳定性及变化趋势。
三、矿产资源概况
㈠矿区总体概况
1、矿区总体规划情况。
2、矿区矿产资源概况。
3、该设计与矿区总体开发的关系。
㈡该设计项目的资源概况
1、矿床地质及构造特征。
2、矿床开采技术条件及水文地质条件。
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精子活力和顶体形态双重荧光染色试剂盒产品说明书（中文版）
主要用途
精子活力和顶体形态双重荧光染色试剂是一种旨在使用赫斯特33258和荧光素标记的花生凝集素双重荧光染色技术，分析精子活力以及顶体状态的权威而经典的技术方法。
该技术经过精心研制、成功实验证明的。
适用于各种动物或人体精子细胞以及冻存精子细胞的检测。
产品严格无菌，即到即用，操作简便，性能稳定，荧光清晰。
技术背景
在男科学（Andrology）中，精子（spermatozoa）分析提供了精子生成（spermatogenesis）、精子寿命、以及生育能力的基础信息。
其中精子的活力（vitality）、运动能力（motility）、授精潜力（fertilizing potential）、膜结构或染色质结构完整性（integrity）、顶体反应（acrosomal reaction）功能的评价是精子分析的重要指标，也是决定人工受孕或体外授精（in vitro fertilization；IVF）的重要参数。
其中顶体反应，是指当精子接近卵子实施授精时，精子头部前半端的帽状结构顶体，释放出溶解酶，以便精子和卵子的膜融合。
顶体反应测试是一项稳定的精子功能参数，可以用于预测受精成功率。
因此顶体的结构完整性（intact）是评价的主要标志，也是不育症和避孕药物研究的对象。
使用DNA敏感性荧光染料赫斯特33258（Hoechst 33258）和荧光素标记的花生凝集素（Isothiocyano-fluoresceinated peanut Arachis hypogaea agglutinin；PNA-FITC）双重荧光染色技术，是精子活力，以及精子头部顶体状态分析和授精效率评价的最常用的方法。
首先使用赫斯特33258染色，分析精子活力，基于赫斯特33258具有有限的膜通透性特点，受到活体精子细胞（包括游动性和非游动性精子）的排斥，而容易进入死亡精子细胞。
其次使用荧光素标记的花生凝集素染料，与顶体外膜糖蛋白上的半乳糖残基（β-D-galactosyl residue）的结合，显示完整性（未反应性unreacted）顶体，同时可以应用于受精时的精卵反应。
双染的作用，以帮助区分生理性反应性顶体缺失（loss）或病理性退行性顶体缺失。
通过常用的荧光显微镜（激发波长488nm，散发波长530nm）便可清晰观察到绿色顶体状态（status）。
产品内容
保存液（Reagent A）毫升
染色液A（Reagent B）微升
清理液（Reagent C）毫升
固着液（Reagent D）毫升
染色液B（Reagent E）毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存在－20℃冰箱里；染色液A和B（Reagent B和E）避免光照，有效保证6月
用户自备
1.5毫升离心管：用于样品操作的容器
微型台式离心机：用于样品染色操作的容器
血细胞计数器：用于细胞计数
载玻片和盖玻片：用于精子细胞爬片
（共聚焦）荧光显微镜：用于观察染色的精子细胞
实验步骤
1．移取新鲜获得的1毫升精液（48小时内）到1.5毫升离心管
2．放进37℃培养箱孵育30分钟
3．放进微型台式离心机离心5分钟，速度为600g
4．小心抽去上清液
5．加入xx毫升保存液（Reagent A），混匀颗粒群
6．在血细胞计数器上进行精子细胞计数，并调整到2 X 107精子细胞/毫升（注意：1小时内完成检测）7．移取100微升精子细胞到新的1.5毫升离心管
8．加入xx微升染色液A（Reagent B），混匀
9．室温下孵育5分钟，避免光照
10．放进微型台式离心机离心5分钟，速度为600g
11．小心抽去上清液
12．加入xx微升清理液（Reagent C），混匀颗粒群
13．放进微型台式离心机离心5分钟，速度为600g
14．小心抽去上清液
15．加入xx微升保存液（Reagent A），混匀颗粒群
16．即刻移取20微升到洁净的载玻片一端
17．用盖玻片或另一个载玻片推片
18．置于空气中凉干
19．加上xx微升预冷的固着液（Reagent D），覆盖样品表面
20．室温下孵育1分钟
21．小心抽去固着液
22．置于空气中凉干
23．小心加上xx微升染色液B（Reagent E），覆盖样品表面
24．室温下孵育20分钟，避免光照
25．小心抽去染色液
26．小心加上xx微升清理液（Reagent C），覆盖样品表面
27．小心抽去清理液
28．盖上盖玻片或封片液
29．即刻（注意：不得迟于48小时）在（共聚焦）荧光显微镜（1000X油镜）下观察并计数（注意：每个视野计数200个精子）
观察蓝色荧光—染色液A（Reagent B）：滤波器激发波长350nm，散发波长460nm ――可见亮蓝白色荧光，表明死亡精子细胞；暗淡蓝色荧光，表明活体精子
观察绿色荧光—染色液B（Reagent E）：滤波器激发波长490nm，散发波长530nm ――可见绿色荧光，
表明精子顶体区域
30．分析结果
注意事项
1．本产品为20次操作
2．操作时须戴手套
3．样品检测前，建议在血细胞计数器上进行精子细胞计数
4．精子细胞计数时乘上稀释倍数104。
标准血细胞计数器（Hemocytometer）的计算方法是：1毫米方块的细胞计数X 104（稀释倍数）＝实际细胞数/毫升
5．染色完成后，即刻进行检测分析
6．完整顶体（intact/whole acrosome）参考图像如下：
7．顶体赤道部分（Equatorial segment）参考图像如下：
8．本公司提供系列发育生物学相关检测试剂产品
质量标准
1．本产品经鉴定性能稳定
2．本产品经鉴定荧光清晰。