F-7000荧光分光光度计操作规程和注意事项(含原理图)
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F-7000荧光分光光度计使用操作步骤
1、开机:
(1)开启计算机。
(2)开启仪器主机电源。按下仪器主机左侧面板下方的黑色按钮(POWER)。同时,观察主机正面面板右侧的Xe LAMP 和RUN指示灯依次亮起来,都显示绿色。
2、计算机进入Windows XP视窗后,打开运行软件。
(1)双击桌面图标(FL Solution 2.1 for F-7000)。主机自行初始化,扫描界面自动进入。
(2)初始化结束后,须预热15-20分钟,按界面提示选择操作方式。
3、测试模式的选择:波长扫描(wavelength scan)
(1)点击扫描界面右侧“Method”。
(2)在“General”选项中的“Measurement”选择“wavelength scan”测量模式。
(3)在“Instrument”选项中设置仪器参数和扫描参数。
主要参数选项包括:
①选择扫描模式“Scan Mode”:Emission/Excitation/Synchronous(发射光谱、激发光谱和
同步荧光)。
②选择数据模式“Data Mode”:Fluorescence/Phosphprescence/Luminescence(荧光测量、磷
光测量、化学发光)。
③设定波长扫描范围。
A、扫描荧光激发光谱(Excitation):需设定激发光的起始/终止波长(EX Start/End WL)
和荧光发射波长(EM WL);
B、扫描荧光发射光谱(Emission):需设定发射光的起始/终止波长(EM Start/End WL)
和荧光激发波长(EX WL);
C、扫描同步荧光(Synchronous):需设定激发光的起始/终止波长(EX Start/End WL)
和荧光发射波长(EM WL)。
④选择扫描速度“Scan Speed”(通常选240nm/min)。
⑤选择激发/发射狭缝(EX/EM Slit)。
⑥选择光电倍增管负高压“PMT V oltage”(一般选700V)。
⑦选择仪器响应时间“Response”(一般选Auto)。
⑧选择“Report”设定输出数据信息、仪器采集数据的步长(通常选0.2nm)及输出数据
的起始和终止波长(Data Start/End)。
(4)参数设置好后,点击“确定”。
4、设置文件存储路径
(1)点击扫描界面右侧“Sample”。
(2)样品命名“Sample name”。
(3)选中“□Auto File”,打√。可以自动保存原始文件和TXT格式文本文档数据。
(4)参数设置好后,点击“OK”。
5、扫描测试
(1)打开盖子,放入待测样品后,盖上盖子。(请勿用力)。
(2)点击扫描界面右侧“Measure”(或快捷键F4),窗口在线出现扫描谱图。
6、数据处理
(1)选中自动弹出的数据窗口。
(2)选择“Trace”,进行读数并寻峰等操作。
(3)上传数据。
7、关机顺序(逆开机顺序实施操作):
(1)关闭运行软件FL Solution 2.1 for F-7000,弹出窗口,如图6。
(2)选中“○Close the lamp,then close the monitor windows?”,打“⊙”。
(3)点击“Yes”。窗口自动关闭。同时,观察主机正面面板右侧的Xe LAMP指示灯暗下来,而RUN指示灯仍显示绿色。
(4)约十分钟后,关闭仪器主机电源,即按下仪器主机左侧面板下方的黑色按钮(POWER)。(目的是仅让风扇工作,使Xe灯室散热)。
(5)关闭计算机。
注意事项
(1)注意开机顺序。步骤1-(2)若是未先开主机,则程序会抓取不到主机讯号。
(2)注意关机顺序。
(3)为延长仪器使用寿命,扫描速度、负高压、狭缝的设置一般不宜选在高档。
(4)关机后必须半小时(等氙灯温度降下)方可重新开机。
仪器原理
荧光产生原理:
荧光物质分子吸收了特定频率辐射
后,由基态跃迁至第一电子激发态(或更
高激发态)的任一振动能级,在溶液中这
种激发态分子与溶剂分子发生碰撞,以热
的形式损失部分能量后,而回到第一电子
激发态的最低振动能级(无辐射跃迁)。
然后再以辐射形式去活化跃迁到电子基态
的任一振动能级,便产生荧光。由于无辐
射跃迁的几率大,因此分子荧光波长常常
比激发光长。激发光源的波长通常是在紫
外区,荧光也可能在紫外区,但更多是在
可见区。相对于基态和激发态两个最低振
动能级之间的跃迁所产生的荧光称为共振
荧光,此时吸收光谱与荧光光谱重叠。
(1)荧光光谱的形状和激发光波长无
关,这是因为荧光的产生是由第一电子激
发态的最低振动能级开始的而和荧光物质
分子原来被激发至哪一个能级无关;(2)
荧光光谱的形状和吸收光谱的形状十分相
似,且互为镜像。因为吸收光谱反映的是
第一电子激发态的能级分布情况;而荧光
光谱反映的是基态能级的分布情况,而基
态中能级的分布和第一电子激发态中的能
级分布是相类似的,所以荧光光谱的形状
与吸收光谱十分相似。又因为在相当于由
基态中最低振动能能及跃迁到第一电子激
发态各振动能级而显示的荧光峰中,基态
的振动能级越高,则两个能级的差距越小,
即荧光波长越长。所以前后两者不但形状
相似而且互为镜像。